結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3的表達(dá)及其臨床價值

吳春平 劉艷彩 劉學(xué)剛 趙嶺嶺 李景光

結(jié)腸癌是1種常見的消化道惡性腫瘤疾病，易發(fā)生局部和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，從而影響患者預(yù)后[1]。CD151是4次跨膜蛋白超家族中的重要成員，同時也是4次跨膜蛋白超家族中的唯一癌基因，CD151高表達(dá)可與多種整合素相互結(jié)合，然與整合素α3關(guān)系最為密切，兩者結(jié)合則可形成復(fù)合物，其與細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移轉(zhuǎn)移等存在緊密聯(lián)系[2]。本研究旨在探討CD151、整合素α3應(yīng)用于結(jié)腸癌中的價值，為改善結(jié)腸癌患者預(yù)后提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年7月至2017年8月收治的60例結(jié)腸炎患者和經(jīng)手術(shù)組織病理檢查診斷為結(jié)腸癌的120例患者作為本次研究對象。結(jié)腸炎患者中，男性38例、女性 22例；年齡33～76歲，平均為(49.5±3.7)歲。結(jié)腸癌患者中，男性78例、女性42例；年齡35～78歲，平均為(49.7±3.5)歲；潰瘍型40例、腫塊型50例、浸潤型30例；高分化腺癌30例、中分化腺癌60例、低分化腺癌26例、黏液腺癌4例；腫塊直徑1.6～5.9 cm，平均為(3.6±0.7) cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者90例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者48例、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者72例。

1.2 方法

應(yīng)用免疫組化SP法檢測受檢對象組織中CD151和整合素α3表達(dá)情況。試劑：鼠抗人CD151單克隆抗體、整合素α3單克隆抗體，由美國Santa Cruz公司提供；免疫組化SP法所使用的相關(guān)試劑則由福州邁新生物技術(shù)公司提供，嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行操作，其中陽性組織切片作為陽性對照，而陰性對照采用PBS代替鼠抗人CD151單克隆抗體、整合素 α3單克隆抗體。嚴(yán)格按照說明執(zhí)行各項操作步驟，每張切片均分別加入50 μl過氧化酶阻斷劑，然后放置于室溫下孵育，時間為10 min，再使用PBS液(福州邁新生物技術(shù)公司提供)沖洗3 次，每次沖洗3 min。然后于每張切片上加入50 μl非免疫性動物血清，放置于室溫下孵育，時間為5 min，此步驟不需進(jìn)行沖洗，然后將多余液體甩除。向各切片上分別加入50 μl一抗，并將其放置于40 ℃冰箱中進(jìn)行孵育、過夜，于第2天采用PBS液沖洗，每次沖洗3 min，共沖洗3次。分別向各切片加入生物素標(biāo)記的二抗50 μl，然后于室溫下孵育，時間為10 min，再采用PBS液沖洗，每次沖洗3 min，共沖洗3次。再將50 μl鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶溶液加入到各切片中，放置于室溫下孵育，時間為10 min，采用PBS液沖洗，每次沖洗3 min，共沖洗3次。向各切片中分別加入100 μl新鮮配制的DAB溶液，然后于顯微鏡下觀察其顯色情況來決定是否需停止顯色，采用自來水進(jìn)行沖洗，并采用蘇木精復(fù)染，應(yīng)用乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 觀察指標(biāo)

因CD151、整合素α3蛋白陽性定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，且呈棕褐色顆粒，所以采用半定量積分法進(jìn)行判斷。顯色度：按照細(xì)胞著色深淺進(jìn)行計分，其中0分：基本無色；1分：淺黃色；2分：淺棕色；3分：深棕色；根據(jù)陽性細(xì)胞比例計分：其中0分：無陽性細(xì)胞；1分：<10%；2分：10%～50%；3分：50%～75%；4分：>75%。顯色強度與陽性細(xì)胞比例相乘，如得分≥3分則判斷為陽性；反之則為陰性[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件處理，計數(shù)資料采用率表示，采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)性分析，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸炎與結(jié)腸癌組織中CD151與整合素α3表達(dá)情況比較

結(jié)腸炎患者組織中無CD151和整合素α3表達(dá)，而結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3陽性表達(dá)率分別為88.33%(106/120)、85.83%(103/120)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=128.919、120.389，P=0.00、0.00)。

2.2 結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3表達(dá)狀況與臨床病理特征的關(guān)系

不同年齡、性別、組織學(xué)分型、腫瘤大小及分化程度結(jié)腸癌組織CD151和整合素α3表達(dá)陽性率比較，P>0.05；而存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織CD151陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，P<0.05；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織CD151陽性表達(dá)率明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，P<0.05。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織整合素α3陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，P<0.05；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織整合素α3陽性表達(dá)率明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，P<0.05。見表1。

2.3 CD151與整合素α3的相關(guān)性分析

結(jié)腸炎患者中，CD151和整合素α3均為陰性表達(dá)。結(jié)腸癌組織中，CD151和整合素α3陽性表達(dá)率分別為88.33%、85.83%；經(jīng)Spearman等級相關(guān)性分析，CD151和整合素α3陽性表達(dá)在結(jié)腸癌患者中呈正相關(guān)性(γ=0.5123，P=0.000)。

3 討論

結(jié)腸癌具有較高的發(fā)病率和死亡率，盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)得到快速發(fā)展，結(jié)腸癌篩查和診治也得到明顯進(jìn)步，但結(jié)腸癌患者預(yù)后仍不理想。結(jié)腸癌是1種常見的惡性腫瘤疾病，影響患者預(yù)后的因素主要是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，而腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移則是1個多因素參與的復(fù)雜過程。所以深入研究結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展成為當(dāng)前臨床醫(yī)師和各學(xué)者研究重點。

表1 結(jié)腸癌患者不同情況下CD151和整合素α3表達(dá)狀況比較(例，%)

CD151基因是人們最近發(fā)現(xiàn)的一種癌基因，其可與整合素特異性結(jié)合，并形成復(fù)合體參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和粘附及遷移等過程[4]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[5-6]，CD151在多種惡性腫瘤中存在高度表達(dá)情況，如膀胱癌、結(jié)腸癌、肝癌及前列腺癌等，且發(fā)現(xiàn)CD151高度表達(dá)與各惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在緊密聯(lián)系。本文研究通過對結(jié)腸癌患者中CD151、整合素α3進(jìn)行檢測，旨在探討其表達(dá)狀況，為臨床判斷結(jié)腸癌患者病情提供參考，同時為醫(yī)師制定治療方案提供依據(jù)。本次研究中整合素α3可通過與其配體蛋白的作用來調(diào)控細(xì)胞內(nèi)外信號傳導(dǎo)，對細(xì)胞遷移、轉(zhuǎn)移有一定影響。然細(xì)胞遷移信號從細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)傳遞的關(guān)鍵步驟則是整合素與CD151復(fù)合體的形成，所以通過檢測CD151、整合素α3表達(dá)情況對掌握結(jié)腸癌患者病情及預(yù)后具有重要意義。本文研究結(jié)果顯示，CD151、整合素α3在結(jié)腸癌組織中呈高度表達(dá)，且CD151與整合素α3呈正相關(guān)性，由此說明CD151、整合素α3相互結(jié)合可能在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。有報道稱[7]，CD151與整合素的復(fù)合體形成后，其在纖維粘連蛋白上的連接大約減少90%。本文研究結(jié)果顯示，CD151與整合素α3在結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用，同時為臨床醫(yī)師判斷患者病情狀況提供重要依據(jù)，為臨床治療提供指導(dǎo)價值。

綜上所述，結(jié)腸癌患者CD151與整合素α3可作為臨床醫(yī)師評估結(jié)腸癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。此外，隨著臨床不斷深入研究，相信今后結(jié)腸癌靶向治療會出現(xiàn)新的分子靶點，更好地改善患者預(yù)后。