PD-1/PD-L1抑制性信號(hào)通路在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的臨床意義

劉貝貝 董 楓

宮頸癌目前仍然是婦科癌癥中發(fā)病率及死亡率較高的惡性腫瘤之一，發(fā)病年齡逐漸趨于年輕化。宮頸癌的發(fā)生與機(jī)制較為復(fù)雜，通常持續(xù)性感染高危型人乳頭瘤病毒(HPV)、性生活紊亂及一些致癌物的刺激等均可在一定程度上增加患宮頸癌的幾率[1-2]。近年來以生物學(xué)標(biāo)志物為基礎(chǔ)的免疫治療成為當(dāng)今研究的一大熱點(diǎn)[3]。研究表明以程序性死亡受體-1/程序性死亡配體-1(PD-1/PD-L1)為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥表現(xiàn)出較好的臨床療效及耐受性[4]。隨著醫(yī)學(xué)與免疫學(xué)研究的深入，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展被發(fā)現(xiàn)與機(jī)體免疫機(jī)制有著密切關(guān)系。人體免疫功能不僅可以監(jiān)視、殺滅癌細(xì)胞，在一定程度上還可以幫助癌細(xì)胞逃脫免疫細(xì)胞的監(jiān)視，促進(jìn)癌細(xì)胞免疫逃逸。因此該研究主要分析不同宮頸組織及外周血中PD-1/PD-L1中的表達(dá)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

采集2015年2月至2017年7月在本院進(jìn)行治療的60例宮頸癌患者的新鮮腫瘤組織標(biāo)本(宮頸癌組)，40例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織(CIN組)，另采集20位健康者宮頸組織標(biāo)本(健康組)。宮頸癌組患者平均年齡為(42.75±3.21)歲，CIN組患者平均年齡為(43.26±2.32)歲，健康組人員平均年齡為(47.82±4.46)歲，3組年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18周歲；自愿簽署知情同意書；所有宮頸癌患者必須經(jīng)影像學(xué)檢查及術(shù)前、術(shù)后病理確診為宮頸癌；術(shù)前未接受局部治療(如放療)、全身性治療(如化療)、激素治療、免疫治療等其他抗腫瘤治療；所有CIN患者經(jīng)過宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)及術(shù)前術(shù)后病理確診為CIN；健康志愿者無任何宮頸疾病及其他伴隨疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：文盲及溝通困難者；伴隨自身免疫性疾??；伴隨嚴(yán)重感染；近1個(gè)月或正在使用免疫抑制性藥物。

1.3 試驗(yàn)方法

宮頸組織：將所有受試者的宮頸組織制作為4 μm厚的連續(xù)切片，將其脫蠟脫水后用微波修復(fù)抗原，然后采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP法)檢測(cè)不同宮頸組織中PD-1/PD-L1表達(dá)。注：每張切片均選取癌細(xì)胞最多的5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野選取100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，無色為0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細(xì)胞比例分級(jí)為：<30%記為1分，≥30%記為2分；結(jié)果：兩項(xiàng)得分乘積0～1分為陰性，2～6分則為陽性。

外周血：所有受試空腹抽取靜脈血5 ml，6 h內(nèi)進(jìn)行免疫熒光染色，使用免疫熒光標(biāo)記和常規(guī)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD4+T及CD8+T中PD-1/PD-L1的表達(dá)。使用Flowjo軟件檢測(cè)PD-1/PD-L1在免疫細(xì)胞中的表達(dá)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 PD-1/PD-L1在宮頸組織和外周血中表達(dá)

2.1.1 PD-1/PD-L1在宮頸組織中表達(dá) 根據(jù)細(xì)胞染色結(jié)果得出PD-1主要表達(dá)于癌細(xì)胞浸潤(rùn)的周圍淋巴細(xì)胞，而PD-L1主要在癌細(xì)胞及癌細(xì)胞間質(zhì)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中表達(dá)。結(jié)果顯示PD-1在宮頸癌組及CIN組中的表達(dá)均高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=37.921,P=0.002;χ2=5.382,P=0.021)，宮頸癌組PD-1表達(dá)遠(yuǎn)高于CIN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.639,P=0.005)；PD-L1在宮頸癌組及CIN組中的表達(dá)均高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=41.462,P=0.000;χ2=29.834,P=0.003)，宮頸癌組PD-L1表達(dá)高于CIN組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.271,P=0.579)，詳見表1。

表1 PD-1/PD-L1在不同宮頸組織中表達(dá)(例，%)

2.1.2 PD-1/PD-L1在外周血中表達(dá) 根據(jù)Flowjo軟件分析結(jié)果顯示PD-1在CD4+T及CD8+T細(xì)胞中的表達(dá)宮頸癌組(9.30±2.17)%及CIN組(7.27±2.06)%，遠(yuǎn)高于健康組(4.31±1.03)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.981，P<0.05)，且宮頸癌組遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CIN組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 癌組織中PD-1/PD-L1與宮頸癌臨床病理之間的關(guān)系

宮頸癌組織中PD-1/PD-L1表達(dá)與患者年齡、病灶直徑、HPV是否感染、宮頸癌國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期無明顯關(guān)系(P<0.05)，與癌細(xì)胞的分化程度和FIGO分期有關(guān)(P<0.05)，詳見表2。

2.3 PD-1/PD-L1表達(dá)相關(guān)性

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示在癌間質(zhì)及癌細(xì)胞中，PD-1/PD-L1表達(dá)均無相關(guān)性，詳見表3。

表2 宮頸癌組織中PD-1/PD-L1陽性表達(dá)與臨床資料的關(guān)系(例，%)

表3 宮頸癌組織中PD-1/PD-L1表達(dá)相關(guān)性/例

3 討論

PD-1/PD-L1是目前腫瘤免疫治療重點(diǎn)研究的靶點(diǎn)。有關(guān)研究表明多種惡性腫瘤如肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、食管癌、胃癌等中PD-L1均呈現(xiàn)高表達(dá)，PD-1主要表達(dá)在經(jīng)過活化的T、B淋巴細(xì)胞上[5-8]。惡性腫瘤過度表達(dá)的PD-L1與經(jīng)過活化淋巴細(xì)胞上表達(dá)的PD-1結(jié)合從而逃脫了免疫細(xì)胞的監(jiān)控與殺傷，有學(xué)者認(rèn)為PD-1/PD-L1信號(hào)通路主要抑制T細(xì)胞的功能促進(jìn)癌細(xì)胞的免疫逃脫[9-12]。因此本研究主要通過免疫檢測(cè)方法檢測(cè)不同宮頸組織及外周血T細(xì)胞等中PD-1/PD-L1的表達(dá)，深入探討其與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

該研究結(jié)果顯示在正常宮頸患者、CIN患者、宮頸癌患者中外周血CD4+T及CD8+T中PD-1的表達(dá)水平逐漸升高?；罨疶淋巴細(xì)胞(如CD4+T及CD8+T)上的PD-1受體與癌細(xì)胞中的PD-L1相互結(jié)合后，PD-1某部分結(jié)構(gòu)發(fā)生磷酸化，吸引更多的SHP-2磷酸酶結(jié)合，去磷酸化下游Syk和磷脂酰肌醇3激酶，最終使機(jī)體免疫功能傳遞出抑制信號(hào)。PD-1/PD-L1的結(jié)合可以導(dǎo)致淋巴細(xì)胞增殖活化受到阻礙，阻礙CD4+T細(xì)胞的分化，抑制炎性因子釋放等[13-15]。而該研究結(jié)果顯示宮頸癌和CIN患者癌組織中PD-1/PD-L1表達(dá)水平均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于健康宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；宮頸癌和CIN患者宮頸組織中PD-1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而PD-L1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，正常宮頸、CIN宮頸、宮頸癌組織中PD-1/PD-L1逐漸呈現(xiàn)高表達(dá)水平，表明PD-1/PD-L1的結(jié)合抑制淋巴細(xì)胞的免疫作用，從而逃脫了機(jī)體免疫監(jiān)控及殺傷作用，進(jìn)而在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色。該研究結(jié)果顯示宮頸癌患者中PD-1/PD-L1表達(dá)僅與癌細(xì)胞的分化程度和FIGO分期有關(guān)，低分化癌細(xì)胞和Ⅲ～ⅣFIGO分期的宮頸癌組織中PD-1/PD-L1表達(dá)水平遠(yuǎn)高于中-高分化癌細(xì)胞和Ⅰ～ⅡFIGO分期，也說明隨著宮頸癌從早期到晚期發(fā)展過程中，癌細(xì)胞增多，癌細(xì)胞中PD-L1表達(dá)升高，PD-L1與活化T淋巴細(xì)胞中的PD-1結(jié)合，導(dǎo)致T細(xì)胞功能受到抑制，進(jìn)而發(fā)生免疫功能減弱甚至喪失，癌細(xì)胞從而得以逃脫。有研究表明在胃癌癌組織中PD-1/PD-L1表達(dá)無相關(guān)性，但其他學(xué)者的研究則顯示二者呈負(fù)相關(guān)，在有關(guān)肺癌研究中兩者表達(dá)在癌間質(zhì)中呈正相關(guān)[16-18]。該研究顯示在宮頸癌癌間質(zhì)及癌細(xì)胞中，PD-1/PD-L1表達(dá)均無相關(guān)性。也許PD-L1有其他的配體存在，但這需要進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，PD-1/PD-L1抑制通路促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，兩者結(jié)合抑制機(jī)體免疫功能正常應(yīng)答，使癌細(xì)胞得以逃脫機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)控和殺滅，這說明PD-1/PD-L1或許可以作為治療宮頸癌的有效靶點(diǎn)。