熊去氧膽酸聯(lián)合地塞米松對大鼠妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的治療作用

南 燕，王 慧，周婷婷，李玉潔

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 新鄉(xiāng) 453003)

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是妊娠中晚期常見的、嚴(yán)重的妊娠并發(fā)癥，其發(fā)病率為2.3%～6.0%[1-2]。ICP以孕期出現(xiàn)皮膚瘙癢、皮膚抓痕、肝酶異常、總膽汁酸(total bile acid，TBA)濃度升高為主要特征，產(chǎn)婦預(yù)后一般良好[3]。雖然多數(shù)學(xué)者認(rèn)為ICP的發(fā)生與遺傳易感性、孕婦體內(nèi)激素、免疫情況及硒缺乏等相關(guān)[4]，但其具體致病機(jī)制尚未明確。該病可誘使膽汁酸基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)生異常，繼發(fā)圍產(chǎn)兒不良預(yù)后結(jié)局。因此，需要找到一種較好的治療方法來改善妊娠預(yù)后，降低圍生兒病死率。本實(shí)驗(yàn)以ICP模型大鼠為研究對象，觀察熊去氧膽酸和地塞米松聯(lián)合治療ICP的效果。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物清潔級Sprague Dawley大鼠80只，雌雄比例11，體質(zhì)量250～280 g，由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。雌雄大鼠同籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度18～28 ℃，相對濕度40%～70%，每日觀察雌鼠陰栓脫落情況，陰栓脫落日定為妊娠第1天，飼養(yǎng)至妊娠第10天待用。本實(shí)驗(yàn)接受新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)倫理委員會監(jiān)督。

1.2ICP模型制備及分組自妊娠第10天開始，大鼠經(jīng)腹腔注射黃體酮注射液(225 mg·kg-1·d-1)，連續(xù)給藥5 d，制備ICP大鼠模型。大鼠血清TBA(>10 μmol·L-1)及谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine transarninase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)水平升高(>40 U·L-1)視為 ICP 大鼠模型制備成功[5]。隨機(jī)選取造模成功的30只孕鼠分為聯(lián)合治療組和對照組，每組15只。在妊娠第15～19天，2組孕鼠均每日給予熊去氧膽酸溶液灌胃(100 mg·kg-1)，共 5 d；在此基礎(chǔ)上，聯(lián)合治療組孕鼠每日肌肉注射地塞米松(1 mg·kg-1)，共5 d[6]。

1.3觀察指標(biāo)分別于治療前(妊娠第15天)及治療后(妊娠第20天)采集孕鼠心臟靜脈血2 mL，1 500 r·min-1離心10 min，取上層血清；采用生物化學(xué)法檢測血清ALT、AST、TBA及總膽紅素(total bilirubin，TBIL)水平。待孕鼠臨產(chǎn)后，腹腔注射 60 g·L-1水合氯醛溶液(250 mg·kg-1)麻醉，立即剖腹取胎，記錄胎鼠數(shù)、死胎數(shù)及胎鼠體質(zhì)量，快速留取孕鼠肝組織，大小約1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm。將肝組織置于100 g·L-1多聚甲醛溶液中固定 48 h，常規(guī)制作石蠟切片；蘇木精-伊紅 (hematoxylin-eosin，HE)染色，光學(xué)顯微鏡(×400)下觀察肝組織病理學(xué)改變。

2 結(jié)果

2.12組孕鼠治療前后血清生物化學(xué)指標(biāo)比較結(jié)果見表1。治療前2組孕鼠血清ALT、AST、TBA及TBIL水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組孕鼠治療后血清ALT、AST、TBA及TBIL水平均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療后，聯(lián)合治療組孕鼠血清ALT、AST、TBA及TBIL水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表12組孕鼠治療前后血清生物化學(xué)指標(biāo)比較

組別nALT/(U·L-1)AST/(U·L-1)TBA/(μmol·L-1)TBIL/(μmol·L-1)對照組15 治療前62.40±10.1076.90±18.8127.34±3.8117.79±1.61 治療后48.50±3.36a58.20±7.89a15.31±1.94a6.30±0.61a聯(lián)合治療組15 治療前60.80±10.0775.60±17.1225.25±4.0416.90±0.56 治療后38.80±4.98ab50.40±7.30ab10.48±1.72ab4.30±0.60ab

注：與治療前比較aP<0.05；與對照組比較bP<0.05。

2.22組死胎率及胎鼠體質(zhì)量比較結(jié)果見表2。聯(lián)合治療組胎鼠體質(zhì)量高于對照組(t=12.83,P<0.05)，死胎率低于對照組(χ2=7.81，P<0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表22組胎鼠體質(zhì)量和死胎率比較

Tab.2Comparisonofbodymassandstillbirthrateoffetalratsbetweenthetwogroups

組別n總胎數(shù) 死胎/只(%) 胎鼠體質(zhì)量/g對照組1512418(14.5)4.01±0.33聯(lián)合治療組1512913(10.1)a4.89±0.53a

注：與對照組比較aP<0.05。

2.32組孕鼠肝組織病理學(xué)改變?nèi)庋塾^：對照組孕鼠肝組織明顯水腫，暗紅色，邊緣圓鈍(圖1A)；聯(lián)合治療組孕鼠肝組織輕度水腫，顏色與正常肝組織相近，邊緣規(guī)則(圖1B)。光學(xué)顯微鏡下觀察，對照組孕鼠肝細(xì)胞水腫明顯，細(xì)胞質(zhì)疏松，大量細(xì)胞脂肪變性，點(diǎn)狀壞死較多，肝血竇變窄，膽管擴(kuò)張且有膽汁淤積(圖2A)；聯(lián)合治療組孕鼠肝細(xì)胞輕度水腫，少許肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性，可見毛細(xì)血管擴(kuò)張及部分炎性細(xì)胞浸潤(圖2B)。

A：對照組；B：聯(lián)合治療組。

圖12組孕鼠肝臟大體觀

Fig.1Grossmorphologyoftheliverofgestationratsinthetwogroups

A：對照組；B：聯(lián)合治療組。

圖22組孕鼠肝組織病理學(xué)變化(HE染色，×400)

Fig.2Pathologychangesofthelivertissuesofpregnantratsinthetwogroups(HEstaining，×400)

3 討論

ICP是孕婦妊娠中晚期常見的并發(fā)癥，以孕婦皮膚瘙癢、膽汁淤積、黃疸為主要表現(xiàn)，瘙癢常見于手掌和腳掌，且夜間加重，產(chǎn)后癥狀迅速消失，對母體并無嚴(yán)重影響，但可引起胎兒窘迫、死胎、早產(chǎn)、死產(chǎn)等，增加圍生兒病死率。ICP的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，可能是肝臟對妊娠期生理性增加的雌激素代謝反應(yīng)過強(qiáng)，影響膽汁酸在肝內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)過程[7]。高濃度的 TBA沉積在胎盤內(nèi)，誘導(dǎo)人胎盤絨毛膜血管收縮和臍靜脈收縮，胎盤的血流灌注減少，導(dǎo)致胎兒急性缺氧甚至突發(fā)死胎。熊去氧膽酸是臨床上治療ICP的一線藥物，其在肝內(nèi)主要與甘氨酸結(jié)合，隨腸肝循環(huán)分泌入膽汁。正常情況下，服用熊去氧膽酸將增加膽汁的分泌量和膽汁中膽汁酸含量，減少膽汁酸在體內(nèi)積聚，保護(hù)肝細(xì)胞[8]。有研究表明，熊去氧膽酸在緩解皮膚瘙癢、降低血清中膽紅素和膽酸等水平、延長孕周、改善母胎預(yù)后等方面有顯著效果，但停藥后病情易反復(fù)。

地塞米松能減輕ICP癥狀，恢復(fù)肝功能，改善胎兒預(yù)后，近年來也開始應(yīng)用于臨床治療。由于ICP的發(fā)病時(shí)間早，持續(xù)時(shí)間長，并且高濃度的膽汁酸引起的細(xì)胞毒性作用后果嚴(yán)重，所以，地塞米松用于臨床治療時(shí)劑量大，且療程長。地塞米松能通過胎盤屏障作用于胎兒腎上腺組織，阻遏脫氫表雄酮的分泌，使體內(nèi)雌激素水平降低，從而緩解膽汁的蓄積。有研究表明，給予地塞米松治療后，孕婦臍血流阻力指數(shù)、搏動指數(shù)、臍動脈收縮末期峰值與舒張末期峰值比值及胎盤血流阻力明顯下降[9]。地塞米松還能通過免疫抑制作用解除小血管痙攣性收縮，降低周圍血管阻力，改善母體循環(huán)及胎盤灌注功能，并能促進(jìn)胎肺成熟，防治早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征[10]。另有研究表明，地塞米松能有效調(diào)節(jié)法尼醇受體/膽鹽輸出泵的表達(dá)，對細(xì)胞起到保護(hù)作用[11]。

本研究結(jié)果顯示，使用地塞米松和熊去氧膽酸聯(lián)合治療后，胎鼠死胎率下降，胎鼠體質(zhì)量增加，孕鼠肝臟病變程度減輕，肝酶、膽酸等水平明顯下降。這說明在服用熊去氧膽酸的基礎(chǔ)上輔以地塞米松治療可明顯改善ICP孕鼠預(yù)后，降低血清膽汁酸、肝酶等水平，改善妊娠結(jié)局，治療效果優(yōu)于單用熊去氧膽酸。該研究為臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但受實(shí)驗(yàn)條件限制，本實(shí)驗(yàn)樣本量較小，結(jié)果可能會存在一定的偏差，另外，糖皮質(zhì)激素的不良反應(yīng)尚需臨床上進(jìn)一步嚴(yán)密觀察。