CD147與MMP-2在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

賴敏棟 樂 飛

甲狀腺是人體癌變率最高的內(nèi)分泌器官，甲狀腺癌約占全身惡性腫瘤的1%，近年來研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病率迅速增高[1]。傳統(tǒng)臨床研究甲狀腺癌主要依賴組織病理學(xué)，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，分子病理學(xué)在甲狀腺癌的診斷、治療方案確定、評估預(yù)后等各個(gè)方面發(fā)揮了積極的作用[2-3]。本研究旨在探討甲狀腺癌組織表達(dá)白細(xì)胞分化抗原147(CD147)與基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3月至2018年5月期間在江西省腫瘤醫(yī)院頭頸外科接受治療的85例甲狀腺癌患者，所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診，且既往均無甲狀腺手術(shù)治療史。85例患者中男性29例，女性56例；年齡22～79歲，平均(49.1±10.3)歲；腫瘤直徑0.5～3.9 cm，平均(2.8±1.6)cm，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例、無轉(zhuǎn)移52例。

1.2 研究方法

1.2.1 甲狀腺癌組織CD147、MMP-2表達(dá)的免疫組織檢測 ①脫蠟：組織切片60 ℃烘烤2 h，二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)各10 min，100%酒精(Ⅰ)、100%酒精(Ⅱ)、95%酒精、85%酒精、70%酒精各5 min。PBS沖洗3 min×3次。②熱修復(fù)：將組織切片置入檸檬酸鈉緩沖液，高壓鍋加熱至沸騰，1 min后關(guān)閉電源，自然冷卻1 h。PBS沖洗3 min×3次。③H2O2封閉：在組織切片上滴加3% H2O2溶液，置入濕盒，室溫下孵育10 min。PBS沖洗3 min×3次。采用吸水紙將組織邊緣殘留液體吸凈。④滴加抗體：滴加50 μl一抗 ，4 ℃孵育過夜。PBS沖洗5 min×3次。再次采用吸水紙將組織邊緣殘留液體吸凈，滴加50 μl二抗，37 ℃濕盒孵育20 min。PBS沖洗5 min×3次。⑤顯色：滴加100 μl的DAB液，顯微鏡下可見黃色顆粒顯色即可停止，流動(dòng)水沖洗20 min。⑥復(fù)染：蘇木精復(fù)染約4 min，流動(dòng)水沖洗5 min。⑦脫水：70%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精(Ⅰ)、100%酒精(Ⅱ)各1 min。⑧透明及封片：二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)各5 min，中性樹脂封片。

1.2.2 結(jié)果判定 篩選10個(gè)高倍鏡視野共計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色提示CD147、MMP-2表達(dá)陽性。細(xì)胞陽性比率≤1%、>1%～10%、>11%～50%、>50%分別計(jì)0、1、2、3分。細(xì)胞染色強(qiáng)度無、弱、中、強(qiáng)分別計(jì)0、1、2、3分。兩項(xiàng)得分乘積>6分為高表達(dá)(3+)，4～6分為中表達(dá)(2+)，1～3分為低表達(dá)(1+)，0分為陰性[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間性別、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較采用χ2檢驗(yàn)，組間年齡、腫瘤直徑比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，甲狀腺癌組織CD147、MMP-2的表達(dá)相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甲狀腺癌組織CD147、MMP-2表達(dá)情況分析

85例甲狀腺癌患者組織標(biāo)本中，CD147表達(dá)陽性63例、CD147表達(dá)陰性22例；MMP-2表達(dá)陽性54例、MMP-2表達(dá)陰性31例。

2.2 甲狀腺癌組織表達(dá)CD147與患者臨床特征的關(guān)系

甲狀腺癌組織表達(dá)CD147與患者性別、年齡、病理類型無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表1。由結(jié)果可知，CD147表達(dá)陽性患者腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于CD147表達(dá)陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 甲狀腺癌組織表達(dá)CD147與患者臨床特征的關(guān)系

2.3 甲狀腺癌組織表達(dá)MMP-2與患者臨床特征的關(guān)系

甲狀腺癌組織表達(dá)MMP-2與患者性別、年齡無顯著相關(guān)性(P>0.05)，與患者病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見表2。由結(jié)果可知，乳頭狀癌、濾泡癌、髓樣癌、未分化癌患者甲狀腺癌組織MMP-2表達(dá)陽性率分別為76.19%、60.00%、35.29%、66.67%，髓樣癌患者甲狀腺癌組織MMP-2表達(dá)陽性率顯著低于乳頭狀癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外，MMP-2表達(dá)陽性患者腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于MMP-2表達(dá)陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 甲狀腺癌組織表達(dá)MMP-2與患者臨床特征的關(guān)系

2.4 甲狀腺癌組織表達(dá)CD147與MMP-2的相關(guān)性分析

甲狀腺癌組織中CD147、MMP-2表達(dá)呈顯著正相關(guān)(γs=0.487，P<0.05)。

3 討論

甲狀腺癌是人體頭頸部以及內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。流行病學(xué)研究調(diào)查顯示，2012年全國腫瘤登記地區(qū)甲狀腺癌發(fā)病率為6.6/10萬，世界人口調(diào)整發(fā)病率為4.8/10萬，略高于全球平均發(fā)病率4.0/10萬[5]。值得注意的是，甲狀腺癌發(fā)病率仍然呈持續(xù)增長趨勢，因此目前臨床迫切需要探索一個(gè)研究甲狀腺癌的新方向，以期為甲狀腺癌患者的臨床診斷、治療及預(yù)后提供新方案。

CD147是由Biswas在人腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的上清液中發(fā)現(xiàn)的一種跨膜糖蛋白，進(jìn)一步研究顯示CD147低表達(dá)于人體多種正常組織，且其表達(dá)程度隨著組織細(xì)胞不同而發(fā)生變化[6]。隨著研究的深入，CD147被發(fā)現(xiàn)高度表達(dá)于多種惡性腫瘤細(xì)胞，并且在腫瘤細(xì)胞能量代謝、腫瘤新生血管生成、腫瘤細(xì)胞浸潤及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[7-8]。既往臨床有關(guān)甲狀腺癌組織表達(dá)CD147的文獻(xiàn)報(bào)道主要是將其用于甲狀腺癌的診斷與鑒別診斷[9]，以及其影響甲狀腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的機(jī)制[10]，而甲狀腺癌組織表達(dá)CD147與患者臨床特征相關(guān)性的文獻(xiàn)報(bào)道則較少。本研究即對此進(jìn)行探索，結(jié)果顯示甲狀腺癌組織表達(dá)CD147與患者性別、年齡、病理類型無顯著相關(guān)性，而與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑有顯著相關(guān)性。

基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)是一類鋅離子依賴的內(nèi)源性蛋白水解酶，目前已發(fā)現(xiàn)有28種。MMP-2屬于Ⅳ型膠原酶，其主要功能就是降解Ⅳ型膠原與Ⅴ型膠原，但是也還可以降解Ⅰ～Ⅲ型膠原以及彈性蛋白，這些功能使得MMP-2在腫瘤侵襲過程中發(fā)揮了積極重要的作用[11]。既往臨床甲狀腺癌組織表達(dá)MMP-2的文獻(xiàn)報(bào)道較多，本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織表達(dá)MMP-2與患者性別、年齡無顯著相關(guān)性，與患者病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑有顯著相關(guān)性。盡管該結(jié)論與張靜等[12]報(bào)道相一致，但卻與楊光等[13]報(bào)道存在一定的區(qū)別。由此可見，甲狀腺癌組織表達(dá)MMP-2的臨床意義有待臨床進(jìn)一步大樣本量研究。

對本研究數(shù)據(jù)進(jìn)一步分析，結(jié)果顯示甲狀腺癌組織中CD147、MMP-2表達(dá)呈顯著正相關(guān)。分析其原因，可能是CD147、MMP-2可能在甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲過程中發(fā)揮了協(xié)同作用所致。綜上所述，下調(diào)CD147、MMP-2表達(dá)可能成為甲狀腺癌治療新的靶點(diǎn)，通過該方案進(jìn)行治療甲狀腺患者有望獲得更好的預(yù)后。