藍(lán)靛果忍冬E8離體快繁無菌體系建立分析

王瑞琦 李金英 趙春莉 劉子平 潘珠峰

摘要：本文以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)小漿果基地引進的藍(lán)靛果忍冬優(yōu)良品種E8為研究對象，從外植體的消毒、基本培養(yǎng)基、不同激素等方面進行了離體組織培養(yǎng)研究，旨在探求最適合藍(lán)靛果忍冬組培苗離體快繁的條件，從而篩選出最利于藍(lán)靛果忍冬組培苗擴大繁殖的培養(yǎng)基配方，從而實現(xiàn)大量優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖，為保存種質(zhì)資源和規(guī)?；a(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：藍(lán)靛果忍冬E8;組織培養(yǎng);離體快繁體系

基金項目：吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目——藍(lán)靛果忍冬種質(zhì)資源離體快繁研究;吉林省教育廳資助項目——長白山野生藍(lán)靛果忍冬資源優(yōu)良品種選育及配套栽培技術(shù)研究（合同編號：JJKH20180667KJ）

中圖分類號： S663 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標(biāo)識碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2019.06.013

藍(lán)靛果忍冬（Loniceraedulis）又名羊奶子、黑瞎子果、山茄子等，其營養(yǎng)豐富，不僅可用來鮮食、加工，還可提取色素，是一種珍稀的漿果資源[1，2]。另外，其嫩枝可入藥，清熱解毒，果實富含藥用保健成分，具有極高的藥用價值。因其利用價值頗高，故有“第三代水果”之稱，應(yīng)用前景較好。但對藍(lán)靛果忍冬的探究多集中在營養(yǎng)保健及栽培等方面上[3，4]。而關(guān)于藍(lán)靛果忍冬離體快繁方面的報道較少，而該植物實生繁殖較困難，扦插繁殖亦受外界因素影響較大，所以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進行離體快繁是有效的繁育種苗途徑。本試驗對藍(lán)靛果忍冬E8進行了植物組織培養(yǎng)研究，最終建立了無菌快速繁殖體系。

1材料與方法

1.1初代無菌苗的獲得

將吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹基地引進的藍(lán)靛果忍冬優(yōu)良品種E8半木質(zhì)化的枝條先進行表面清洗除塵除菌處理，然后將其置于超凈工作臺上，用0.1%的升汞溶液進行不同時間的消毒，最后無菌水沖洗至少3次以上。再用無菌濾紙吸去表面水分，在無菌紙上將外植體剪截的長度范圍是1.5～2cm，接種于事先配制好的，pH值為5.8的MS培養(yǎng)基中（BA2.0mg/L、IBA0.1mg/L，蔗糖和瓊脂分別為30g/L和8g/L）。試驗設(shè)10個處理，每瓶內(nèi)含1個外植體，1個月前后調(diào)查統(tǒng)計培養(yǎng)物生長狀況，例如污染、死亡和成活等方面。

1.2 增殖繼代培養(yǎng)

本試驗設(shè)10瓶為一個處理，外植體每瓶接入3個，1個月前后統(tǒng)計污染、增殖及成活。篩選適宜的基本培養(yǎng)基種類試驗中，Murashig and Skoog Medium（MS）、1/2Murashig and Skoog Medium（1/2 MS）、GamborgB5 Medium（B5）、CHU （N6） Medium（N6），激素為2.0mg/L-16-芐氨基腺嘌呤（6-BA）和0.1 mg/L吲哚丁酸（IBA）;不同生長素對組培苗增殖的探討中，MS中加入2.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤，與不同濃度（0.05、0.1、0.2mg/L）的吲哚丁酸、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）形成處理組合;在含有6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L及0.2mg/L吲哚丁酸的MS中，添加不同濃度水平（0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L）的赤霉素（GA3）。

1.3生根培養(yǎng)

每個處理接種10瓶，每瓶接種1～2個無根組培苗，30d左右觀察記錄組培苗生根率及根生長情況等指標(biāo)?；九囵B(yǎng)基篩選種類設(shè)為1/2MS、MS、B5、N6，添加IBA0.6mg/L。不同激素篩選種類設(shè)為NAA、IAA和IBA，濃度設(shè)為0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L。

1.4培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室環(huán)境的溫度為（25±1）℃，光照的時間為12h/d，光照強度2000 Lx左右。

2 結(jié)果與分析

2.1 E8初代無菌苗的獲得

外植體消毒時間長短對無菌苗的獲得影響差異較大。時間過短（4～6min），外植體污染率較高。培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)：消毒時間與污染率呈負(fù)相關(guān)，但與死亡率呈正相關(guān)。因此，時間要長短適宜才能成功獲得初代培養(yǎng)物。帶頂芽嫩梢消毒8min、無頂芽莖段10min較好。

2.2 E8組培苗的增殖

研究發(fā)現(xiàn)，B5和N6不適于組培苗的增殖，而在1/2MS培養(yǎng)基中的總體狀況稍好，而組培苗在MS培養(yǎng)基中增殖和生長狀況最優(yōu)。

不同激素對組培苗增殖的影響存在差異。NAA利于愈傷組織形成，而對組培苗的進一步分化增殖極為不利。從增殖倍數(shù)與長勢兩方面綜合考慮，IAA的適宜濃度是0.1mg/L。IBA對增殖起到的促進作用相對較明顯。

在分析GA3對組培苗增殖影響的結(jié)果時顯示，當(dāng)GA3的濃度為0.40mg/L時，其增殖倍數(shù)較高，芽苗總體長勢較優(yōu)。因此，E8組培苗適宜的增殖配方為MS培養(yǎng)基中添加適宜濃度的赤霉素（0.4mg/L）、6-BA（2.0mg/L）和IBA（0.2mg/L）。

2.3 E8組培苗瓶內(nèi)生根

在1/2MS培養(yǎng)基中的組培苗生根效果最好，在MS和B5培養(yǎng)基中生根效果欠佳，而在N6中表現(xiàn)最差。組培苗在含有不同濃度NAA中的總體表現(xiàn)是苗基部形成愈傷組織，不利于生根培養(yǎng)，吲哚乙酸對各種質(zhì)的組培苗生根誘導(dǎo)起到了一定積極影響，但生根率相對低些，IBA濃度為1.0mg/L時，生根率可達(dá)100%，因此，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)的適宜條件為1/2MS培養(yǎng)基+1.0mg/L IBA。

3結(jié)論

本研究經(jīng)過近一年的試驗，成功建立了藍(lán)靛果忍冬E8的離體快速繁殖體系，該試驗結(jié)果可為藍(lán)靛果忍冬優(yōu)良品種工廠化快速繁育優(yōu)質(zhì)種苗提供科學(xué)參考。

參考文獻

[1]劉麗華，姜興明.長白山區(qū)藍(lán)靛果經(jīng)濟林的營造技術(shù)[J].國土綠化，2014（07）：39.

[2]田新華，吳捷，張建瑛，等.藍(lán)靛果忍冬組織培養(yǎng)研究[J].林業(yè)科技，2012，37（06）：7-9.

[3]周麗萍，王化，李夢莎，等.藍(lán)靛果保健功能研究進展[J].國土與自然資源研究，2016（05）：92-95.

[4]王柏林.藍(lán)靛果豐產(chǎn)栽培技術(shù)[J].農(nóng)村實用科技信息，2014（11）：7.

作者簡介：王瑞琦，本科生在讀，研究方向：果樹栽培。

通訊作者：李金英，博士，講師，研究方向：植物組織培養(yǎng)及資源。