• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低聚糖和多酚結(jié)合偏最小二乘判別分析鑒別油菜蜜產(chǎn)地

    2019-07-05 02:13:28宋洪波陳蘭珍
    食品科學(xué) 2019年12期

    佘 僧,李 熠,宋洪波,陳蘭珍,*

    (1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所,北京 100093;2.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350002;3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室(北京),北京 100093)

    油菜屬于十字花科中的一種草本植物,環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)、花期長、種植范圍廣。由2016年國家統(tǒng)計局公布的數(shù)據(jù)顯示:我國油料產(chǎn)量為3 400.05萬 t,油菜籽產(chǎn)量為1 312.80萬 t,油菜籽播種面積達(dá)6 622.80千 公頃[1]。油菜種植在湖北、江蘇、青海、四川等23 個省份基本全部覆蓋,其中湖北屬于我國最大的油菜籽生產(chǎn)區(qū),江蘇屬于我國傳統(tǒng)油菜籽主產(chǎn)區(qū),青海隨著新農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)和旅游資源的開發(fā),油菜的種植面積也在不斷的擴(kuò)增[2]。我國主導(dǎo)的蜂蜜采集仍屬于傳統(tǒng)的“追花奪蜜”模式,油菜不僅是我國重要的油料資源,也是優(yōu)質(zhì)的蜜源植物之一。我國油菜花開花時間從三月份的云貴高原、四川盆地至湖北、安徽等長江沿岸,四月份江蘇沿海直至七、八月份青海、內(nèi)蒙古草原,一直有大面積油菜花盛開。廣闊的油菜種植面積和跨越半年的油菜花期,提供了龐大的油菜蜜源,油菜蜜也成為了我國目前產(chǎn)量最高和出口量最大的單花蜜品種。自2007年中國農(nóng)產(chǎn)品地理標(biāo)志管理條令正式發(fā)布后,具有名優(yōu)產(chǎn)地標(biāo)識的產(chǎn)品被偽冒產(chǎn)品銷售給消費者的現(xiàn)象愈演愈烈,嚴(yán)重?fù)p害了優(yōu)質(zhì)品牌的信譽和消費者的信任,使得蜂蜜的產(chǎn)地溯源研究也變得更加迫切和需要[3-4]。油菜蜜作為我國單花蜜品種中蜜源植株分布最廣,氣候、地理環(huán)境最豐富的單花蜜品種,對研究蜂蜜的產(chǎn)地溯源具有重要的借鑒和參考價值。

    蜂蜜的產(chǎn)地溯源技術(shù)主要包括穩(wěn)定同位素技術(shù)、核磁共振技術(shù)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)等[5-6]。色譜技術(shù)可定性分析樣品中營養(yǎng)物質(zhì)成分,結(jié)合質(zhì)譜后可獲得營養(yǎng)成分的定量結(jié)果,對于分析樣本的特定物質(zhì)含量具有優(yōu)勢性。本實驗采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定油菜蜜中的18 種多酚類物質(zhì),氣相色譜-質(zhì)譜測定油菜蜜中的6 種低聚糖結(jié)合偏最小二乘判別分析(partial least square-discrimination analysis,PLS-DA)實現(xiàn)3 個油菜蜜產(chǎn)區(qū)的地理鑒別。低聚糖是通過2~4 個糖苷鍵將單糖連接而成小分子聚合物[7]。低聚糖含量占蜂蜜營養(yǎng)物質(zhì)的60%~80%,屬于蜂蜜中最主要的成分[8]。蜂蜜中的功能性低聚糖甜度低,耐熱耐酸強(qiáng),不經(jīng)過胃腸消化便可直接被人體吸收利用,不增加血糖、血脂且改善腸胃吸收消化,提高免疫力等功效[9]。Da Costa Leite等[10]通過測定70 個巴西不同植物蜜源蜂蜜品種的10 種低聚糖物質(zhì),研究發(fā)現(xiàn)松二糖、麥芽三糖、麥芽糖具有顯著的品種鑒別能力。多酚廣泛存在于植物的根、葉、果實當(dāng)中,是植物次生代謝產(chǎn)物。蜂蜜中的多酚全部來源于蜜源植物。多酚類化合物是指分子結(jié)構(gòu)中有若干個酚羥基,主要包括苯酚、酚酸和黃酮類化合物[11-13],具有清除自由基的抗氧化活性功效,對心血管病、動脈硬化等疾病具有預(yù)防作用[14-17]。Ku?等[18]通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析6 種單花蜜中多酚含量及其抗氧化活性差異,該研究表明石楠蜜和蕎麥蜜在6 種蜂蜜中抗氧化活性最高,且不同品種間的多酚含量具有顯著性差異。Baltrusaityte等[19]通過對35 份蜂蜜樣本中多酚提取物清除自由基能力進(jìn)行實驗,研究發(fā)現(xiàn)蜂蜜中多酚清除自由基能力平均在43%~95.7%之間,且抗氧化物質(zhì)的含量與酚類化合物的含量呈顯著相關(guān)。

    目前,蜂蜜中低聚糖和多酚的研究,主要在于其營養(yǎng)醫(yī)藥價值、品種鑒別等方面,鮮見有關(guān)于兩者相結(jié)合對于產(chǎn)地鑒別效果的研究報道。因此本實驗采集湖北鐘祥市、江蘇鹽城市、青海剛察縣3 個不同地理環(huán)境的油菜蜜樣本,通過定量分析3 個產(chǎn)地油菜蜜中低聚糖和多酚兩個重要營養(yǎng)指標(biāo)的含量差異,并結(jié)合PLS-DA進(jìn)行產(chǎn)地溯源研究,為蜂蜜的產(chǎn)地溯源研究提供方法參考和理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    油菜蜜樣本采自湖北鐘祥市(ZX)、江蘇鹽城市(YC)、青海剛察縣(GC)3 個不同地理來源的油菜主產(chǎn)區(qū)(表1)。3 個采樣地點的選擇具有顯著代表性,ZX(n=12)屬于內(nèi)陸地區(qū),位于我國第2階梯高度,屬于亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候區(qū);YC(n=13)地處黃海入???,位于我國第1階梯高度,屬于溫帶海洋性氣候區(qū);GC(n=26)地處青藏高原,位于我國第3階梯高度,屬于高原大陸性氣候區(qū)。油菜植株均屬于甘藍(lán)型油菜,蜜蜂種類屬于意大利蜂;所有樣本均采自于油菜花盛花期,蜂場現(xiàn)場采集的樣本。油菜蜜樣本收集于250 mL玻璃瓶,封口膜密封,待測前貯存在4 ℃。

    表1 樣本來源信息Table 1 Information about different geographical origins of rapes honey samples

    去離子水(電阻率18.2 MΩ·cm) 美國Agilent公司;乙腈、甲醇、甲酸、氨水、鹽酸羥胺均為國產(chǎn)分析純;吡啶、β-苯基葡萄糖苷 北京百靈威科技有限公司;HMDS+TMS+吡啶、麥芽酮糖(純度≥98.0%)、松二糖(純度≥98%)、蔗果三糖(純度≥97.0%)、帕拉金糖(純度≥95.0%)、異麥芽糖(純度≥97%)、吡喃基葡蔗糖(純度≥97%)、沒食子酸(純度≥98.0%)、原兒茶酸(純度≥98.0%)、對羥基苯甲酸(純度≥98.0%)、咖啡酸(純度≥98.0%)、對香豆酸(純度≥98.0%)、阿魏酸(純度≥98.0%)、蘆?。兌取?8.0%)、苯甲酸(純度≥98.0%)、楊梅酮(純度≥98.0%)、桑色素(純度≥98.0%)、槲皮素(純度≥98.0%)、柚皮苷(純度≥98.0%)、芹菜素(純度≥98.0%)、山柰素(純度≥98.0%)、柯因(純度≥98.0%)、松屬素(純度≥98.0%)、咖啡酸苯乙酯(純度≥98.0%)、高良姜素(純度≥98.0%) 美國Sigma-Aldrich公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Milli-Q型純水器 美國Millipore公司;PHS-3E pH計上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;微量移液槍 德國Eppendorf公司;Vortex-Genie 2渦旋儀 美國Scientific Industry公司;PL203電子天平 美國Mettler-Toledo公司;QP2010-PIUS氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 日本Shimadzu公司;6460高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 美國Agilent公司。

    1.3 方法

    1.3.1 低聚糖測定

    油菜蜜中6 種低聚糖含量的測定方法參考文獻(xiàn)[20-21]方法。稱取油菜蜜樣本0.5 g于25 mL離心管中,置于40 ℃水浴鍋中溶解完全。隨后在溶解液中加入25 mL 80%乙醇溶液,攪拌至溶解完全,10 000 r/min離心10 min。取上清液100 μL,50 ℃氮氣吹干,置于60 ℃烘箱烘干,加入20 μL β-苯基葡萄糖苷(0.25 mg/mL,溶于吡啶)。加入200 μL 2.0%鹽酸羥氨溶液,70 ℃反應(yīng)30 min,然后加入衍生劑HMDS+TMS+吡啶300 μL,70 ℃反應(yīng)40 min,以4 ℃、10 000 r/min離心5 min,取上清液待測。

    1.3.2 多酚測定

    油菜蜜中18 種多酚含量的測定參考文獻(xiàn)[19,22-23]方法。稱取蜂蜜樣本5.0 g,置于50 mL離心管中,加入30 mL鹽酸溶液。將離心管置于渦旋儀上徹底溶解后,10 000 r/min離心10 min,取上清液等待固相微萃取。首先用甲醇和鹽酸溶液活化Oasis HLB固相萃取柱,然后將樣本上清液倒入已經(jīng)活化后的Oasis HLB固相萃取柱,隨后以純水清洗萃取柱。清洗結(jié)束后以10 mL甲醇洗脫多酚類物質(zhì)。洗脫液在40 ℃氮吹干,用1.0 mL甲酸-乙腈(7∶3,V/V)混合液溶解。將復(fù)溶液0.22 μm濾膜過濾后放入1.5 mL進(jìn)樣瓶中,上機(jī)前待測。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    每個實驗樣本都預(yù)備3 個平行,3 次測定值差值不超過0.02,以均值作為最后分析數(shù)據(jù)。利用SPSS v.17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和主成分分析(principal component analysis,PCA)[24]。數(shù)據(jù)服從于正態(tài)分布且齊次,單因素方差分析被用于研究不同產(chǎn)地油菜蜜低聚糖和多酚含量的顯著性差異,在α=0.05的置信區(qū)間服從Duncan檢測,數(shù)據(jù)分析的結(jié)果以 ±s的形式表示。利用PCA不同參數(shù)的載荷因子得分率,并利用Origin v.8.5軟件繪制柱形圖。利用SIMCA v.17.0軟件進(jìn)行PLS-DA[25]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 低聚糖含量分析

    油菜蜜中含有多種低聚糖物質(zhì),對ZX、YC、GC 3 個產(chǎn)地油菜蜜中含量較高的麥芽酮糖、松二糖、帕拉金糖、異麥芽糖、蔗果三糖、吡喃基葡蔗糖6 種低聚糖進(jìn)行研究。由表2可知,ZX、YC、GC 3 個產(chǎn)地的油菜蜜樣本中6 種低聚糖含量均顯示:松二糖>麥芽酮糖>異麥芽糖>帕拉金糖>蔗果三糖>吡喃基葡蔗糖。本實驗研究結(jié)果顯示油菜蜜中6 種功能性低聚糖,松二糖的含量最高,ZX、YC、 GC 3 個產(chǎn)地樣本中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(1.251±0.05)%、(1.344±0.03)%、(2.505±0.07)%、(0.027±0)%、(0.026±0.01)%、(0.128±0)%;吡喃基葡蔗糖的含量相對偏低,分別為(0.027±0)%、(0.026±0.01)%、(0.128±0)%。其次,3 個地區(qū)油菜蜜中的低聚糖含量存在一定差異,吡喃基葡蔗糖的含量為GC>ZX>YC;麥芽酮糖、松二糖、帕拉金糖、異麥芽糖、蔗果三糖5 種低聚糖的含量為GC>YC>ZX。單因素方差分析的結(jié)果顯示:麥芽酮糖、帕拉金糖、異麥芽糖、蔗果三糖、吡喃基葡蔗糖5 種低聚糖,GC與ZX、YC差異顯著,ZX與YC差異不顯著;ZX、YC、GC的松二糖含量差異顯著。

    表2 不同產(chǎn)地油菜蜜中低聚糖的方差分析Table 2 ANOVA of oligosaccharide contents of rape honey from different geographical origins%

    2.2 多酚含量分析

    本研究通過對油菜蜜中含量較高的18 種多酚類物質(zhì)進(jìn)行產(chǎn)地差異性研究分析。酚酸物質(zhì)分別包括:沒食子酸、原兒茶酸、羥甲基苯甲酸、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸、蘆丁、苯甲酸、楊梅酮、桑色素、槲皮素、柚皮苷、芹菜素、山柰酚、柯因、松屬素、高良姜素、咖啡酸苯乙酯。由表3可知,不同的多酚物質(zhì)其含量在油菜蜜中差異較大,3 個產(chǎn)地油菜蜜中18 種多酚類物質(zhì)含量的測定結(jié)果顯示:對羥基苯甲酸>苯甲酸>咖啡酸>松屬素>柯因>山柰酚>原兒茶酸>槲皮素>蘆丁>柚皮苷>咖啡酸苯乙酯>高良姜素>阿魏酸>桑色素>芹菜素>沒食子酸>楊梅酮。ZX、YC和GC 3 個產(chǎn)地的油菜蜜樣本中對羥基苯甲酸的含量最高,分別可達(dá)到(68.172±2.76)、(46.22±1.7)、(55.701±0.83)μg/100 g;其次是苯甲酸的含量,分別可達(dá)到(55.658±0.91)、(40.283±1.78)、(31.137±1.2)μg/100 g;此外,油菜蜜的18 種多酚類物質(zhì)含量最低的有芹菜素、沒食子酸、楊梅酮等。3 個地區(qū)油菜蜜樣本中芹菜素含量分別為(0.161±0.01)、(0.019±0)、(0.113±0.01)μg/100 g;沒食子酸含量分別為(0.14±0.01)、(0.117±0.01)、(0.108±0)μg/100 g;楊梅酮含量分別為(0.034±0)、(0.013±0.01)、(0.024±0)μg/100 g。

    ZX、YC和GC 3 個地區(qū)油菜蜜中多酚的單因素方差分析結(jié)果顯示:油菜蜜中原兒茶酸、對羥基苯甲酸、對香豆酸、阿魏酸、苯甲酸、楊梅酮、槲皮素、柚皮苷、芹菜素、山柰酚、柯因、松屬素的多酚含量,不同產(chǎn)地間存在顯著差異性;沒食子酸和蘆丁的含量,青海與湖北、江蘇存在顯著性差異,ZX與YC無顯著性差異;咖啡酸含量,YC與ZX、GC存在顯著性差異,ZX與GC無顯著性差異;桑色素、高良姜素,ZX與YC、GC存在顯著性差異,YC與GC無顯著性差異。綜合而言,本研究中ZX的多酚類物質(zhì)含量略高于YC、GC。

    2.3 PCA結(jié)果

    圖1 PCA的載荷因子得分圖Fig. 1 Loading plots of principal component analysis

    PCA是一種無監(jiān)督分析模式,目前廣泛應(yīng)用于食品、化學(xué)、生物、數(shù)理統(tǒng)計分析等研究領(lǐng)域[26]。本實驗利用SPSS軟件對湖北、江蘇、青海3 個產(chǎn)地油菜蜜中6 種低聚糖和18 種多酚類物質(zhì)進(jìn)行PCA研究。PCA中累積貢獻(xiàn)率越高則,說明其對于不同產(chǎn)地油菜蜜的鑒別程度越高[27]。本研究中前兩個主成分特征根值大于1,PC1、PC2、PC3貢獻(xiàn)率分別為55.51%、21.80%、3.99%,前3 個主成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)到81.3%。圖1顯示,PC1中多酚類物質(zhì)全部都為正值,其中原兒茶酸、松屬素、桑色素、槲皮素、柚皮苷、柯因最具有地理判別特征性。PC2中咖啡酸、咖啡酸苯乙酯、芹菜素、吡喃基葡蔗糖、阿魏酸、麥芽酮糖、松二糖、蔗果三糖的地理特征性最為顯著,其中沒食子酸、對香豆酸、苯甲酸、柚皮苷4 種酚酸類物質(zhì)均為負(fù)相關(guān)性。低聚糖對于PC1無貢獻(xiàn)率,在PC2中低聚糖的貢獻(xiàn)率較高。綜合而言,在產(chǎn)地判別率中,多酚類物質(zhì)的產(chǎn)地判別能力較為顯著。同時,低聚糖也是一個重要的輔助參數(shù)。

    2.4 PLS-DA結(jié)果

    圖2 油菜蜜中PLS-DA產(chǎn)地溯源模型得分圖Fig. 2 PLS-DA score plot for geographical traceability of rape honey

    本實驗采用油菜蜜中低聚糖和多酚總計24 個參數(shù)結(jié)合PLS-DA對ZX、YC和GC 3 個不同地理來源的油菜蜜樣本進(jìn)行產(chǎn)地鑒別研究。由圖2可知,湖北、江蘇、青海3 個地區(qū)的油菜蜜樣本完全分離,分類效果非常好;且樣本分布集中,鑒別率均為100%。PLS-DA模型潛變量1的R2X(自變量擬合指數(shù))、R2Y(因變量擬合指數(shù))、Q2(模型預(yù)測精度)以及特征根值分別為0.553、0.497、0.493、13.3;潛變量2的R2X、R2Y、Q2以及特征根值分別為0.773、0.975、0.97、5.29;潛變量3的R2X、R2Y、Q2以及特征根值分別為0.798、0.981、0.967、0.603。根據(jù)R2X、R2Y、Q2以及特征根值的分析,建立PLS-DA溯源模型的潛變量個數(shù)為2,該模型的產(chǎn)地識別預(yù)測精度可達(dá)到最高97%且內(nèi)部交叉驗證均方差為0.08,PLS-DA溯源模型的判別結(jié)果非常準(zhǔn)確且穩(wěn)定。

    圖3 油菜蜜中PLS-DA產(chǎn)地溯源模型VIP圖Fig. 3 PLS-DA VIP plot for geographical traceability of rape honey

    本研究的PLS-DA模型選定的潛變量個數(shù)為2,一般而言潛變量1對于整個模型的貢獻(xiàn)率最高,但為更加詳細(xì)的顯示各參數(shù)的重要性[28],因此圖3將3 個潛變量的變量投影重要度(variable importance in the project,VIP)值全部展示出(3 個潛變量中VIP值均小于1的參數(shù)則不展示)。VIP值大于1則表示該參數(shù)屬于產(chǎn)地鑒定中重要的標(biāo)記指標(biāo),而VIP值小于0.5則表示該參數(shù)對于鑒定結(jié)果不重要[29]。由此可知,在潛變量1中對于產(chǎn)地判別占據(jù)重要影響作用的指標(biāo)主要有對香豆酸、柚皮苷、原兒茶酸等16 種多酚,而低聚糖中僅松二糖、吡喃基葡蔗糖的VIP值大于1。其次,潛變量2和潛變量3的VIP圖中各參數(shù)重要性基本一致,對于產(chǎn)地判別重要性影響提供貢獻(xiàn)率最高的參數(shù)均是咖啡酸,最不重要的參數(shù)均為沒食子酸。低聚糖對于潛變量2、3中顯示為重要的參數(shù)與潛變量1對比,增加了麥芽酮糖與蔗果三糖。異麥芽糖與蔗果三糖,在3 個潛變量中均介于重要與不重要之間的灰色區(qū)域。

    3 結(jié) 論

    本研究對ZX、YC和GC 3 個完全不同的氣候和地理環(huán)境,油菜蜜樣本中低聚糖和多酚含量進(jìn)行差異性研究分析。方差分析結(jié)果顯示6 種低聚糖和18 種多酚類物質(zhì)均存在一定的地理差異性。采用PCA對具有顯著貢獻(xiàn)率的參數(shù)進(jìn)行分析,研究發(fā)現(xiàn)對香豆酸、柚皮苷、原兒茶酸、咖啡酸等具有顯著的地理特征性。而PLS-DA模型的研究結(jié)果顯示,3 個地方的判別正確率均為100%,無任何誤判樣本出現(xiàn)。同時,該模型留一法交叉驗證結(jié)果顯示其預(yù)測準(zhǔn)確率可達(dá)到97%,模型具有非常好的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度。綜上可知,低聚糖和多酚結(jié)合PLS-DA技術(shù)對于不同地理來源油菜蜜的鑒別具有極大的研究價值和參考意義。

    国产精品免费一区二区三区在线| 成年免费大片在线观看| eeuss影院久久| 国产激情偷乱视频一区二区| 乱系列少妇在线播放| 床上黄色一级片| av中文乱码字幕在线| 国产伦精品一区二区三区四那| 晚上一个人看的免费电影| av在线播放精品| 国产精品无大码| 天堂影院成人在线观看| 久久久久久久久大av| 波多野结衣高清无吗| 日本黄色视频三级网站网址| 国产成人freesex在线 | 精品久久久噜噜| 国产麻豆成人av免费视频| 丰满乱子伦码专区| 男人舔女人下体高潮全视频| 国语自产精品视频在线第100页| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久人人爽人人片av| 成人性生交大片免费视频hd| 日韩欧美免费精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| av女优亚洲男人天堂| 欧美成人一区二区免费高清观看| 有码 亚洲区| 久久亚洲精品不卡| 免费看a级黄色片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 最新在线观看一区二区三区| 乱系列少妇在线播放| 丝袜美腿在线中文| 天美传媒精品一区二区| 久久久精品94久久精品| 亚洲自偷自拍三级| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人人妻人人澡欧美一区二区| 伦理电影大哥的女人| 日韩一区二区视频免费看| 成人欧美大片| 亚洲在线自拍视频| 国产91av在线免费观看| 午夜爱爱视频在线播放| 男插女下体视频免费在线播放| 一级毛片久久久久久久久女| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲精品日韩av片在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 成人永久免费在线观看视频| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美另类亚洲清纯唯美| 免费在线观看成人毛片| 亚洲欧美清纯卡通| 天美传媒精品一区二区| 深爱激情五月婷婷| 男女边吃奶边做爰视频| 日韩制服骚丝袜av| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 欧美最新免费一区二区三区| 在线播放无遮挡| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产单亲对白刺激| 成年免费大片在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精华一区二区三区| 日韩高清综合在线| 国产精品人妻久久久久久| 一级毛片我不卡| 成年女人永久免费观看视频| 久久久久久久久大av| 久久精品国产自在天天线| 午夜福利高清视频| 国产精品亚洲美女久久久| 国产精品电影一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人鲁丝片一二三区免费| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 免费人成视频x8x8入口观看| 国国产精品蜜臀av免费| 99久久精品热视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品在线观看二区| 成人av一区二区三区在线看| 国产黄片美女视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲欧美日韩东京热| 午夜日韩欧美国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久国产成人精品二区| 一级黄片播放器| 最新在线观看一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| 久久久国产成人精品二区| 99热这里只有是精品在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美色视频一区免费| 久久精品夜色国产| 欧美色视频一区免费| 久99久视频精品免费| 秋霞在线观看毛片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜激情欧美在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日本一二三区视频观看| 欧美zozozo另类| 综合色av麻豆| 淫秽高清视频在线观看| 黑人高潮一二区| 在线免费观看的www视频| 精华霜和精华液先用哪个| 此物有八面人人有两片| 日韩av不卡免费在线播放| 两个人的视频大全免费| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 午夜日韩欧美国产| 国产综合懂色| 国产v大片淫在线免费观看| 最新在线观看一区二区三区| 性欧美人与动物交配| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成熟少妇高潮喷水视频| 一级av片app| 精品午夜福利视频在线观看一区| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美成人精品欧美一级黄| 成年免费大片在线观看| 1024手机看黄色片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 三级毛片av免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲人成网站在线播| 日本三级黄在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲国产精品久久男人天堂| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| av在线老鸭窝| 99热全是精品| 在线播放国产精品三级| 麻豆av噜噜一区二区三区| 插阴视频在线观看视频| 乱系列少妇在线播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品久久久久久成人av| 久久人妻av系列| 亚洲中文日韩欧美视频| 在线国产一区二区在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一本精品99久久精品77| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲丝袜综合中文字幕| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美激情久久久久久爽电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | av国产免费在线观看| 久久人人精品亚洲av| 精品人妻视频免费看| 一级a爱片免费观看的视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品人妻久久久影院| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产高清激情床上av| www日本黄色视频网| 免费看a级黄色片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲经典国产精华液单| av在线亚洲专区| 色综合色国产| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲成av人片在线播放无| 中文字幕av在线有码专区| 麻豆一二三区av精品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 大香蕉久久网| 国产一级毛片七仙女欲春2| 免费看a级黄色片| 亚洲乱码一区二区免费版| 日韩中字成人| 亚洲综合色惰| 少妇的逼好多水| 欧美日韩乱码在线| 午夜精品在线福利| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产一区二区亚洲精品在线观看| 九九热线精品视视频播放| 91久久精品国产一区二区三区| 久久6这里有精品| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产精品99久久久久久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲国产精品久久男人天堂| 赤兔流量卡办理| 欧美日韩国产亚洲二区| 日本-黄色视频高清免费观看| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲av免费在线观看| 久久6这里有精品| 久久国内精品自在自线图片| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久久精品大字幕| 免费看光身美女| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品乱码久久久久久99久播| 日本免费a在线| 亚洲国产精品成人久久小说 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 中文字幕免费在线视频6| 联通29元200g的流量卡| 国产免费男女视频| 精品熟女少妇av免费看| 热99在线观看视频| 亚洲最大成人av| 插阴视频在线观看视频| 老司机福利观看| 午夜日韩欧美国产| 免费观看在线日韩| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产一区二区在线av高清观看| а√天堂www在线а√下载| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久精品国产自在天天线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲av五月六月丁香网| 日韩av不卡免费在线播放| 黄片wwwwww| av在线天堂中文字幕| 久久久国产成人免费| 中文字幕免费在线视频6| 伦精品一区二区三区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日日撸夜夜添| 俺也久久电影网| 成熟少妇高潮喷水视频| 在线播放无遮挡| 精品熟女少妇av免费看| 久久精品国产清高在天天线| 丰满乱子伦码专区| 97热精品久久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产探花在线观看一区二区| 网址你懂的国产日韩在线| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲无线在线观看| 亚洲四区av| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 看黄色毛片网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 成人av在线播放网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 天天一区二区日本电影三级| 波多野结衣高清无吗| 哪里可以看免费的av片| 亚洲高清免费不卡视频| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品国产高清国产av| 黄片wwwwww| 免费大片18禁| 三级毛片av免费| 亚洲人成网站高清观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 黄片wwwwww| 在线观看美女被高潮喷水网站| 少妇熟女欧美另类| 一级毛片aaaaaa免费看小| 熟女电影av网| 五月伊人婷婷丁香| 在线观看美女被高潮喷水网站| aaaaa片日本免费| 丝袜喷水一区| 高清午夜精品一区二区三区 | 午夜福利18| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 性欧美人与动物交配| 天天一区二区日本电影三级| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久久久久久午夜电影| 国内精品宾馆在线| av在线老鸭窝| 久久久久国产网址| 日本色播在线视频| 日本a在线网址| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲熟妇熟女久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 插阴视频在线观看视频| 国产在视频线在精品| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利在线在线| 露出奶头的视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久久精品大字幕| 日本成人三级电影网站| 最新中文字幕久久久久| 综合色av麻豆| 午夜免费激情av| 国产av一区在线观看免费| .国产精品久久| 美女免费视频网站| а√天堂www在线а√下载| 精品无人区乱码1区二区| 看片在线看免费视频| 日本黄大片高清| 久久久久久久久大av| 亚洲va在线va天堂va国产| av黄色大香蕉| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一级a爱片免费观看的视频| 午夜亚洲福利在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 免费av不卡在线播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 久久久国产成人精品二区| 国产探花极品一区二区| 免费看a级黄色片| 69人妻影院| 亚洲美女搞黄在线观看 | 激情 狠狠 欧美| 免费在线观看成人毛片| 国产伦一二天堂av在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美一区二区国产精品久久精品| 午夜精品在线福利| 日韩大尺度精品在线看网址| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲va在线va天堂va国产| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美日韩综合久久久久久| 国产私拍福利视频在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 尾随美女入室| 日本黄大片高清| 国产高清激情床上av| 春色校园在线视频观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲成人av在线免费| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 最近最新中文字幕大全电影3| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 天堂动漫精品| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产亚洲av嫩草精品影院| 一级av片app| 日韩大尺度精品在线看网址| 插逼视频在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 少妇熟女欧美另类| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精品一及| 国产美女午夜福利| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚州av有码| 午夜激情欧美在线| 少妇人妻一区二区三区视频| a级毛片a级免费在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 天天一区二区日本电影三级| 色在线成人网| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 免费观看精品视频网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 嫩草影视91久久| 久久久久久久午夜电影| 简卡轻食公司| 午夜免费激情av| 国产大屁股一区二区在线视频| 人人妻人人看人人澡| 91久久精品电影网| 亚洲精品色激情综合| av视频在线观看入口| 不卡一级毛片| 日韩精品有码人妻一区| 乱人视频在线观看| 国产视频内射| 99久久精品一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费| 日本-黄色视频高清免费观看| 日日撸夜夜添| 老司机影院成人| 成人亚洲精品av一区二区| 1000部很黄的大片| 一级毛片电影观看 | 免费观看人在逋| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩中字成人| 日韩av在线大香蕉| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩欧美国产在线观看| 22中文网久久字幕| a级毛片免费高清观看在线播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99视频精品全部免费 在线| 国产私拍福利视频在线观看| 一夜夜www| 精品久久久久久成人av| 色哟哟哟哟哟哟| 色哟哟·www| 51国产日韩欧美| 国产欧美日韩精品一区二区| 高清午夜精品一区二区三区 | 国产成人freesex在线 | 久久精品综合一区二区三区| 最近在线观看免费完整版| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品久久久久久久电影| 日本精品一区二区三区蜜桃| 真实男女啪啪啪动态图| 看黄色毛片网站| 精品一区二区三区人妻视频| 天堂动漫精品| 能在线免费观看的黄片| 麻豆一二三区av精品| 九九在线视频观看精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲av熟女| 乱码一卡2卡4卡精品| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 九九热线精品视视频播放| aaaaa片日本免费| 国产探花极品一区二区| 日本熟妇午夜| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产成人aa在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 午夜a级毛片| 人妻少妇偷人精品九色| 人人妻人人看人人澡| 美女大奶头视频| 成人av在线播放网站| 99热精品在线国产| 午夜影院日韩av| 男女之事视频高清在线观看| 禁无遮挡网站| 看免费成人av毛片| 丰满的人妻完整版| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 老女人水多毛片| 日韩精品中文字幕看吧| 精品乱码久久久久久99久播| 老司机影院成人| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜福利18| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲国产精品久久男人天堂| 男人舔奶头视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 最后的刺客免费高清国语| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久热精品热| 亚洲av美国av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产爱豆传媒在线观看| 久久久久久久午夜电影| 能在线免费观看的黄片| 搡老熟女国产l中国老女人| 日本 av在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲自拍偷在线| av卡一久久| 亚洲在线自拍视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 女人被狂操c到高潮| 身体一侧抽搐| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 免费看日本二区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国模一区二区三区四区视频| 日本三级黄在线观看| 1000部很黄的大片| a级毛片a级免费在线| 晚上一个人看的免费电影| 久久鲁丝午夜福利片| 色综合亚洲欧美另类图片| 日本欧美国产在线视频| 91在线观看av| 久久人人精品亚洲av| 午夜精品在线福利| 尾随美女入室| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 天堂网av新在线| 国产精品久久久久久精品电影| 少妇熟女欧美另类| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 中文字幕久久专区| 美女大奶头视频| 国产日本99.免费观看| 免费av不卡在线播放| 欧美一区二区亚洲| 午夜视频国产福利| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 夜夜爽天天搞| 国产免费男女视频| 久久精品综合一区二区三区| 国内精品久久久久精免费| 黄片wwwwww| 三级毛片av免费| 人妻夜夜爽99麻豆av| av视频在线观看入口| 成人美女网站在线观看视频| 国产一区二区在线观看日韩| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲自偷自拍三级| 国产亚洲欧美98| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产单亲对白刺激| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲va在线va天堂va国产| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 黑人高潮一二区| 久久草成人影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产成人一区二区在线| 亚洲熟妇熟女久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 一个人免费在线观看电影| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲18禁久久av| 国产单亲对白刺激| 免费看a级黄色片| 丝袜美腿在线中文| 国产综合懂色| 亚洲综合色惰| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 91久久精品电影网| 精品久久久久久久末码| 国产伦一二天堂av在线观看| 少妇的逼好多水| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久精品欧美日韩精品| 国产 一区 欧美 日韩| avwww免费| 亚洲第一电影网av| 在线观看av片永久免费下载| 一级毛片久久久久久久久女| 免费av观看视频| 亚洲av成人av| 99精品在免费线老司机午夜| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 色噜噜av男人的天堂激情| 男插女下体视频免费在线播放| 一级毛片aaaaaa免费看小| 免费高清视频大片| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 99视频精品全部免费 在线| 天美传媒精品一区二区| 国产乱人偷精品视频| 精品一区二区免费观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 午夜福利18| 久久久久国内视频| 婷婷精品国产亚洲av| 午夜福利视频1000在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 日韩精品有码人妻一区| 麻豆成人午夜福利视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 黄色日韩在线| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 免费电影在线观看免费观看| 麻豆av噜噜一区二区三区|