杧果MiOFP1 基因的表達(dá)與功能分析

張藝粒 朱嘉偉 勞安 李雨澤 夏黎明 莫嘯 胡萬(wàn)里 何新華 羅聰

摘要：【目的】卵形家族蛋白（ovate family proteins，OFPs）在植物生長(zhǎng)發(fā)育及逆境響應(yīng)過(guò)程中扮演重要角色。前期通過(guò)杧果成花基因酵母文庫(kù)篩選，獲得了一個(gè)MiOFP1 基因，為明確其功能，對(duì)MiOFP1 的表達(dá)模式和轉(zhuǎn)基因功能開展了研究?！痉椒ā吭诒狙芯恐蟹治隽藮x果MiOFP1 的啟動(dòng)子序列；通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析MiOFP1 在杧果不同組織器官和不同生長(zhǎng)發(fā)育期葉片中的表達(dá)模式；轉(zhuǎn)化構(gòu)建好的超量表達(dá)載體并侵染擬南芥研究MiOFP1 的功能。【結(jié)果】四季蜜杧MiOFP1 啟動(dòng)子包含激素響應(yīng)元件：ABA響應(yīng)元件、GA響應(yīng)元件、SA響應(yīng)元件和乙烯響應(yīng)元件，逆境響應(yīng)元件：鹽響應(yīng)元件、脫水響應(yīng)元件、MYC轉(zhuǎn)錄因子和MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。組織特異性表達(dá)分析顯示，MiOFP1在各組織器官中均有表達(dá)，且在童期實(shí)生樹和成年期嫁接樹的莖中表達(dá)量最高，在成熟果實(shí)中表達(dá)量最低；嫁接樹不同成花發(fā)育時(shí)期表達(dá)分析結(jié)果顯示，MiOFP1 在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的葉中表達(dá)量最高，在成花誘導(dǎo)期和花發(fā)育期表達(dá)水平較低。轉(zhuǎn)基因功能研究顯示，超量表達(dá)MiOFP1 的擬南芥出現(xiàn)晚花表型，抽薹期葉片中成花抑制基因FLOWERINGLOUS C（FLC）的表達(dá)水平顯著上調(diào)，而成花促進(jìn)基因FLOWERING LOCUS T（FT）的表達(dá)水平顯著下調(diào)。逆境脅迫處理顯示，ABA處理顯著抑制擬南芥種子的萌發(fā)與根的伸長(zhǎng)，但通過(guò)轉(zhuǎn)基因顯著提高了擬南芥種子的萌發(fā)率，降低了擬南芥根長(zhǎng)對(duì)ABA的敏感性。進(jìn)一步分析顯示，MiOFP1 顯著提高了擬南芥在ABA處理后的脯氨酸含量和過(guò)氧化物酶活性，上調(diào)了ABA代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平?！窘Y(jié)論】明確了杧果MiOFP1 抑制成花，且降低了轉(zhuǎn)基因植株對(duì)ABA的敏感性，為進(jìn)一步探索杧果MiOFP1 參與杧果成花和逆境脅迫應(yīng)答的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：杧果；MiOFP1；表達(dá)模式；功能分析；ABA處理

中圖分類號(hào)：S667.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980（2023）06-1099-10

卵形家族蛋白（ovate family proteins，OFPs）是具有保守OVATE 結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，為植物所特有，因番茄果實(shí)形態(tài)由卵形變?yōu)槔嫘味l(fā)現(xiàn)[1]。研究發(fā)現(xiàn)，OFPs 參與植物次生細(xì)胞壁形成，水稻維管束發(fā)育，擬南芥胚珠發(fā)育，辣椒和番茄果實(shí)的形狀、香蕉果實(shí)的成熟及品質(zhì)形成等過(guò)程[2]；在擬南芥中過(guò)表達(dá)AtOFP1 發(fā)現(xiàn)花粉活力受到影響，植物發(fā)育遲緩[3]；此外，OFPs 參與植物逆境抵御和赤霉素（gibberellin，GA）、脫落酸（abscisic acid，ABA）、乙烯（ethylene）及油菜素內(nèi)酯（brassinolide，BR）等激素的信號(hào)傳遞[4]；OsOFP22 通過(guò)抑制GA和BR信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)水稻形態(tài)發(fā)育[5]；外源施加GA3 抑制SlOFP20 的表達(dá)，低溫、干旱、鹽脅迫和外源施加吲哚-3-乙酸（indole-3-acetic acid，IAA）和ABA能促進(jìn)SlOFP20 的表達(dá)[6]。ABA是一種在植物生長(zhǎng)發(fā)育和各種非生物脅迫耐受過(guò)程中起重要調(diào)節(jié)作用的激素，參與調(diào)節(jié)種子成熟、種子發(fā)芽、幼苗生長(zhǎng)和氣孔運(yùn)動(dòng)等[7]，外源施加ABA可以有效緩解植物受到的冷害、鹽脅迫和干旱脅迫等[8-10]。

杧果（Mangifera indica L.）是漆樹科杧果屬的熱帶水果，是世界五大熱帶水果之一，適時(shí)開花和對(duì)非生物脅迫的抵御能力影響杧果的產(chǎn)量和品質(zhì)。OFPs 參與植物的成花調(diào)控且與逆境脅迫應(yīng)答有關(guān)[11]，目前杧果尚無(wú)OFP 基因的研究報(bào)道，在前期研究中，筆者從杧果成花酵母文庫(kù)中篩選獲得了一個(gè)OFP 基因，命名為MiOFP1。筆者在本研究中對(duì)杧果MiOFP1 基因的表達(dá)模式和轉(zhuǎn)基因功能進(jìn)行研究，為揭示MiOFP1 參與杧果成花和杧果逆境應(yīng)答的分子機(jī)制提供參考。

1 材料和方法

1.1 植物材料及取樣

供試杧果品種為四季蜜杧，栽培于廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院果樹標(biāo)本園，擬南芥（Arabidopsis thaliana）為哥倫比亞野生型，種子由廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院杧果課題組保存。組織表達(dá)特性樣品采集：2022-02-15 采集6株長(zhǎng)勢(shì)一致的童期實(shí)生杧果樹（3 年生）冬梢的成熟葉、芽和莖（韌皮部組織），6 株長(zhǎng)勢(shì)一致的成年期嫁接?xùn)x果樹（12 年生）冬梢的成熟葉、莖（韌皮部組織）、花，以及盛花后20 d 和100 d 的植物果實(shí)胚和果肉。時(shí)間表達(dá)特性樣品為6 株長(zhǎng)勢(shì)一致的嫁接?xùn)x果樹的成熟葉，樣品采集時(shí)間為2021 年9 月至2022 年5 月。采樣時(shí)間統(tǒng)一定為17：00—18：00，樣品采集后立即處理，放入-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 MiOFP1 啟動(dòng)子序列分析利用NEWPLACE（https：//www.dna.affrc.go.jp/PLACE/？action=newplace）在線軟件預(yù)測(cè)四季蜜杧MiOFP1 啟動(dòng)子區(qū)域順式作用元件，利用TBtools 繪制啟動(dòng)子順式作用元件位置信息圖。

1.2.2 MiOFP1 組織特性和時(shí)間表達(dá)特性分析提取杧果組織表達(dá)特性樣品和時(shí)間表達(dá)特性樣品的RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA待用，根據(jù)四季蜜杧MiOFP1基因序列設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物qOFP1 F（5CTGTACCTGCCGTGCTACAA3）、qOFP1 R（5CTGTACCTGCCGTGCTACAA3）。以杧果MiActin1 為內(nèi)參基因，引物為qActin F（5CCGAGACATGAAGGAGAAGC3）、qActin R（5GTGGTCTCATGGATACGAGCA3）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀器為ABI7500。擴(kuò)增反應(yīng)體系和程序參照試劑盒SYBR Premix Dimer Eraser （TaKaRa）說(shuō)明書進(jìn)行[12]。

1.2.3 擬南芥轉(zhuǎn)化與成花表型分析實(shí)驗(yàn)室前期已構(gòu)建好四季蜜杧MiOFP1 的超量表達(dá)載體，命名為pBI121-MiOFP1 載體，轉(zhuǎn)化EHA105 感受態(tài)。通過(guò)花序侵染法轉(zhuǎn)化哥倫比亞野生型擬南芥[13]。利用抗生素篩選和PCR技術(shù)鑒定陽(yáng)性植株。以T3 代純合植株為試驗(yàn)材料進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。成花表型觀察：利用半定量技術(shù)鑒定杧果MiOFP1 在轉(zhuǎn)基因擬南芥中的表達(dá)水平，并觀察轉(zhuǎn)基因擬南芥的抽薹時(shí)間和第一朵花開放的時(shí)間。通過(guò)熒光定量技術(shù)，采集抽薹期擬南芥葉片，檢測(cè)內(nèi)源成花基因的表達(dá)水平，以擬南芥AtActin2 為內(nèi)參基因，引物為AtActin2 F（5-GCAGAGCGGGAAATTGTAAG- 3）、AtActin2 R（5-GGATATCAGGAAGGATCTGTAC-3），AtFLC F（5-ATCATCATGTGGGAGCAGAAG-3）、AtFLCR（5- TTCAACCGCCGATTTAAGG- 3），AtFT F（5-CTTGGCAGGCAAACAGTGTATGCAC- 3）、AtFT R（5- GCCACTCTCCCTCTGACAATTGTAGA-3），檢測(cè)方法參考課題組研究報(bào)道[14]。

1.2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥響應(yīng)植物激素ABA試驗(yàn)萌發(fā)率測(cè)定：將轉(zhuǎn)基因擬南芥T3 代純合株系種子播種于含0、2、5 μmol·L-1ABA的1/2 MS固體培養(yǎng)基上，每個(gè)處理3 次重復(fù)，以胚根伸出為萌發(fā)依據(jù)，每12 h記錄一次萌發(fā)率，10 d 后拍照記錄。根長(zhǎng)測(cè)定：將T3 代純合株系種子播種于1/2 MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，5 d 后移至含0、5、10 μmol·L-1ABA的1/2 MS固體培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，每個(gè)處理3 次重復(fù)，移栽5 d后拍照并統(tǒng)計(jì)根長(zhǎng)。生理指標(biāo)測(cè)定：播種9 d 后移栽幼苗到穴盆中，培養(yǎng)12 d 后進(jìn)行20 μmol·L-1ABA噴施處理，以清水處理為對(duì)照，處理1 d 后采集擬南芥葉片，每個(gè)處理3 次重復(fù)，采用試劑盒檢測(cè)脯氨酸含量和過(guò)氧化物酶活性（北京索萊寶科技有限公司）；提取ABA 處理組及對(duì)照組擬南芥葉片的RNA，逆轉(zhuǎn)錄后通過(guò)熒光定量技術(shù)檢測(cè)參與擬南芥ABA響應(yīng)的內(nèi)源基因表達(dá)量，引物為AtABI1 F（5-GTTTTCCCGTCTCACATCTTCGT- 3）、AtABI1 R（5- CTTCATCCGTCA TTACATCCCAA- 3），At-MFT F（5-CGAGCCGAACATGAGAGAAT-3）、At-MFT R（5- AAGTATCTCTTTTCCTCTTGAGGG-3）、AtDREB2B F（5- CATCAGAGCCAAGACCAAAACC-3）、AtDREB2B R（5- TGTAGGACCATTGCCTCAGAAC-3）[15]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

將所得數(shù)據(jù)采用Excel 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及圖片制作，利用IBM SPSS 22.0 軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 MiOFP1基因啟動(dòng)子序列分析

對(duì)四季蜜杧MiOFP1 的啟動(dòng)子序列（2000 bp）進(jìn)行順式作用元件預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)MiOFP1啟動(dòng)子中存在的激素響應(yīng)元件有：1個(gè)乙烯響應(yīng)元件，5個(gè)ABA響應(yīng)元件，7個(gè)SA響應(yīng)元件，9個(gè)GA響應(yīng)元件；逆境響應(yīng)元件有：1個(gè)鹽響應(yīng)元件，4個(gè)脫水響應(yīng)元件，9個(gè)MYC轉(zhuǎn)錄因子和10個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)（圖1）。

2.2 MiOFP1 表達(dá)模式分析

對(duì)MiOFP1 在杧果不同生長(zhǎng)發(fā)育周期的不同組織器官中的表達(dá)模式進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量分析。結(jié)果如圖2- A 所示，MiOFP1 存在組織表達(dá)差異性。MiOFP1在童期樹組織中的表達(dá)水平高于成年期樹。MiOFP1在莖的韌皮部中表達(dá)水平較高，在葉、花和幼果中表達(dá)水平最低，在成熟果實(shí)中表達(dá)水平最低。不同成花發(fā)育時(shí)期葉片中的表達(dá)模式分析顯示，MiOFP1在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的葉片中表達(dá)水平較高，在成花誘導(dǎo)期和花發(fā)育期的葉片中表達(dá)水平較低，而后在果實(shí)發(fā)育期的葉片中表達(dá)水平逐步上升（圖2-B）。

2.3 擬南芥轉(zhuǎn)化及成花表型分析

將包含pBI121-MiOFP1 超量表達(dá)載體和空載體的農(nóng)桿菌通過(guò)花序侵染法分別轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥。半定量PCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因株系MiOFP1#7、MiOFP1#8 和MiOFP1#9 中MiOFP1 正常表達(dá)，而在對(duì)照植株中沒(méi)有表達(dá)（圖3-B）。超量表達(dá)MiOFP1 轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)出晚花表型，其抽薹時(shí)間和第一朵花開放時(shí)間均比WT和轉(zhuǎn)空載體植株（pBI121）晚2～4 d（圖3-A、C）。轉(zhuǎn)基因擬南芥內(nèi)源成花基因表達(dá)水平檢測(cè)顯示，超量表達(dá)MiOFP1 顯著提高了擬南芥AtFLC 的表達(dá)水平，顯著下調(diào)了At-FT的表達(dá)水平（圖3-D）。

2.4 外源ABA處理對(duì)MiOFP1 轉(zhuǎn)基因擬南芥的影響

2.4.1 外源ABA 處理后MiOFP1 轉(zhuǎn)基因擬南芥種子萌發(fā)表型分析T3 代純合擬南芥種子在0、2、5 μmol · L-1 ABA的1/2 MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄發(fā)芽情況。ABA 處理10 d 后拍照記錄如圖4-A所示，在未添加ABA的培養(yǎng)基上，擬南芥幼苗長(zhǎng)勢(shì)基本一致；在添加ABA的培養(yǎng)基中，所有種子發(fā)芽均受抑制，種子在含5 μmol·L-1ABA的1/2 MS固體培養(yǎng)基上的長(zhǎng)勢(shì)較在含2 μmol·L-1ABA的1/2 MS固體培養(yǎng)基上更弱。萌發(fā)率統(tǒng)計(jì)分析顯示（圖4-B），未添加ABA時(shí)，前60 h 轉(zhuǎn)基因擬南芥種子的萌發(fā)率略高于WT種子，但差異不顯著；在2 μmol·L-1 ABA 處理時(shí)，所有種子萌發(fā)均受到抑制，轉(zhuǎn)基因擬南芥種子萌發(fā)速度明顯快于WT種子；在5 μmol·L-1 ABA處理時(shí)，種子萌發(fā)受到的抑制更強(qiáng)，轉(zhuǎn)基因擬南芥種子的萌發(fā)率極顯著高于對(duì)照植株，最終的轉(zhuǎn)基因擬南芥種子發(fā)芽率分別為84%、88%、77%，WT種子發(fā)芽率為65%。

2.4.2 外源ABA 處理對(duì)超量表達(dá)MiOFP1 擬南芥根長(zhǎng)、生理指標(biāo)與內(nèi)源基因表達(dá)的影響不同濃度的ABA處理對(duì)T3 代純合擬南芥幼苗根長(zhǎng)的影響如圖5-A，在未施加ABA時(shí)，轉(zhuǎn)基因擬南芥與對(duì)照擬南芥的根長(zhǎng)無(wú)顯著差異，隨著ABA濃度的增加，轉(zhuǎn)基因擬南芥與對(duì)照擬南芥幼苗的根長(zhǎng)均表現(xiàn)為受抑制，但在相同處理下，對(duì)照植株根長(zhǎng)顯著短于轉(zhuǎn)基因植株的根長(zhǎng)（圖5-B）。

對(duì)轉(zhuǎn)基因植株與對(duì)照WT植株進(jìn)行20 μmol·L-1ABA噴施處理，以清水噴施處理為對(duì)照，處理后1 d采集葉片為樣品，對(duì)處理組與對(duì)照組植株進(jìn)行生理指標(biāo)測(cè)定和擬南芥內(nèi)源基因表達(dá)水平檢測(cè)。如圖5-C所示，清水對(duì)照處理下，轉(zhuǎn)基因植株與WT植株的脯氨酸含量和過(guò)氧化物酶活性無(wú)明顯差異，但在ABA處理后，轉(zhuǎn)基因植株及WT植株的脯氨酸含量均有增加，且轉(zhuǎn)基因植株脯氨酸含量顯著高于WT植株，是WT植株的1.4 倍；在ABA處理后，轉(zhuǎn)基因植株的過(guò)氧化物酶活性顯著高于對(duì)照WT植株。

內(nèi)源基因檢測(cè)顯示，清水處理時(shí)，MiOFP1 轉(zhuǎn)基因株系中AtABI1、AtRD29B和AtNCED3 的表達(dá)水平略低于WT株系，而AtMFT 的表達(dá)水平略高于WT植株。在ABA處理后，上述4 個(gè)基因的表達(dá)水平均顯著高于WT植株（圖5-D）。

3 討論

啟動(dòng)子順式作用元件關(guān)系著植物對(duì)激素、低溫、鹽和干旱等非生物脅迫作出反應(yīng)，非生物脅迫與激素均可誘導(dǎo)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到下游基因啟動(dòng)子順式作用元件上，從而誘導(dǎo)其表達(dá)[16- 17]，MiOFP1 前2000 bp 啟動(dòng)子中包含大量激素響應(yīng)元件和逆境脅迫響應(yīng)元件，推測(cè)MiOFP1 可能受到激素、非生物脅迫以及上游MYB、MYC 轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控和誘導(dǎo)。組織表達(dá)分析表明，MiOFP1 具有組織表達(dá)特異性，主要在童期樹和成年期樹的莖中表達(dá)，在花、葉、果實(shí)和胚中表達(dá)量相對(duì)較低。此前的研究發(fā)現(xiàn)，水稻OsOFP在種子發(fā)育時(shí)期表達(dá)量較高[18]，葡萄VvOFP在開花前表達(dá)量較高，開花一段時(shí)間后，表達(dá)量顯著下降[19]，小麥TaOFP 在根和穗中表達(dá)量最高[20]。對(duì)比本研究結(jié)果，可以推測(cè)，OFP 參與多個(gè)植物生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程，但是不同物種OFP主要發(fā)揮的功能和表達(dá)的位置可能不同。此外，對(duì)過(guò)表達(dá)MiOFP1 擬南芥進(jìn)行表型觀察，發(fā)現(xiàn)抽薹時(shí)間和開花時(shí)間有顯著延遲，這與擬南芥OFP1 功能類似，AtOFP1 在擬南芥中過(guò)表達(dá)出現(xiàn)延遲開花現(xiàn)象[21]。內(nèi)源基因表達(dá)分析結(jié)果表明，在過(guò)量表達(dá)MiOFP1 的擬南芥株系中，成花抑制基因FLC 的表達(dá)得到促進(jìn)，成花促進(jìn)基因FT 的表達(dá)受到抑制，從而使植物開花時(shí)間延遲，這證明了MiOFP1 對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥的開花起到抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)量表達(dá)SlOFP20 的番茄開花時(shí)間明顯推遲，SlOFP20 轉(zhuǎn)基因植株的SlFT 表達(dá)水平顯著低于WT[22]。目前尚未見有OFP在杧果中是否同樣具有延遲開花的功能報(bào)道，但過(guò)量表達(dá)MiOFP1 的擬南芥植株與過(guò)量表達(dá)番茄SlOFP20 的植株均出現(xiàn)延遲開花現(xiàn)象，且植株內(nèi)FT的表達(dá)量均顯著降低，表明二者可能通過(guò)相同或相似的途徑調(diào)控FT 的表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)植株開花時(shí)間的調(diào)控，綜上所述，推測(cè)MiOFP1 通過(guò)影響FLC和FT的表達(dá)水平來(lái)調(diào)節(jié)杧果開花時(shí)間。

已有研究表明，除參與植物生長(zhǎng)發(fā)育外，OVATE 家族的多數(shù)基因還參與植物激素調(diào)節(jié)及逆境脅迫響應(yīng)過(guò)程。外源施加GA3可以減緩AtOFP1超表達(dá)株系的矮化現(xiàn)象；水稻OFP1 通過(guò)與GSK2、OsBZR1 和DLT 的相互作用來(lái)正調(diào)控BR 響應(yīng)；Os-OFP6-RNAi 轉(zhuǎn)基因株系表現(xiàn)出正常生長(zhǎng)條件下側(cè)根變短和IAA 處理后側(cè)根密度增加[22]；過(guò)表達(dá)AtOFP8 顯著增強(qiáng)了擬南芥的抗旱性，其種子的發(fā)芽率和綠葉率更高，葉片中脯氨酸含量提高，丙二醇含量降低，可溶性蛋白含量高，葉片抗氧化酶的活性較強(qiáng)[23]；對(duì)去除水稻OsOFP6 的植株進(jìn)行干旱和低溫處理，明顯發(fā)現(xiàn)植株缺水且相對(duì)電導(dǎo)率升高的現(xiàn)象，說(shuō)明OsOFP6 參與水稻對(duì)干旱和低溫脅迫的防御過(guò)程[24]；蘋果OFP 家族基因在鹽、干旱和高低溫等非生物逆境下呈現(xiàn)出不同的響應(yīng)差異，尤其是在低溫下MdOFP基因家族中多個(gè)基因的表達(dá)量均有不同程度的上升[25]；同樣的，低溫條件下，油桐幼苗VfOFP3/7/10/12 等基因的表達(dá)量上升，推測(cè)VfOFP 可能在油桐低溫脅迫響應(yīng)方面發(fā)揮積極的調(diào)節(jié)作用[26]。ABA 是種子萌發(fā)和大多數(shù)常見非生物脅迫反應(yīng)的主要介質(zhì)之一，包括對(duì)鹽、干旱和寒冷的反應(yīng)[27-28]。與野生型植物相比，MiOFP1 的超量表達(dá)減輕了ABA對(duì)種子萌發(fā)的抑制作用和根長(zhǎng)敏感性，提高了外源ABA 情況下植株的脯氨酸含量和過(guò)氧化物酶活性，促進(jìn)了ABA 響應(yīng)基因ABI1、MFT 和RD29B 以及ABA 合成基因NCED3 的表達(dá)。植物在受到脅迫時(shí)，細(xì)胞的滲透壓發(fā)生變化，脯氨酸含量會(huì)升高以維持細(xì)胞滲透壓；同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的過(guò)氧化氫及酚類、胺類等物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞造成損害，過(guò)氧化物酶可催化過(guò)氧化氫及酚類、胺類等物質(zhì)，達(dá)到減輕上述物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的毒害作用，通過(guò)外源噴施ABA，提高植物體內(nèi)的脯氨酸含量和過(guò)氧化物酶活性，從而增強(qiáng)植物抵御非生物脅迫的能力[29-30]；ABI1 在ABA的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中起負(fù)調(diào)控作用[31]，MFT直接抑制ABI5 的表達(dá)，對(duì)ABA信號(hào)通路起負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用[32]，外源ABA 處理明顯誘導(dǎo)RD29B 表達(dá)量升高[33]。這些發(fā)現(xiàn)表明，MiOFP1 在杧果開花和外源ABA 響應(yīng)中可能具有關(guān)鍵的作用，推測(cè)杧果MiOFP1 可能是通過(guò)介導(dǎo)ABA的信號(hào)通路參與種子萌發(fā)調(diào)控過(guò)程和逆境防御過(guò)程，但是MiOFP1 是如何參與ABA 信號(hào)通路的、MiOFP1 是否影響杧果開花、能否通過(guò)提高ABA 含量來(lái)增強(qiáng)杧果逆境抵御能力還不清楚，需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

杧果MiOFP1 在童期莖的韌皮部組織中高度表達(dá)，而在成熟果實(shí)的果肉中表達(dá)水平較低；在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期葉片中表達(dá)水平較高，而在成花期表達(dá)水平較低。超量表達(dá)的MiOFP1 抑制擬南芥開花，但提高了種子在ABA 處理下的萌發(fā)率，減弱了擬南芥對(duì)ABA 脅迫的敏感性。說(shuō)明MiOFP1 可能與杧果的成花和ABA脅迫有關(guān)。

參考文獻(xiàn)References：

[1] LIU J P，VAN ECK J，CONG B，TANKSLEY S D. 番茄OVATE基因調(diào)控果實(shí)梨形發(fā)育[J]. 楊莉，張嵐嵐，徐昌杰，譯. 植物學(xué)通報(bào)，2003，38（1）：127.LIU J P，VAN Eck J，CONG B，TANKSLEY S D. OVATE generegulates pear shape development of tomato fruit[J]. ，YANG Li，ZHANG Lanlan，XU Changjie，Translated. Chinese Bulletin ofBotany，2003，38（1）：127.

[2] 張靜，謝碧玉，徐碧玉，劉菊華. 卵形家族蛋白對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控作用[J]. 分子植物育種，2019，17（10）：3283-3288.

ZHANG Jing，XIE Biyu，XU Biyu，LIU Juhua. Regulatory rolesof ovate family proteins on plant growth and development[J].Molecular Plant Breeding，2019，17（10）：3283-3288.

[3] HACKBUSCH J，RICHTER K，M?LLER J，SALAMINI F，UHRIG J F. A central role of Arabidopsis thaliana ovate familyproteins in networking and subcellular localization of 3-aa loopextension homeodomain proteins[J]. Proceedings of the NationalAcademy of Sciences of the United States of America，2005，102（13）：4908-4912.

[4] 李曉. 水稻OsOFP22 轉(zhuǎn)錄因子功能分析[D]. 長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2017.

LI Xiao. The functional analysis of OsOFP22 transcription factor[D]. Changchun：Jilin University，2017.

[5] 陳浩源. OsOFP22 通過(guò)赤霉素和油菜素甾醇調(diào)控水稻株型和粒型的機(jī)制分析[D]. 長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2021.

CHEN Haoyuan. Mechanism analysis of OsOFP22 regulatingplant morphology and grain shape by gibberellin and brassinosteroidin rice （Oryza sativa L.）[D]. Changchun：Jilin University，2021.

[6] ZHOU S G，CHENG X，LI F F，F(xiàn)ENG P P，HU G L，CHEN GP，XIE Q L，HU Z L. Overexpression of SlOFP20 in tomato affectsplant growth，chlorophyll accumulation，and leaf senescence[J]. Frontiers in Plant Science，2019，10：1510.

[7] SHAN Y J，LI D，CAO J J，ZHANG L，HAN L Q，ZHANG MP，SHEN Z G. Over- expression of Arabidopsis ORANGE geneenhances drought stress tolerance through ABA-dependent pathwayin Arabidopsis thaliana[J]. Plant Growth Regulation，2022，96（1）：91-101.

[8] 梁瀟，劉丹梅，姜兆彤，刁玉峰，劉文璐，袁珺.‘紅顏草莓栽培種FaNCED4 基因克隆與脅迫表達(dá)[J/OL]. 分子植物育種，2022：1-10[2022-07-10]. http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S.20220613.1150.010.html.

LIANG Xiao，LIU Danmei，JIANG Zhaotong，DIAO Yufeng，LIU Wenlu，YUAN Jun. Cloning and expression of FaNCED4gene in‘Benihoppestrawberry cultivars under stress[J/OL].Molecular Plant Breeding，2022：1- 10[2022- 07- 10]. http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S.20220613.1150.010.html.

[9] 羅忍忍，王瑞丹，曹磊，李麗麗，李翔，袁燁，晏家茹，侯娟，胡建斌. 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)冷脅迫下甜瓜幼苗生理特性及相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，56（3）：411-419.

LUO Renren，WANG Ruidan，CAO Lei，LI Lili，LI Xiang，YUANYe，YAN Jiaru，HOU Juan，HU Jianbin. Effects of plantgrowth regulators on physiological characteristics and relatedgene expression in melon seedlings under cold stress[J]. Journalof Henan Agricultural University，2022，56（3）：411-419.

[10] 李振華，劉容，張馨馨，趙心笛，劉敏婷，柴琦. 外源脫落酸增強(qiáng)高羊茅耐鹽性的作用[J]. 北方園藝，2022（7）：66-75.

LI Zhenhua，LIU Rong，ZHANG Xinxin，ZHAO Xindi，LIUMinting，CHAI Qi. Effects of exogenous abscisic acid on enhancingsalt tolerance of Festuca arundinacea[J]. Northern Horticulture，2022（7）：66-75.

[11] 盧琳. OsOFP19 過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻農(nóng)藝性狀與干旱響應(yīng)的鑒定與分析[D]. 長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2022.

LU Lin. Identification and analysis of agronomic traits anddrought response of OsOFP19-overexpressing transgenic rice[D].Changchun：Jilin University，2022.

[12] 范志毅，羅聰，余海霞，曾學(xué)梅，王金英，謝小杰，何新華. 芒果MiFY 基因克隆和表達(dá)模式分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2021，42（2）：297-302.

FAN Zhiyi，LUO Cong，YU Haixia，ZENG Xuemei，WANGJinying，XIE Xiaojie，HE Xinhua. Cloning and expression analysisof a MiFY gene in mango[J]. Chinese Journal of TropicalCrops，2021，42（2）：297-302.

[13] GUO Y H，LUO C，LIU Y，LIANG R Z，YU H X，LU X X，MOX，CHEN S Q，HE X H. Isolation and functional analysis of twoCONSTANS- like 1 genes from mango[J]. Plant Physiology andBiochemistry，2022，172：125-135.

[14] MO X，LUO C，YU H X，CHEN JW，LIU Y，__________XIE X J，F(xiàn)AN Z Y，HE X H. Isolation and functional characterization of two SHORTVEGETATIVE PHASE homologous genes from mango[J]. InternationalJournal of Molecular Sciences，2021，22（18）：9802.

[15] ARIF M，LI Z T，LUO Q，LI L H，SHEN Y Q，MEN S Z. TheBAG2 and BAG6 genes are involved in multiple abiotic stresstolerances in Arabidopsis thaliana[J]. International Journal ofMolecular Sciences，2021，22（11）：5856.

[16] 楊天宸，陳曉童，呂可，張荻. 百子蓮脫水素基因ApSK3 對(duì)逆境與激素信號(hào)的應(yīng)答模式與調(diào)控機(jī)制[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2021，48（8）：1565-1578.

YANG Tianchen，CHEN Xiaotong，L? Ke，ZHANG Di. Expressionpattern and regulation mechanism of ApSK3 dehydrin （Agapanthus praecox） response to abiotic stress and hormonesignals[J]. Acta Horticulturae Sinica，2021，48（8）：1565-1578.

[17] 李世琦. 巨球百合細(xì)胞壁轉(zhuǎn)化酶基因及其啟動(dòng)子功能初探[D].杭州：浙江大學(xué)，2021.

LI Shiqi. A preliminary study on the function research of cellwall invertase gene and its promoter of Lilium brownii var. giganteum[D]. Hangzhou：Zhejiang University，2021.

[18] 于慧. 水稻OsOFP 轉(zhuǎn)錄因子家族基因克隆與功能分析[D]. 長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2015.

YU Hui. The genes cloning and functional analysis of OsOFPtranscription factor family in rice （Oryza sativa L.）[D]. Changchun：Jilin University，2015.

[19] 袁月，張亞光，高世敏，陶建敏. 葡萄OVATE 基因家族生物信息學(xué)及表達(dá)[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，49（19）：3786-3797.

YUAN Yue，ZHANG Yaguang，GAO Shimin，TAO Jianmin.Bioinformatics and expression of the OVATE gene family ingrape[J]. Scientia Agricultura Sinica，2016，49（19）：3786-3797.

[20] 徐渴，王偉偉，武寧?kù)o，張樹華，趙勇，楊學(xué)舉. 小麥OFP 基因家族鑒定及其低溫脅迫的表達(dá)分析[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2021，29（9）：1665-1677.

XU Ke，WANG Weiwei，WU Ningjing，ZHANG Shuhua，ZHAO Yong，YANG Xueju. Identification of OFP gene familyand their expression analysis under low- temperature stress inwheat （Triticum aestivum） [J]. Journal of Agricultural Biotechnology，2021，29（9）：1665-1677.

[21] 蔡玲. 卵形蛋白家族轉(zhuǎn)錄因子AtOFP15 對(duì)擬南芥莢果形態(tài)的調(diào)控[D]. 長(zhǎng)春：東北師范大學(xué)，2017.

CAI Ling. Regulation of silique morphology by ovate familyprotein AtOFP15 in Arabidopsis[D]. Changchun：Northeast NormalUniversity，2017.

[22] 周升恩. 兩個(gè)番茄轉(zhuǎn)錄因子SlOFP20 和SlGT16 在生長(zhǎng)發(fā)育中的功能研究[D]. 重慶：重慶大學(xué)，2020.

ZHOU Shengen. Functional study of two tomato transcriptionfactors SlOFP20 and SlGT16 genes in growth and development[D]. Chongqing：Chongqing University，2020.

[23] 唐堯. 擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AtOFP8 在干旱脅迫下的功能分析[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2018.

TANG Yao. Functional analysis of Arabidopsis transcriptionalfactor AtOFP8 under drought stress[D]. Harbin：Northeast AgriculturalUniversity，2018.

[24] MA Y M，YANG C，HE Y，TIAN Z H，LI J X. Rice OVATEfamily protein 6 regulates plant development and confers resistanceto drought and cold stresses[J]. Journal of ExperimentalBotany，2017，68（17）：4885-4898.

[25] 許瑞瑞，李睿，王小非，郝玉金. 蘋果OFP 基因家族的全基因組鑒定與非生物逆境表達(dá)分析[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，51（10）：1948-1959.

XU Ruirui，LI Rui，WANG Xiaofei，HAO Yujin. Identificationand expression analysis under abiotic stresses of OFP gene familyin apple[J]. Scientia Agricultura Sinica，2018，51（10）：1948-1959.

[26] 王靜雅，劉文娟，呂祎馨，尚海，米小琴，張琳，劉美蘭. 油桐OFP 基因家族的全基因組鑒定及低溫響應(yīng)分析[J]. 植物生理學(xué)報(bào)，2020，56（5）：949-960.

WANG Jingya，LIU Wenjuan，L? Yixin，SHANG Hai，MI Xiaoqin，

ZHANG Lin，LIU Meilan. Genome-wide identification andlow temperature response analysis of OFP gene family in tungtree （Vernicia fordii） [J]. Plant Physiology Journal，2020，56（5）：949-960.

[27] FUJII H，VERSLUES P E，ZHU J K. Arabidopsis decuple mutantreveals the importance of SnRK2 kinases in osmotic stressresponses in vivo[J]. Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America，2011，108（4）：1717-1722.

[28] NISHIMURA N，YOSHIDA T，KITAHATA N，ASAMI T，SHINOZAKIK，HIRAYAMA T. ABA- Hypersensitive Germination1encodes a protein phosphatase 2C，an essential componentof abscisic acid signaling in Arabidopsis seed[J]. The Plant Journal，2007，50（6）：935-949.

[29] 符楊磊，魏志園，王宇，劉瀟陽(yáng)，王冰冰，喬亞科，李桂蘭，張鍇.冀東野生大豆（Glycine soja）耐鹽堿性鑒定及耐性生理指標(biāo)測(cè)定[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào)，2020，34（10）：2316-2325.

FU Yanglei，WEI Zhiyuan，WANG Yu，LIU Xiaoyang，WANGBingbing，QIAO Yake，LI Guilan，ZHANG Kai. Identificationof saline- alkali stress and determination of physiological indexof wild soybean （Glycine soja） in eastern Hebei Province[J].Journal of Nuclear Agricultural Sciences，2020，34（10）：2316-2325.

[30] 湯日圣，唐現(xiàn)洪，鐘雨，張大棟，余永柱，童紅玉. 微生物源ABA 對(duì)茄苗抗冷性和某些生理指標(biāo)的影響[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2006，33（1）：149-151.

TANG Risheng，TANG Xianhong，ZHONG Yu，ZHANG Dadong，YU Yongzhu，TONG Hongyu. Effect of microorganismsourcedABA on chilling resistance and some physiological indexesin eggplant seedling[J]. Acta Horticulturae Sinica，2006，33（1）：149-151.

[31] SEO Y J，PARK J B，CHO Y J，JUNG C，SEO H S，PARK S K，NAHM B H，SONG J T. Overexpression of the ethylene-responsivefactor gene BrERF4 from Brassica rapa increases toleranceto salt and drought in Arabidopsis plants[J]. Molecules andCells，2010，30（3）：271-277.

[32] 韓萍萍. 藜麥PEBP 基因家族及種子休眠相關(guān)基因功能分析[D]. 濟(jì)南：山東師范大學(xué)，2021.

HAN Pingping. Function analysis of quinoa PEBP family geneand seed dormancy related genes[D]. Jinan：Shandong NormalUniversity，2021.

[33] MSANNE J，LIN J S，STONE J M，AWADA T. Characterizationof abiotic stress- responsive Arabidopsis thaliana RD29A andRD29B genes and evaluation of transgenes[J]. Planta，2011，234（1）：97-107.