丹參酮ⅡA對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌細(xì)胞凋亡及PI3K/Akt通路的影響

柴松波， 王振濤， 張淑娟， 劉舜禹

(河南省中醫(yī)院/河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院心病科，鄭州 450002)

擴(kuò)張型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM)為臨床常見心臟疾病，患者常出現(xiàn)心室收縮功能障礙、心室重構(gòu)，若沒有得到及時(shí)治療，則會(huì)病情加重，發(fā)展為心力衰竭[1]。近期研究顯示心肌細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致DCM發(fā)生時(shí)心室收縮功能不足、左心室功能惡化的主要原因，因此抑制心肌細(xì)胞凋亡可緩解心肌損傷以及心室重構(gòu)[2]。丹參酮ⅡA為丹參中具有代表性的生物活性成分，丹參酮ⅡA 磺酸鈉(sodium tanshinone ⅡA sulfonate, STS)為其主要提取物，大量研究顯示在心肌缺血再灌注損傷、心肌肥大、DCM中均具有良好的療效，然而其具體作用機(jī)制目前尚不明確[3]。本研究通過(guò)制備DCM大鼠，并給予STS治療，以觀察STS對(duì)DCM大鼠心肌細(xì)胞凋亡的改善作用，并初步探討可能作用機(jī)制，以期為STS應(yīng)用于心肌梗死臨床治療提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取7～8周齡SPF級(jí)雄性 Wistar大鼠72只，體重60～70 g, 由河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[SYXK(豫)2017-0002]，所有大鼠均在22℃～25℃，相對(duì)濕度50%的環(huán)境中統(tǒng)一飼養(yǎng)[SYXK(豫)2017-0016]，大鼠自由飲水、攝食，保持通風(fēng)、光照良好，正常飼養(yǎng)一周后用于模型制備。本研究經(jīng)本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的處理符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，倫理審批號(hào)：IACUC-20170208015。

1.2 主要試劑與儀器

STS注射劑購(gòu)于上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20170218；卡維地洛(carvedilol，CAR)購(gòu)于齊魯制藥有限公司，批號(hào)：20170326；呋喃唑酮片購(gòu)于長(zhǎng)春新安藥業(yè)有限公司批號(hào)：20170121；多普勒超聲檢測(cè)儀購(gòu)于西門子公司；HE染色試劑盒購(gòu)于上海生工生物工程有限公司；Tunel檢測(cè)試劑盒購(gòu)于杭州碧云天生物科技有限公司；蛋白檢測(cè)試劑盒、BCA測(cè)定試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔抗鼠p-PI3K、p-Akt、caspase3、B淋巴細(xì)胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、(Bcl-2 associated X protein，Bax)單抗購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，HRP標(biāo)記IgG二抗、βactin均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；電子顯微鏡購(gòu)于日本奧林巴斯公司；垂直電泳儀與凝膠成像儀購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad公司；SP檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京康為世紀(jì)公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 模型制備

參照文獻(xiàn)[4]制備DCM大鼠，選取60只大鼠，灌胃呋喃唑酮水溶液(按1 kg水加700 mg呋喃唑酮配置)，每日更換一次。造模時(shí)間為8周。并用超聲診斷儀完成心臟超聲心動(dòng)圖監(jiān)測(cè)，超聲心動(dòng)圖顯示左心室壁彌漫性運(yùn)動(dòng)減弱，射血分?jǐn)?shù)較對(duì)照組大鼠射血分?jǐn)?shù)均值減少20%為造模成功的標(biāo)志。另設(shè)一正常對(duì)照組大鼠12只，自主飲水連續(xù)8周。

1.3.2 動(dòng)物分組與給藥

模型制備后，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為5組，模型組(DCM組)、STS中、高、低劑量組、CAR組，每組12只大鼠，STS各組大鼠：模型結(jié)束后腹腔注射17.5、35.0、70.0 mg/kg STS；卡維地洛組(陽(yáng)性對(duì)照組)：模型結(jié)束后腹腔注射10 mg/kg CAR；每日上午1次，連續(xù)給藥4周。對(duì)照組、DCM組大鼠腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)4周。

1.3.3 超聲檢測(cè)左心室功能。

末次給藥結(jié)束后，麻醉大鼠，于二維超聲引導(dǎo)下測(cè)定左心長(zhǎng)軸切面左室收縮末期內(nèi)徑(left ventricular internal diameter at end-systole, LVIDs)和左心室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular internal dimension at end-diastole, LVIDd)以及左心室射血分?jǐn)?shù)(Left ventricular ejection fraction，LVEF)，連續(xù)測(cè)定4個(gè)完整心動(dòng)周期，重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。

1.3.4 標(biāo)本采集

心功能檢測(cè)結(jié)束后，麻醉后處死大鼠，腹動(dòng)脈取血2 mL，3000 r/min離心5 min后保留上層血清；取出心臟，清洗后，摘除非心肌組織，取心室橫徑最大部分心肌組織，一部分于-80℃中保存，一部分置于4%多聚甲醛中固定。

1.3.5 血清TNF-ɑ、IL-6水平檢測(cè)

采用Elisa試劑盒檢測(cè)血清中TNF-ɑ、IL-6水平，具體參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3.6 心肌組織染色

常規(guī)制備心肌組織石蠟切片，烘烤后，在二甲苯中脫蠟，梯度乙醇中脫水，PBS清洗后，采用蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin， HE)染色試劑盒進(jìn)行染色，將切片置于顯微鏡下，觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)變化，統(tǒng)計(jì)心肌纖維化情況，無(wú)心肌纖維化為0分，纖維化區(qū)域比例<25%為1分，纖維化區(qū)域比例25%～50%記為2分，51%～75%記為3分，>75%記為4分。

Masson染色：石蠟切片加入、脫蠟脫水后進(jìn)行鉻化處理，參照Masson染色試劑盒進(jìn)行染色，切片最后脫水、透明、封片后。采用Metic Med 6.0軟件計(jì)算心肌膠原纖維比例(%)=膠原面積/總面積 × 100%。

1.3.7 TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況

制備心肌組織冷凍切片，根據(jù)TUNEL染色試劑盒說(shuō)明書對(duì)組織進(jìn)行染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞凋亡數(shù)情況，Image-Pro Plus軟件定量細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)量，計(jì)算心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI)=凋亡細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)/細(xì)胞總數(shù) × 100%。

1.3.8 蛋白免疫印跡

取出保存心肌組織研磨，添加裂解緩沖液裂解組織，抽提總蛋白，SDS-PAGE電泳分離等量蛋白后進(jìn)行轉(zhuǎn)模反應(yīng)后，加入5% BSA封閉1 h；加入p-PI3K、p-Akt、caspase-3、Bax、Bcl-2、β-actin一抗(1∶500)，4℃過(guò)夜孵育；添加二抗(1∶5000)，室溫孵育1 h，發(fā)光顯影后用Tanon軟件采集圖像并對(duì)蛋白進(jìn)行量化分析。

1.3.9 免疫組化檢測(cè)p-PI3K、p-Akt、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)

心肌組織切片石蠟切片添加檸檬酸鈉抗原修復(fù)，H2O2解除內(nèi)源過(guò)氧化酶活性，封閉后，于4℃加入p-PI3K、 p-Akt、caspase-3、 Bax、Bcl-2一抗孵育過(guò)夜，滴加HRP標(biāo)記IgG二抗后，添加蘇木精染液復(fù)染、氨水反藍(lán)，置于梯度乙醇中脫水、二甲苯透明，用中性樹脂封片后置于顯微鏡下觀察蛋白表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 STS對(duì)DCM大鼠左心室功能的影響

與對(duì)照組相比，DCM組LVIDs、LVIDd升高，LVEF降低，差異具有顯著性(P<0.05)；與DCM組相比，STS各組以及CAR組LVIDs、LVIDd降低，LVEF升高，差異具有顯著性(P<0.05)。(圖1、表1)

2.2 DCM大鼠心肌組織病理學(xué)變化情況

對(duì)照組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)完整，心肌細(xì)胞以及膠原纖維排列緊密、規(guī)則。DCM組大鼠心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，出現(xiàn)壞死，細(xì)胞排列疏松、膠原纖維斷裂、排列不規(guī)則，同時(shí)伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。STS各組以及CAR組大鼠破碎、壞死心肌細(xì)胞明顯減少，細(xì)胞以及膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常。

與對(duì)照組相比，DCM組心肌組織病理學(xué)評(píng)分、心肌膠原纖維比例均升高，差異具有顯著性(P<0.05)；與DCM組相比，STS各組以及CAR組病理學(xué)評(píng)分、心肌膠原纖維比例均降低，差異具有顯著性(P<0.05)。(圖2、表2)

2.3 STS對(duì)DCM大鼠血清TNF-ɑ、IL-6水平的影響

與對(duì)照組相比，DCM組TNF-ɑ、IL-6水平均升高，差異具有顯著性(P<0.05)；與DCM組相比，STS各組以及CAR組TNF-ɑ、IL-6水平均降低，差異具有顯著性(P<0.05)；TNF-ɑ、IL-6水平均呈劑量依賴性(P<0.05)。(表3)

圖1 超聲檢測(cè)大鼠心臟的左心室功能Figure 1 Echocardiographic detection of the left ventricular function in the rats

組別Groups LVIDs(mm)LVIDd(mm)LVEF(%) 對(duì)照組Control group1.86±0.174.46±0.6485.33±7.87DCM組DCM group2.54±0.25?6.94±0.87?69.95±4.31?STS-L組STS-L group2.31±0.28#6.27±0.59#75.15±3.96#STS-M組STS-M group2.27±0.33#6.14±0.41#76.33±6.28#STS-H組STS-H group2.19±0.25#5.87±0.55#77.94±4.67#CAR組CAR group2.08±0.14#5.71±0.68#79.75±5.84#

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DCM組比較，#P<0.05。

Note. Compared with the control group,*P<0.05. Compared with the DCM group,#P<0.05.

圖2 大鼠心肌組織的病理改變。HE、Masson染色Figure 2 Histological changes in the myocardium of the rats. Hematoxylin and eosin, and Masson trichrome staining

組別Groups 病理學(xué)評(píng)分Pathological scores心肌膠原纖維比例Myocardial collagen fiber ratio 對(duì)照組Control group0.16±0.036.52±0.31DCM組DCM group3.67±0.56?56.42±7.39?STS-L組STS-L group3.25±0.33#45.73±5.41#STS-M組STS-M group2.88±0.29#&34.21±6.32#&STS-H組STS-H group2.09±0.28#&△30.72±4.37#&CAR組CAR group1.96±0.35#24.66±3.51#

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DCM組比較，#P<0.05；與STS-L組比較，&P<0.05；與STS-M組比較，△P<0.05。

Note. Compared with the control group,*P<0.05. Compared with the DCM group,#P<0.05. Compared with the STS-L group,&P<0.05. Compared with the STS-M group,△P<0.05.

表3 各組血清TNF-ɑ、IL-6水平比較Table 3 Serum TNF-ɑ and IL-6 levels in each group

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DCM組比較，#P<0.05；與STS-L組比較，&P<0.05；與STS-M組比較，△P<0.05。

Note. Compared with the control group,*P<0.05. Compared with the DCM group,#P<0.05. Compared with the STS-L group,&P<0.05. Compared with the STS-M group,△P<0.05.

2.4 STS對(duì)DCM大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

與對(duì)照組相比，DCM組心肌細(xì)胞AI升高，差異具有顯著性(P<0.05)；與DCM組相比，STS各組以及CAR組心肌細(xì)胞AI均降低，差異具有顯著性(P<0.05)；隨著劑量的升高，心肌細(xì)胞凋亡率降低(P<0.05)。(圖3、表4)

2.5 Western blot法檢測(cè)大鼠心肌組織p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、caspase-3、Bax蛋白表達(dá)

圖3 TUNEL法觀察各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況(×100)Figure 3 Apoptosis in cardiomyocytes in the rat heart tissues in each group. TUNEL staining.

組別Groups 細(xì)胞凋亡(%)Apoptosis index 對(duì)照組Control group11.56±1.32DCM組DCM group42.17±3.78?STS-L組STS-L group32.81±3.26#STS-M組STS-M group25.37±3.01#&STS-H組STS-H group19.56±2.27#&△CAR組CAR group18.74±2.34#

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DCM組比較，#P<0.05；與STS-L組比較，&P<0.05；與STS-M組比較，△P<0.05。

Note. Compared with the control group,*P<0.05. Compared with the DCM group,#P<0.05. Compared with the STS-L group,&P<0.05. Compared with the STS-M group,△P<0.05.

與對(duì)照組相比，DCM組p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)降低，caspase-3、Bax蛋白表達(dá)升高，差異具有顯著性(P<0.05)；與DCM組相比，STS各組以及CAR組p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)升高，caspase-3、Bax蛋白表達(dá)降低，差異具有顯著性(P<0.05)；p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、caspase-3、Bax蛋白表達(dá)呈劑量依賴性(P<0.05)。(圖4、表5)

2.6 免疫組化法檢測(cè)各組大鼠心肌p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、caspase3、Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況

與對(duì)照組相比，DCM組p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率降低，caspase-3、Bax陽(yáng)性表達(dá)率表達(dá)升高，差異具有顯著性(P<0.05)；與DCM組相比，STS各組以及CAR組p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率升高，caspase-3、Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)率降低，差異具有顯著性(P<0.05)；隨著STS劑量的升高，caspase-3、Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高。(圖5、表6)

注：A：對(duì)照組；B：DCM組；C：STS-L組；D：STS-M組；E：STS-H組；F：CAR組。圖4 Western blot檢測(cè)心肌組織中p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、caspase-3、Bax蛋白表達(dá)Note. A, Control group. B, DCM group. C, STS-L group. D, STS-M group. E, STS-H group. F, CAR group.Figure 4 The expressions of p-PI3K, p-Akt, Bcl-2, Caspase-3 and Bax in the rat myocardial tissues of each group, detected by western blotting

表5 各組心肌p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、caspase-3、Bax蛋白表達(dá)的比較Table 5 Comparison of protein expressions of p-PI3K, p-Akt, Bcl-2, Caspase-3 and Bax in the rat myocardia of different groups

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DCM組比較，#P<0.05；與STS-L組比較，&P<0.05；與STS-M組比較，△P<0.05。

Note. Compared with the control group,*P<0.05. Compared with the DCM group,#P<0.05. Compared with the STS-L group,&P<0.05. Compared with the STS-M group,△P<0.05.

圖5 心肌組織中p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、caspase-3、Bax蛋白的表達(dá)。免疫組化染色。Figure 5 Expression of p-PI3K, p-Akt, Bcl-2, caspase-3, and Bax proteins in the rat myocardial tissues. Immunohistochemical staining.

組別Groups p-PI3Kp-AktBcl-2Caspase-3Bax 對(duì)照組Control group60.34±6.4466.73±6.1848.17±6.7410.86±2.1310.57±1.82DCM組DCM group13.58±2.13?15.16±3.09?11.27±2.09?48.08±5.29?45.19±4.03?STS-L組STS-L group20.16±2.87#22.63±3.17#19.14±2.27#32.13±9.18#38.13±3.48#STS-M組STS-M group29.24±3.16#&34.52±5.37#&32.72±3.15#&28.17±4.34#29.18±2.24#&STS-H組STS-H group38.47±3.35#&△46.53±7.48#&△38.17±6.74#&△23.08±4.18#&△18.87±4.03#&△CAR組CAR group54.08±1.59#54.26±6.87#41.42±3.43#21.16±1.35#17.74±3.39#

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DCM組比較，#P<0.05；與STS-L組比較，&P<0.05；與STS-M組比較，△P<0.05。

Note. Compared with the control group,*P<0.05. Compared with the DCM group,#P<0.05. Compared with the STS-L group,&P<0.05. Compared with the STS-M group,△P<0.05.

3 討論

DCM主要表現(xiàn)為心室擴(kuò)張以及收縮功能減弱，調(diào)查顯示1985年美國(guó)某地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查顯示DCM患病率為36.5/10萬(wàn)，2002年中國(guó)分層整群抽樣調(diào)查顯示DCM患病率約為19/10萬(wàn)，且近幾年發(fā)病率仍逐漸升高，嚴(yán)重影響患者生命健康[5]。DCM具體發(fā)病原因目前尚不明確，缺乏有效治療手段，因此探究其發(fā)病機(jī)制，尋找新型治療藥物是目前的重要任務(wù)。

本研究通過(guò)灌胃呋喃唑酮水溶液制備DCM大鼠，結(jié)果顯示與對(duì)照組比較，DCM組DCM組LVIDs、LVIDd升高，LVEF降低，血清TNF-ɑ、IL-6水平升高，HE染色發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞形態(tài)破碎，排列疏松，出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，表明DCM大鼠左心室擴(kuò)張，收縮功能降低，且心肌組織伴有炎癥損傷，符合以往DCM模型典型特征[6]，提示DCM模型復(fù)制成功。

STS是從中草藥丹參莖中提取的二萜醌類化合物，通過(guò)磺化反應(yīng)制成的藥物，其中丹參酮ⅡA為主要藥理成分，藥理學(xué)研究顯示丹參酮ⅡA能夠降低血液黏稠度,消除過(guò)量氧自由基，使冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張，提高心肌組織血流量，進(jìn)而提高心肌能量?jī)?chǔ)備，使心肌收縮力增強(qiáng)[7]。本研究顯示與DCM組比較，STS各組LVIDs、LVIDd降低，LVEF升高，血清TNF-ɑ、IL-6水平降低，HE染色發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞壞死數(shù)減少，心肌細(xì)胞以及膠原纖維形態(tài)逐漸恢復(fù)正常，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯較少，隨著STS劑量的升高，大鼠心臟功能逐漸恢復(fù)，心肌損傷程度逐漸降低，且STS高劑量組與CAR組效果相似。劉崇斌等[8]研究發(fā)現(xiàn)，STS可改善DCM大鼠心功能，減輕左室重構(gòu)，減少心肌纖維化進(jìn)而保護(hù)心肌組織，與本研究結(jié)果一致。以上研究結(jié)果提示STS可緩解大鼠心肌損傷，改善DCM大鼠左心室功能保護(hù)心肌組織。

心肌組織受損是由多因素共同參與、作用的結(jié)果，與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。一般情況細(xì)胞凋亡有利于維持機(jī)體健康狀態(tài)非常重要；當(dāng)細(xì)胞受到外界以及內(nèi)部刺激時(shí)，細(xì)胞正常凋亡程序紊亂，引發(fā)細(xì)胞異常凋亡，引起組織細(xì)胞壞死等病理?yè)p傷[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，DCM組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高；與DCM組比較，STS組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低，提示STS能夠有效抑制DCM大鼠心肌細(xì)胞凋亡。

本研究顯示與對(duì)照組比較，DCM組心肌p-PI3K、p-Akt表達(dá)降低，表明活PI3K/Akt信號(hào)通路可能參與DM的發(fā)生。PI3K作為PI3K/Akt信號(hào)通路起始因子，在機(jī)體內(nèi)生長(zhǎng)因子、能量信號(hào)改變后激活I(lǐng)RS，隨后結(jié)合PI3K，產(chǎn)生PTP2以及PTP3，Akt在PTP2的刺激下產(chǎn)生二聚體并在PTP3、PDK的共同作用下使AKT與細(xì)胞膜相結(jié)合，進(jìn)一步使Akt發(fā)生磷酸化，隨后從細(xì)胞膜上釋放出來(lái)進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)傳遞信號(hào)[11-12]。過(guò)往研究顯示STS通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路抵抗抗內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷[13]。金云曄等[14]研究顯示STS通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路降低因缺血再灌注損傷導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)心肌功能。李佳等[15]研究顯示，給予心肌缺血再灌注損傷大鼠PI3K特異性抑制劑后，大鼠心肌細(xì)胞凋亡率明顯升高。以上研究表明，在心肌缺血再灌注損傷大鼠中發(fā)現(xiàn)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，能夠保護(hù)心室功能，降低心肌梗塞面，減少心肌壞死細(xì)胞[16]。本研究發(fā)現(xiàn)與DCM組比較，STS組大鼠心肌組織中p-PI3K、p-Akt表達(dá)升高，隨著STS劑量的升高p-PI3K、p-Akt表達(dá)升高，逐漸升高，STS高劑量組與CAR組表達(dá)水平相近，提示STS可能通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路抑制DCM大鼠心肌細(xì)胞凋亡，進(jìn)而緩解心肌組織損傷，保護(hù)心肌功能。

細(xì)胞凋亡過(guò)程中涉及多種凋亡誘導(dǎo)、抑制因子，Bcl-2家族中包括多種與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的蛋白成員，包括Bcl-2抗凋亡因子以及促凋亡因子Bax[17]。細(xì)胞未受損時(shí)，Bcl-2、Bcl-XL與Bax形成二聚體，受到損傷刺激后Bax蛋白大量表達(dá)，二聚體含量升高聚集于線粒體膜導(dǎo)致線粒體膜通透性增加，AIF凋亡因子進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，激活caspase-3級(jí)聯(lián)反應(yīng)引發(fā)細(xì)胞凋亡[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)，DCM組caspase-3、Bax表達(dá)顯著升高，Bcl-2表達(dá)顯著降低；STS干預(yù)后，caspase-3、Bax蛋白表達(dá)顯著降低，Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高，隨著STS劑量的升高，caspase-3、Bax蛋白表達(dá)逐漸降低，Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高，STS高劑量組與CAR組表達(dá)相近，提示STS可抑制caspase-3信號(hào)通路的激活抑制細(xì)胞凋亡，結(jié)合以上研究提示STS可能通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，進(jìn)而抑制caspase-3凋亡通路激活，減少心肌細(xì)胞凋亡，發(fā)揮心肌損傷保護(hù)作用。

綜上所述，STS可減輕DCM大鼠心肌損傷，減少心肌細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與激活PI3K/Akt信號(hào)通路，抑制caspase-3凋亡通路激活有關(guān)，但STS僅能部分緩解心肌組織損傷并非完全逆轉(zhuǎn)，這可能與藥物劑量有關(guān)，也有可能是其它因素造成，還有待后續(xù)深入研究，以期為DCM的治療提供充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。