胚胎干細胞對孕鼠缺血受損心肌的修復作用

王宏茂，邱彬，鄧然，王超，雍偉東，石琳*

（1.首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院，心血管內科，北京 100020；2.北京協(xié)和醫(yī)學院&中國醫(yī)學科院醫(yī)學實驗動物研究所，基因與發(fā)育實驗室，北京 100021）

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胚胎干細胞對孕鼠缺血受損心肌的修復作用

王宏茂1，邱彬2，鄧然2，王超2，雍偉東2，石琳1*

（1.首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院，心血管內科，北京 100020；2.北京協(xié)和醫(yī)學院&中國醫(yī)學科院醫(yī)學實驗動物研究所，基因與發(fā)育實驗室，北京 100021）

【摘要】目的 探討胎鼠胚胎干細胞是否可通過血液循環(huán)系統(tǒng)進入懷孕母體，并對孕鼠缺血損傷的心肌組織進行修復。方法 將24只6～8周齡C57雌性小鼠隨機分為假手術組（n=8）、手術+受孕組（n=8）和手術組+未受孕組（n=8），通過結扎冠狀動脈左前降支的方法制作心肌梗死模型，并將手術后受孕組小鼠與e-GFP轉基因雄鼠進行雜交。三組小鼠分別在術前、術后和孕產后進行心電圖和超聲心動檢測，比較其心功能的變化；通過免疫組織化學染色，觀察各組小鼠心肌結構的變化，并檢測孕鼠心肌是否表達熒光蛋白，以確定是否存在胚胎來源的Gfp陽性細胞。同時通過普通半定量PCR擴增技術檢測孕鼠血液DNA中是否存在Gfp基因。結果 手術+受孕組及手術+未受孕組小鼠術后心電圖結果可見其ST段具有顯著抬高，提示出現(xiàn)明顯的心肌缺血表現(xiàn)，而手術+受孕組小鼠產后心電圖結果提示其缺血癥狀較孕前減輕。超聲結果也證實手術后小鼠均出現(xiàn)明顯的心肌梗死表現(xiàn)，手術+受孕組小鼠產后心腔結構雖較孕前未見明顯改變，各項心功能指標較假手術組減低，但與手術+未受孕組相比，心功能指標明顯升高（P＜0.05）。此外，通過免疫組化染色和PCR檢測發(fā)現(xiàn)手術+受孕組心肌梗死區(qū)域具有GFP陽性表達，而其他兩組均為GFP陰性。結論 胎鼠的胚胎干細胞可透過胎盤屏障，隨血液遷移至母孕鼠體內，并對缺血損傷的心肌進行修復。

【關鍵詞】胚胎干細胞；綠色熒光蛋白；心肌缺血；心肌損傷修復；小鼠；孕鼠

研究表明，不僅在妊娠期，甚至在胎兒出生后幾十年內仍可在母體的外周血及器官內檢測到胎兒的相關細胞［1］。這是由于在妊娠期時，母體與胎兒的有核血細胞之間存在雙向運輸，從而形成了胚胎期細胞的微嵌合體（microchimerism，MC）。微嵌合體屬于嵌合體的一種，當供/受體細胞比例＞1%時，稱為嵌合體；而＜1%時，則被稱為微嵌合體，是指有一小部分來自于另一個個體、遺傳上與宿主不同的細胞在宿主的身體內殘留，即在母體身上發(fā)現(xiàn)子代個體的DNA或細胞的現(xiàn)象。這種微嵌合體可能通過修改母體免疫識別或者免疫耐受機制而長期穩(wěn)定存在于母體，而這種轉移至母體的可穩(wěn)定存在的微嵌合體（胚胎干細胞），可能通過發(fā)揮其修復和再生作用，進而影響和參與多種疾病的發(fā)展和轉歸［2］。胚胎干細胞（embryonic stem cells，ESCs）是早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞，具有無限增殖、自我更新和多向分化的特性。ESCs具有發(fā)育的全能性，可分化為外胚層、中胚層和內胚層的各種細胞，具有分化成為機體內任一組織和器官的能力，因而稱之為“萬能”細胞。近年來的研究表明，ESCs在臨床醫(yī)學和再生醫(yī)學領域的有著十分重要的意義，特別是在修復壞死心肌細胞、視網膜退化、腦缺血及神經退行性病變等方面［3-7］。國外研究表明胚胎干細胞能夠通過胎盤屏障，進入母體血液循環(huán)并可發(fā)生定植，但是否可通過此方式修復母體缺血受損的心肌組織，國內外尚未見報道。本研究利用小鼠心肌梗死模型和e-GFP轉基因小鼠，探討胎鼠胚胎干細胞是否可以遷移至母孕鼠的缺血心肌組織，并初步探索胎兒胚胎干細胞是否對母體孕鼠器官的急性損傷具有修復作用。

1　材料與方法

1.1 實驗動物及分組

SPF級C57雌性小鼠24只，體重20～25 g，6～8周齡，購自北京華阜康生物科技有限公司【SCXK（京）2014-0004】，隨機分為3組（每組8只），分別為假手術組、手術+受孕組和手術組+未受孕組。清潔級GFP轉基因雄性小鼠8只，8周齡，為本實驗室保存。以上動物均飼養(yǎng)于中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所清潔級小鼠房內【SYXK（京）2011-0022】。

1.2 材料

戊巴比妥鈉（國藥集團化學試劑有限公司，中國）、阿莫西林舒巴坦（哈藥集團，中國）、呼吸機（Kent Scientific，美國）、MP150型多導電生理記錄儀（16通道）（Biopac，美國）、高分辨小動物超聲系統(tǒng)（Visualsonic Vevo 770，美國）、解剖鏡（YZ20T9，中國）、冷光源（北京玻璃研究院，中國）、GFP抗體（Abcam，美國）、山羊抗兔二抗（中杉金橋，中國）、DAB顯色液（中杉金橋，中國）。

1.3 方法

1.3.1 小鼠心肌梗塞模型制備及分組

根據小鼠短期缺血-再灌注模型制備［8-11］的方法加以改進，具體如下：腹腔注射2%戊巴比妥鈉（0.024 mL/10 g）麻醉動物，脫去頸部及前胸部皮膚后備皮、消毒，將小鼠仰臥位固定于手術臺上。通過氣管插管術連接呼吸機，設定潮氣量3 mL、正壓通氣30 cm H2O、呼吸頻率120次/分。待小鼠呼吸節(jié)律與呼吸機一致時，即氣管插管成功。插管成功后，對小鼠進行開胸手術。先于小鼠在左胸骨外1～2cm縱向剪開皮膚，開口長度1～2 cm，然后順肋間隙方向于胸骨左旁第3肋間逐層鈍性分離肌肉及胸膜，于2～3肋骨間撐開進胸，向右上方推開胸腺，可暴露心臟及大血管根部，切開心包，可在左心耳下緣處看到左冠狀動脈前降支起始部，用6-0 prolene線縫針以起始部至心尖中上1/3處進針，進針深度控制在0.1 cm，寬度控制在0.1～0.2 cm?；丶{心臟入胸廓，待小鼠10次心動周期后，收線打結。觀察數分鐘后，徹底止血并逐層關胸。關胸過程中可稍用力擠壓胸腔，盡量排盡胸腔積氣。5 min后待小鼠狀態(tài)穩(wěn)定，恢復小鼠自主呼吸，拔出小鼠氣管內插管，將小鼠放至日光燈下復溫10 min。以上手術操作均在嚴格無菌條件下進行，術后腹腔給予阿莫西林舒巴坦（3 mg/10 g）以預防感染。假手術組小鼠開胸后，僅在相同部位縫線但不結扎。雌鼠于術后1周進行心電圖及超聲心動檢測，術后2周可與雄鼠合籠。

1.3.2 交配受孕

手術+受孕組雌鼠于手術穩(wěn)定2周后開始與GFP轉基因雄性小鼠以1∶1進行合籠。每天下午5點合籠，次日上午8點檢查是否形成陰道栓，以檢查到陰道栓時記為0.5 d。實驗中合籠2 d時，所有受孕組小鼠（各8只）均見栓，妊娠周期為18～20 d。

1.3.3 心電監(jiān)測

各組小鼠（各8只）于手術后1周及孕鼠產后（手術后32～35 d）各組小鼠分別使用MP150型多導電生理記錄儀（16通道）（Biopac，美國）進行小鼠心電監(jiān)測，了解術后及產后心電圖變化。腹腔注射0.6%戊巴比妥鈉（0.08 mL/10 g）麻醉小鼠，以II導聯(lián)連接小鼠肢體，記錄各組心電圖。

1.3.4 超聲心動檢測

各組小鼠（各8只）于手術后1周及孕鼠產后（手術后32～35 d）進行超聲心動檢測，以比較小鼠手術后和孕后不同時期心臟結構的變化。腹腔注射三溴乙醇（1.25%，0.2 mL/10 g）麻醉小鼠，胸部脫毛后以仰臥位固定于超聲架上，使用高分辨小動物超聲系統(tǒng)（Visualsonic Vevo 770，美國）對小鼠心臟進行超聲檢測，記錄圖像及心功能數據并進行分析。

1.3.5 心臟取材

各組小鼠（各8只）于手術1月后（約為32～35 d）腹腔注射0.6%戊巴比妥鈉（0.08 mL/10 g）麻醉，打開腹腔，從腹腔靜脈內取血0.3 mL。之后打開胸腔，取出心臟，在PBS緩沖液中清洗3次。心臟修剪整齊以OCT包埋后放入-80℃保存。

1.3.6 血清DNA提取及PCR擴增

各組小鼠（各8只）血液以鹽析法提取 DNA后，通過PCR擴增反應及水平凝膠電泳檢測Gfp基因表達。PCR擴增反應條件為：94℃預變性5 min，然后94℃變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸60 s，共35個循環(huán)，最后以72℃延伸10 min。各組小鼠Gfp表達以Gapdh進行校正。Gfp正向引物：5'-ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAG-3'；Gfp反向引物：5'-TCAAAGATCTACCATGTACAGCTCGT-3'；Gapdh正向引物：5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'；Gapdh反向引物：5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。

1.3.7 冰凍切片及免疫組織化學染色

從-80℃取出OCT包埋的各組心臟組織（每組8只），于-20℃復溫1 h后，使用冰凍切片機（Leica，德國）以5 μm為厚度進行冰凍切片。切片以病變部位為主，縱切并盡量包含四腔心。切片后于-20℃保存。

切片從-20℃取出后于4℃回溫10 min，室溫回溫20 min后，以PBS沖洗3次。切片經微波修復（檸檬酸鈉）后，使用3%H2O2消除內源性過氧化物酶。切片經山羊血清封閉后，一抗（1∶200）孵育4℃過夜。次日以PBS洗去未結合一抗，并按照實驗步驟孵育二抗。應用DAB溶液顯色后，以蘇木素復染。梯度酒精脫水封片，室溫放置1 d后，收片保存。應用正置顯微鏡采集圖片（Leica，德國）。

1.4 統(tǒng)計學處理

2　結果

2.1 肉眼大體形態(tài)觀察

手術1月后手術+受孕組及手術+未受孕組小鼠均可觀察到左室前外側壁可見橢圓形、不規(guī)則形心臟變白區(qū)，約占左室面積1/3～1/2，變白區(qū)心肌活動減弱或消失，甚至反常運動；同時可見左室前外側壁明顯變薄，心肌橫截面約占左室周徑1/3的左室前外側壁明顯變薄。由此可證實手術模型建立成功，手術后各組均出現(xiàn)肉眼可見的心肌梗死形態(tài)。

2.2 受孕明顯改善心梗誘導的小鼠心電圖改變

心電圖為檢測心肌梗死手術模型制作成功與否的金標準。本實驗中手術后雌鼠心電圖呈現(xiàn)特殊的ST段抬高的心肌缺血或梗死表現(xiàn)，說明心肌梗死模型制作成功（圖1 C和E）。通過建立心肌梗死模型，觀察術前及術后心電圖變化情況，研究手術+受孕組胚胎干細胞遷徙受損心肌后，在心電圖方面改善的情況。圖1A和B為正常組心電圖；圖1 C和D分別為手術+未受孕組同只母孕鼠在手術后1周和產后1月的心電圖，前者可見到ST段弓背向上抬高，為心肌梗死急性期表現(xiàn)；后者可看到ST段較前稍有下降，但無明顯恢復的變化。圖1 E和F為手術+受孕組同只母鼠術后1周和1月心電圖，前者表現(xiàn)為ST段高聳，為心肌梗死急性期表現(xiàn)；后者表現(xiàn)為ST段輕度倒置，表現(xiàn)為心肌梗死已經進入慢性期，其恢復水平較手術+未受孕組好。

圖1　各組雌鼠心電圖的改變情況Note.A.ECG of a mouse of the sham group at 1 week after operation；B.ECG of a mouse of the sham group at 1 month after operation；C.ECG of a mouse of the surgery+no pregnancy group at 1 week after operation；D. ECG of a mouse of the surgery+no pregnancy group at 1 month after operation；E.ECG of a mouse of the surgery +pregnancy group at 1 week after operation；F.ECG of a mouse of the surgery+pregnancy group at 1 month after operation.n=8.Fig.1 Changes of electrocardiogram（ECG）in each group

2.3 受孕明顯改善心梗誘導的小鼠心臟結構改變

超聲心動圖為檢測孕鼠術后遠期發(fā)生心肌重構后的結構和功能，觀察孕鼠術后1個月心臟結構變化，及心功能變化情況。心肌梗死亞急性期或慢性期出現(xiàn)心室重構，心功能降低，故超聲心動圖既可以評價心肌結構變化，也可作為評判心梗模型建立成功與否的標準之一。圖2分別為假手術組、手術+受孕組、手術+未受孕組在相同條件下飼養(yǎng)1月后的超聲心動圖。由結果可見，假手術組雌鼠手術后1月心臟結構完整，心功能大致正常（圖2A）。手術+未受孕組雌鼠超聲圖像，可見其心臟心腔明顯擴大，心尖鈍圓明顯，前壁變薄，心肌內出現(xiàn)梗死灶，心室重構明顯，甚至出現(xiàn)室壁瘤，而心功能明顯減低（圖2 B）。從手術+受孕組超聲圖像中可見心臟心腔擴大，前壁變薄，心肌梗死灶明顯，已經發(fā)生心室重構，心功能減低（圖2 C）。但通過圖2 B和圖2 C的比較可見，前者心腔擴大更為明顯，心臟前壁更薄，心尖更鈍圓，說明心肌梗死程度更重，也說明心肌梗死已由急性期演變到慢性期；前者即手術+受孕組心肌梗死損傷情況較后者輕，提示可能是由于胎鼠胚胎干細胞遷移至母鼠心臟損傷處對梗死心肌的修復作用所致。

通過建立心肌梗死模型，觀察各組小鼠超聲心動圖及心功能的改善情況，特別是手術+受孕組，根據比較其心功能改善情況，來評價受孕對心肌梗死后心功能的改善作用。如表1所示假手術組、手術+受孕組和手術+未受孕組小鼠，于手術1月后（手術+受孕組小鼠均已進入孕產期）以超聲檢測各組小鼠左心室射血分數（EF/%）、左室內徑（收縮期）（LVID/d）、左室內徑（舒張期）（LVID/s）。結果顯示手術 +受孕組 EF%較假手術組減低（P＜0.05），而較手術+未受孕組升高（P＜0.05）；手術+受孕組LVID/d較假手術組升高（P＜0.05），而較手術+未受孕組降低（P＜0.05）；手術+受孕組LVID（s）較假手術組升高（P＜0.05），而較手術+未受孕組降低（P＜0.05）。

圖2　各組小鼠超聲心動圖檢測Note.A.Echocardiography of a mouse of the sham group；B.Echocardiography of a mouse of the surgery without pregnancy group；C.Echocardiography of a mouse of the surgery+pregnancy group.n=8.Fig.2 Changes of the cardiac function in mice of each group detected by echocardiography taken at one month after operation

表1　各組小鼠心臟超聲心動參數（n=8，±s）Tab.1 The echocardiographic parameters in the mice of each group

表1　各組小鼠心臟超聲心動參數（n=8，±s）Tab.1 The echocardiographic parameters in the mice of each group

注：*，手術+受孕組與假手術組相比差異有顯著性；#，手術+未受孕組與手術組相比差異有顯著性（P＜0.05）。Note.*，significant difference when the surgery+pregnancy group was compared with sham group；#，significant difference when the surgery+pregnancy group compared with the surgery without pregnancy group（ANOVA on ranks，P＜0.05）.

組別Groups　EF/%　LVID/d　LVID/s假手術組Sham group　0.704±0.043　3.264±0.188　2.204±0.175手術+受孕組Surgery+pregnancy group　0.501±0.01*　3.91±0.216*　3.000±0.338*手術組+未受孕組Surgery without pregnancy group　0.315±0.089#　4.714±0.635#　3.938±0.815#

2.4 孕鼠血液中可檢測到GFP基因

各組小鼠（各8只）于手術1月后提取血液DNA，通過PCR擴增和水平凝膠電泳，檢測是否存在GFP基因，以檢驗孕鼠血液循環(huán)中是否含有來源于胚胎的GFP基因。通過鹽析法提取手術后一月雌孕鼠血液中DNA，經GFP引物進行PCR擴增后，進行水平凝膠電泳檢測。如圖3所示，手術+受孕組雌鼠血液中存在GFP基因，而假手術組和手術+未受孕組雌鼠血液中均未檢測到GFP基因。因此提示胚胎細胞可穿過胎盤屏障進入母鼠體內。

2.5 受孕母鼠心臟中表達GFP蛋白

圖3　血液中GFP基因的檢測Note.M：DNA molecular marker；Lane 1：Negative control；Lane 2：H2O；Lane 3：Surgery without pregnancy group；Lane 4-6：Surgery+pregnancy groups；Lane 7：Positive control.Fig.3 Detection of GFP gene in the blood

前文已經通過心電圖、超聲心動圖證實受孕可以改善心功能，并且通過血液PCR檢測也證實胚胎干細胞可進入母體血液系統(tǒng)的事實，因此我們推測受孕母鼠心梗狀況的減輕是由于胚胎干細胞遷徙至受損心肌發(fā)揮的修復作用。為此我們通過免疫組化方法檢測受孕母鼠心臟中是否表達GFP基因。以各組小鼠（各8只）心臟組織冰凍切片，進行GFP免疫組織化學染色后結果如圖4所示，圖4A、B和C分別為手術+未受孕組免疫組化50倍、100倍及200倍鏡下圖片，在梗死區(qū)域附近未見GFP熒光蛋白褐色沉淀，但可見大量炎癥細胞浸潤。而D、E和F分別為手術+受孕組50倍、100倍及200倍鏡下圖片，在整個梗死區(qū)明顯可見大量GFP熒光蛋白褐色沉淀，證明有較多的含有GFP的胚胎干細胞存在于心肌梗死區(qū)，并可見部分炎癥細胞浸潤。

圖4　小鼠心肌組織中GFP熒光蛋白表達Note.A，B and C are respectively the microscopic images of×50，×100 and×200 in the same myocardial infarction area of surgery without pregnancy group，and no GFP fluorescent protein was detected in the cardiomyocytes.Figure D，E and F are respectively the microscopic images of×50，×100 and×200 in the same myocardial infarction area of surgery +pregnancy group，abundant brown cells were detected in the mouse myocardium.×50，bar=500 μm；×100，bar= 200 μm；×200，bar=100 μm.Fig.4 GFP expression in the mouse myocardial tissues

3　討論

心肌梗死及其引起的心力衰竭是導致心血管疾病患者死亡的主要原因，目前主要治療方法為藥物治療、介入治療及“搭橋”手術治療等，但這些治療方法僅能緩解癥狀，延緩疾病進展，不能根本上修復已經壞死的心肌細胞。干細胞對各組織的修復作用已經被國內外研究所證實，如發(fā)現(xiàn)胚胎干細胞可以存在于母孕鼠大腦、腎臟、肝臟、血液及皮膚等損傷部位［12-15］。那么胚胎干細胞是否可以通過胎盤屏障遷移至受損心肌發(fā)揮修復作用呢？

在本實驗中，我們在進行小鼠心肌梗死模型后，通過心電圖和超聲心動圖確認模型是否成功，并利用二者觀察受孕是否能夠改善心肌梗死損傷。心電圖在心肌梗死診斷中具有特征性改變的演變規(guī)律，特異性強，敏感性高，對定性、定位、分類及預后評估等方面具有重要地位，特別是在前降支單支病變中具有重要提示作用［16］，更是確認心肌梗死模型建立成功與否的金標準。心肌梗死時心電圖的演變分為三期［17］：超急性期在冠狀動脈閉塞10分鐘到數小時內，心電圖表現(xiàn)為巨大高聳的T波或ST段呈直立型升高；急性期歷時數小時至數天，從ST段弓背向上抬高呈單向曲線，出現(xiàn)壞死型Q波，至ST段恢復到等電線，T波倒置。亞急性期數天至數周，表現(xiàn)為病理性Q波，T波逐漸恢復或表現(xiàn)慢性冠狀動脈供血不足?；謴推谛碾妶D僅殘留病理性Q波，如為小面積的心肌梗死，可不遺留病理性Q波。本實驗中手術+非受孕組和手術+受孕組于急性期均表現(xiàn)為ST段弓背向上抬高呈單向曲線，提示模型建立成功；于1月后進展至亞急性期，但手術+非受孕組心電圖僅表現(xiàn)為T波稍有恢復，而手術+受孕組心電圖T波恢復較為明顯。此外，超聲心動圖結果也顯示手術+未受孕組雌鼠心臟心腔明顯擴大，存在心肌梗死灶，心室重構明顯，且出現(xiàn)心功能指數的明顯減低。而手術+受孕組雖仍有心臟結構變化，但較手術+未受孕組已具有明顯改善。以上結果提示受孕對心肌損傷具有明顯的修復作用。

由于心肌細胞的不可再生性，心肌梗死后心肌細胞可發(fā)生壞死及心室重構。因此我們推測受孕母鼠心梗癥狀減輕可能是由于胚胎干細胞進入體內，分化為心肌細胞從而起到對母鼠心臟的修復作用。而國外也有報道，50%以上的自發(fā)性心力衰竭女性能自愈［18-19］，而圍產期心力衰竭的自愈率最高［20］，但其機理尚未闡明。我們利用GFP雄鼠與心梗模型雌鼠進行交配，并且檢測到懷孕后1月母鼠的血液和心臟中具有GFP基因的表達，證實了GFP熒光蛋白標記的胚胎干細胞可以通過血液循環(huán)系統(tǒng)，遷徙至心肌梗死后的母鼠心肌損傷處起到修復作用。

本研究初步探索了胎兒母體干細胞轉移和微嵌合體現(xiàn)象，并且發(fā)現(xiàn)其對缺血損傷的心肌有可能存在一定的修復作用，從而為胚胎干細胞治療心臟疾病提供了重要的實驗依據。

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Repairing effect of embryonic stem cells on injured maternal myocardium in pregnant mice

WANG Hong-mao1，QIU Bin2，DENG-Ran2，WANG Chao2，YONG Wei-dong2，SHI Lin1*
（1.Department of Cardiovascular Diseases，Children's Hospital Affiliated to Capital Institute of Pediatrics，Beijing 100020，China；2.Institute of Laboratory Animal Science，Peking Union Medical College&Chinese Academy of Medical Sciences Laboratory of Gene and Development，Beijing 100021，China）

【Abstract】Objective To determine if fetal stem cells can enter the maternal circulation during pregnancy and repair the injuries of maternal heart.Methods C57 female mice at the age of 6-8 weeks were randomly assigned to three groups：sham control，surgery without pregnancy，and surgery with pregnancy（n=8，eath group）.The control sham group was developed by opening and closing of the chest.The other two groups underwent heart surgery.The myocardial infarction（MI）model was induced by ligation of the left anterior descending coronary artery.Half of the surgical mice mated with e-GFP transgenic male mice，and another half group was not.Electrocardiogram（ECG）and echocardiographic images were recorded at pre-operation，post-operation and postpartum.The collected data were used to evaluate the heart function. The GFP expression was detected by immunohistochemistry and q-PCR.Results When compared with the sham group，both the ischemia surgery groups with and without pregnancy，the ECG ST segment was significantly increased.This measurement indicated that the myocardial ischemia surgery was successful，and no significant difference in the ST segments between two ischemia surgery groups was found.However，when ECG was measured in the surgical mice after postpartum，their myocardial ischemia was dramatically improved when compared with that of the ischemia surgery only mice.Echocardiographic images also indicated that both the surgery groups had myocardial ischemia，however，no significant difference was observed in the pregnant mice before and after postpartum.The order of the cardiac function indexes from high to low was the sham group，surgery with pregnancy group，and surgery with no pregnancy group；in particular，the cardiac function of pregnancy group was significantly enhanced compared with that of the surgery with no pregnancy group（P＜0.05）. More importantly，both immunofluorescence and q-PCR results showed that the embryonic stem cell translocation through circulation system with GFP expression in the heart of pregnancy group，while negative in other two groups.Conclusions Embryonic stem cells can be transferred into the maternal circulation of pregnant mice，and play a role in the repairing of their cardiac injuries.

【Key words】Embryonic stem cells；GFP；Myocardial ischemia；Cardiac repair；Mice；Pregnancy

【中圖分類號】Q95-33

【文獻標識碼】A

【文章編號】1005-4847（2016）02-0127-07

Doi：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.02.004

［基金項目］中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所基本科研業(yè)務費專項（DWS201508）；863（2012AA02240）資助；國家科技重大專項（2014ZX10004002-001）。

［作者簡介］王宏茂（1986-），男，醫(yī)師，碩士學位，E-mail：sunnyboymao@126.com

［通訊作者］石琳，女，主任醫(yī)師，教授，E-mail：shilin9789@126.com

Corresponding author：SHI Lin，Email：shilin9789@126.com

［收稿日期］2015-12-05