三陰性乳腺癌BRCA1的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性

張 寧 鄭桂蘭 冀 東 宋翠萍 竇雅琳 劉媛媛 蘇 楠 趙 月 李建梅

乳腺癌是臨床上最常見的女性惡性腫瘤之一，近年來我國乳腺癌的發(fā)病率與死亡率也有逐年增加的趨勢[1]。三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC) 是乳腺癌的一種特殊亞型，具有發(fā)病年齡輕、預(yù)后差的特點，占乳腺癌總數(shù)的15%～20%[2]。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibilitygene 1，BRCA1)作為抑癌基因之一，其抑癌作用的發(fā)揮主要通過參與細(xì)胞內(nèi)DNA修復(fù)、mRNA 轉(zhuǎn)錄以及調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、蛋白質(zhì)的合成等機(jī)制。研究表明，多種腫瘤的發(fā)生與BRCA1基因突變有關(guān)[3]。目前關(guān)于BRCA1與TNBC臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)研究較少，因而本研究對其進(jìn)行了探討，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集 2010年1月至2013年12月我院收治的190例TNBC患者為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡>35歲；②女性；③經(jīng)免疫組化檢查證實，且經(jīng)2名病理科專家證實為TNBC；④手術(shù)治療，且術(shù)前未接受放、化療及增強(qiáng)免疫力等方案治療者；⑤臨床及病理資料完整。入選的TNBC患者年齡26～72歲，平均(48.2±15.6)歲。選擇同期我院診治的非三陰性乳腺癌190例納入對照組，年齡25～77歲，平均(49.7±12.3)歲。

1.2 研究方法

本研究所使用BRCA1兔抗人單克隆抗體、p53鼠抗人抗體濃縮型以及SP免疫組化檢測試劑盒均由北京中杉金橋公司提供，檢測操作步驟均按照試劑盒說明書要求進(jìn)行，陰性對照為PBS代替一抗，陽性對照為已知陽性表達(dá)組織。BRCA1采用1∶50稀釋，p53采用1∶100稀釋，顯色采用DAB。結(jié)果判讀：光學(xué)顯微鏡下對每張切片選取5個高倍視野進(jìn)行觀察，其中每個視野計數(shù)100 個細(xì)胞，觀察其免疫組化染色的情況。p53蛋白在細(xì)胞核表達(dá)，以觀察到棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，其中陽性細(xì)胞占全部細(xì)胞比例≥10%判定為陽性，否則為陰性。BRCA1則定位于細(xì)胞核和胞質(zhì)，觀察到棕黃色顆粒則為陽性細(xì)胞。結(jié)果判讀以染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比例為準(zhǔn)。陽性細(xì)胞≤5%、>5%～25%、>25%～50%、>50%～75%、>75%則分別判定為0分、1分、2分、3分、4分；染色強(qiáng)度無著色、淡棕黃色、棕黃色、深棕紅色分別為0分、1分、2分、3分。兩項得分相乘以>2分者判斷為陽性，否則為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較2組患者BRCA1、p53陽性表達(dá)率。記錄TNBC組患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、病理類型、組織學(xué)分級、TNM分期等資料。同時對患者進(jìn)行隨訪，觀察患者的總生存期及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況，總生存時間指患者從手術(shù)日至末次隨訪或死亡時間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，采用Log-Rank檢驗進(jìn)行組間曲線比較。

2 結(jié)果

2.1 2組患者p53、BRCA1陽性表達(dá)率的比較

TNBC組p53陽性表達(dá)率明顯高于對照組，BRCA1陽性表達(dá)率則低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 三陰性乳腺癌BRCA1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

本研究顯示年齡<35歲、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM T1+T2及p53陽性者其BRCA1陽性率較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；本研究未發(fā)現(xiàn)BRCA1陽性率與絕經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、病理類型及組織學(xué)分級有關(guān)(P>0.05)。見表2。

表1 TNBC組與對照組患者p53、BRCA1陽性表達(dá)率的比較(例，%)

表2 三陰性乳腺癌BRCA1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 三陰性乳腺癌BRCA1的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

BRCA1陽性者5年生存率75.00%，高于陰性者的61.90%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

3 討論

乳腺癌在世界范圍內(nèi)都是嚴(yán)重威脅女性健康最常見的惡性腫瘤之一，僅 2012 年新發(fā)乳腺癌病例就高達(dá)1700 萬，其中死亡例數(shù)達(dá)到52萬[4]。乳腺癌是一組具有高度異質(zhì)性的腫瘤，包含多種獨(dú)特病理學(xué)特征和生物學(xué)行為，即使患者具有相同的臨床分期、組織學(xué)類型及治療模式，其預(yù)后也存在著較大的差異[5]。三陰性乳腺癌更加特殊，具有較強(qiáng)的侵襲性生物學(xué)行為，與非三陰性乳腺癌比較，其早期復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險較大，無病生存率和總生存率低于后者，患者的預(yù)后也更差[6]。由于TNBC不表達(dá)雌、孕激素受體以及人表皮生長因子受體-2，與相同分期的其他類型的乳腺癌比較，缺乏了相應(yīng)的治療靶點，對內(nèi)分泌及曲妥珠單抗等治療均不敏感。

圖1 三陰性乳腺癌BRCA1的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

TNBC多見于50歲以下的年輕女性，尤其是以伴有BRCA基因突變者多見。BRCA1 基因是最被熟知的乳腺癌腫瘤抑制基因，定位于17q21，在正常乳腺上皮細(xì)胞核中存在[7]。BRCA1主要作用包括調(diào)控細(xì)胞周期及基因轉(zhuǎn)錄、抑制細(xì)胞生長、修復(fù)DNA損傷以維護(hù)基因穩(wěn)定性細(xì)胞活動，并且在細(xì)胞凋亡及細(xì)胞中心體復(fù)制過程中也起著重要作用。所以如果機(jī)體BRCA1基因發(fā)生突變或者其表達(dá)量減少，則其抑制細(xì)胞分裂的作用會明顯減弱，進(jìn)而引起細(xì)胞增殖失去控制，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[8]。BRCA1被認(rèn)為是基因組的保護(hù)者，其重要作用之一即參與基因修復(fù)，但是如果損傷比較嚴(yán)重而無法修復(fù)時，此時便發(fā)揮誘發(fā)細(xì)胞凋亡的作用。Marcus等[9]的研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞與正常上皮細(xì)胞相比，其 BRCA1 的表達(dá)水平顯著下降。三陰乳腺癌與 BRCA1 相關(guān)乳腺癌有許多相似之處，尤其表現(xiàn)在分子和表型特征，且免疫組化結(jié)果提示 BRCA1 相關(guān)乳腺癌絕大部分均為TNBC，說明BRCA1對TNBC具有重要的研究價值[10]。本研究發(fā)現(xiàn) BRCA1 蛋白表達(dá)在TNBC患者中的陽性率顯著低于對照組，其表達(dá)與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及P53有關(guān)。年輕乳腺癌患者生長代謝旺盛，其乳腺腺體體積較大、豐富致密，腫瘤生長速度較快。劉錦平等[11]的研究結(jié)果也提示BRCA1 蛋白的表達(dá)與年齡呈負(fù)相關(guān)，即年齡越輕則BRCA1蛋白的表達(dá)水平也就越高。P53是一種研究最為深入的抑癌基因之一，其基因編碼產(chǎn)物參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，起到調(diào)控細(xì)胞周期、修復(fù)DNA損傷和誘導(dǎo)凋亡的作用。研究顯示BRCA1可以與P53相互作用，增強(qiáng)后者的依賴性轉(zhuǎn)錄。本研究結(jié)果顯示p53陽性表達(dá)組的BRCA1陽性率更高，與朱亞寧等[12]的研究結(jié)果一致。此外，本研究發(fā)現(xiàn)BRCA1指標(biāo)陽性者較陰性者有較高的生存率。

綜上所述，BRCA-1的表達(dá)與三陰性乳腺癌患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM臨床分期及P53有關(guān)，并且可以影響患者的預(yù)后。