實(shí)驗(yàn)小鼠腎勻漿中酯酶-3的實(shí)驗(yàn)室測(cè)定能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)

魏杰，王洪，鞏薇，賀爭(zhēng)鳴，岳秉飛*

（中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050）

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實(shí)驗(yàn)小鼠腎勻漿中酯酶-3的實(shí)驗(yàn)室測(cè)定能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)

魏杰，王洪，鞏薇，賀爭(zhēng)鳴，岳秉飛*

（中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050）

【摘要】目的 通過(guò)實(shí)驗(yàn)小鼠腎勻漿中酯酶-3項(xiàng)目的檢測(cè)比對(duì)，了解全國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的水平，促進(jìn)各實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)質(zhì)控。方法 按照CNAS批準(zhǔn)的能力驗(yàn)證方案，制備樣品并將穩(wěn)定性和均勻性合格的樣品作為能力驗(yàn)證樣品，進(jìn)行隨機(jī)編號(hào)，隨作業(yè)指導(dǎo)書(shū)一起發(fā)放給參加單位。在規(guī)定時(shí)限提交檢驗(yàn)報(bào)告和原始記錄復(fù)印件，其結(jié)果與樣品預(yù)檢結(jié)果完全一致的判為優(yōu)秀結(jié)果；除雜合型判定以外的結(jié)果均一致的判定為滿(mǎn)意結(jié)果，否則判為不滿(mǎn)意結(jié)果。結(jié)果 共10個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參加本次比對(duì)試驗(yàn)，其中優(yōu)秀結(jié)果0個(gè)實(shí)驗(yàn)室；滿(mǎn)意結(jié)果的有9個(gè)實(shí)驗(yàn)室，占參加比對(duì)實(shí)驗(yàn)室的90.0%；不滿(mǎn)意結(jié)果1個(gè)實(shí)驗(yàn)室，占參加比對(duì)實(shí)驗(yàn)室的10.0%。結(jié)論 本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目反映了各參與實(shí)驗(yàn)室在實(shí)驗(yàn)小鼠腎勻漿中酯酶-3的總體檢測(cè)能力較高，但檢測(cè)細(xì)節(jié)及部分實(shí)驗(yàn)室技術(shù)水平還有待提高。

【關(guān)鍵詞】能力驗(yàn)證；質(zhì)量控制；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；酯酶-3

能力驗(yàn)證是一項(xiàng)用于評(píng)審實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)試或測(cè)量工作能力的活動(dòng)［1］。開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室間的能力驗(yàn)證項(xiàng)目，是一種國(guó)際通行的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方法，被廣泛用于國(guó)際實(shí)驗(yàn)室之間的質(zhì)控互認(rèn)，也是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重要工作［2］。隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)機(jī)構(gòu)及認(rèn)證檢測(cè)項(xiàng)目增加，對(duì)各實(shí)驗(yàn)室在相同項(xiàng)目中是否具備相應(yīng)的檢測(cè)能力也亟待比對(duì)驗(yàn)證。為此，中國(guó)食品藥品檢定研究院根據(jù)中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（CNAS）的有關(guān)要求，組織實(shí)施了本次能力驗(yàn)證計(jì)劃：NIFDC-PT-020實(shí)驗(yàn)小鼠腎勻漿中酯酶-3檢測(cè)。

酯酶-3檢測(cè)項(xiàng)目是GB/T14927.1-2008《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系小鼠、大鼠生化標(biāo)記檢測(cè)法》中規(guī)定的遺傳生化標(biāo)記常規(guī)14個(gè)位點(diǎn)之一，能在蛋白水平上反映小鼠基因表達(dá)差異，廣泛應(yīng)用于近交系小鼠常規(guī)和新品系鑒定中［3，4］。其樣品來(lái)源易得，檢測(cè)方法成熟，檢測(cè)所需試劑儀器經(jīng)濟(jì)，電泳圖譜帶型豐富清晰，結(jié)果易于判斷，是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)的理想項(xiàng)目［5］。

本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目即通過(guò)酯酶-3檢測(cè)的室間比對(duì)，了解不同實(shí)驗(yàn)室在該項(xiàng)目上的技術(shù)水平，評(píng)價(jià)其檢測(cè)能力，考察室間差異和存在問(wèn)題，促進(jìn)各實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)管理和提高檢測(cè)水平，積累質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，為質(zhì)量管理體系的建設(shè)和完善提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1 檢測(cè)樣品

本項(xiàng)目提供的待測(cè)樣為小鼠腎勻漿凍干樣品。BALB/c、C57BL/6、C3H三品系小鼠各15只，8周齡，均來(lái)自中國(guó)食品藥品檢定研究院【SCXK（京）2012-0003】。動(dòng)物取材實(shí)驗(yàn)均在中國(guó)食品藥品檢定研究院動(dòng)物設(shè)施內(nèi)完成【SYXK（京）2011-0008】。二氧化碳安樂(lè)術(shù)處死動(dòng)物，取腎臟剝除筋膜，按照2∶1（V/W）比例加入預(yù)冷的蒸餾水，并用組織勻漿器勻漿。勻漿后于4℃低溫高速離心機(jī)中離心，15 000 r/min，30 min。分離上清，加保護(hù)劑，以每瓶100 μL的裝量分裝至西林瓶，上凍干機(jī)凍干，加蓋，封口膜封口，隨機(jī)編號(hào)后密封冷藏。具體制備方法及樣品的穩(wěn)定性和均一性驗(yàn)證已另文發(fā)表，經(jīng)測(cè)定能夠滿(mǎn)足質(zhì)量控制的要求［5，6］。

每個(gè)參加實(shí)驗(yàn)室分配3瓶樣品，a型、c型、ac 型3個(gè)組別各抽取一瓶并隨機(jī)編號(hào)，通過(guò)EMS冷藏寄發(fā)。

1.2 參加實(shí)驗(yàn)室

本項(xiàng)目面向全國(guó)省市級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)中心、藥檢所和相關(guān)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放，對(duì)每個(gè)參加者賦予一個(gè)代碼，凡說(shuō)明參加者的檢測(cè)結(jié)果和能力評(píng)價(jià)時(shí)均以代碼表示。共有10個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參與，遍布北京、上海、廣東、黑龍江、遼寧、陜西、新疆、湖南、湖北9個(gè)省市，其中北京2家單位參加。

1.3 檢測(cè)項(xiàng)目和要求

檢測(cè)項(xiàng)目為小鼠腎勻漿中酯酶-3，檢測(cè)指標(biāo)包括酯酶-3的a基因型、c基因型和ac基因型，其中ac型為雜合型?；蛐团卸梢?jiàn)圖1。

圖1　酯酶-3結(jié)果判定型別圖Note.1-4 stand for types c，ac，a and a，respectively.Fig.1 Detection mapping of esterase-3 types

本項(xiàng)目所提供的樣品可在開(kāi)封后直接加入70 μL蒸餾水溶解取樣測(cè)定，無(wú)需其余加工處理，并附有作業(yè)指導(dǎo)書(shū)和樣品狀態(tài)確認(rèn)表；如樣品狀態(tài)確有異常，可聯(lián)系發(fā)樣單位及時(shí)補(bǔ)寄。針對(duì)酯酶-3項(xiàng)目的檢測(cè)，可以參照GB/T14927.1-2008的標(biāo)準(zhǔn)方法，但沒(méi)有規(guī)定統(tǒng)一方法；測(cè)定結(jié)果為定性的結(jié)果，按照樣品編號(hào)報(bào)告為所見(jiàn)酶譜基因型：a型/c型/ac型，但作業(yè)指導(dǎo)書(shū)中沒(méi)有提示會(huì)出現(xiàn)ac雜合型。測(cè)定完成后，需在檢測(cè)時(shí)限內(nèi)一并提交檢測(cè)報(bào)告和檢驗(yàn)原始記錄復(fù)印件。

1.4 結(jié)果評(píng)價(jià)

依據(jù)GB/T14927.1-2008，對(duì)各實(shí)驗(yàn)室提供的原始記錄和檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。參考CNAS能力評(píng)價(jià)指南的說(shuō)明［7］，本項(xiàng)目評(píng)價(jià)考察了時(shí)效性、真實(shí)性和結(jié)果正確性三個(gè)部分，分為優(yōu)秀、滿(mǎn)意和不滿(mǎn)意三個(gè)等級(jí)。能在規(guī)定時(shí)限內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)、提交的原始記錄含電泳圖片詳實(shí)可靠、反饋結(jié)果與預(yù)設(shè)完全一致即為優(yōu)秀；鑒于穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中雜合型受溫度影響較大的因素考慮［5］，當(dāng)滿(mǎn)足時(shí)限和材料完整、除ac雜合型以外反饋的結(jié)果均與預(yù)設(shè)結(jié)果一致時(shí)，可視為滿(mǎn)意結(jié)果；否則，即為不滿(mǎn)意結(jié)果。

2　結(jié)果

本次小鼠酯酶-3能力驗(yàn)證項(xiàng)目共發(fā)放了10個(gè)實(shí)驗(yàn)室，均按時(shí)提交了檢測(cè)結(jié)果、原始記錄，但沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室上報(bào)了雜合型結(jié)果，即沒(méi)有優(yōu)秀的實(shí)驗(yàn)室。

對(duì)10個(gè)實(shí)驗(yàn)室的其余結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，獲滿(mǎn)意結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室9家，占參加單位的90.0%；不滿(mǎn)意結(jié)果有1家，占參加單位的10.0%，詳見(jiàn)表1。關(guān)于確認(rèn)表和原始記錄細(xì)節(jié)的一些情況也做一匯總（樣品狀態(tài)均為良好），不計(jì)入最終結(jié)果評(píng)價(jià)，僅反映各實(shí)驗(yàn)室參與此次能力驗(yàn)證計(jì)劃的實(shí)際情況，具體可參見(jiàn)表2。

3　討論與建議

NIFDC-PT-020實(shí)驗(yàn)小鼠腎勻漿中酯酶-3檢測(cè)是第三次開(kāi)展的全國(guó)范圍的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)檢機(jī)構(gòu)能力驗(yàn)證比對(duì)項(xiàng)目之一。相比于前兩次，此次能力驗(yàn)證項(xiàng)目有如下特點(diǎn)：（1）參與實(shí)驗(yàn)室數(shù)量歷史最高，歷經(jīng)幾年發(fā)展具備相應(yīng)檢測(cè)能力的實(shí)驗(yàn)室有所增加，同時(shí)，能力驗(yàn)證項(xiàng)目的影響力逐年提升；（2）樣品的制備發(fā)放流程更加規(guī)范，對(duì)均一性和穩(wěn)定性的驗(yàn)證更為細(xì)致；（3）項(xiàng)目指標(biāo)設(shè)定靈活，設(shè)定了ac雜合型，更貼近實(shí)際檢測(cè)需求；（4）方法選擇更為多樣，有一家實(shí)驗(yàn)室（代碼2014-LA-006）利用了酯酶-3小鼠和大鼠的檢測(cè)方法，選擇2種緩沖液分別實(shí)驗(yàn)，并得到了一致的結(jié)果；（5）結(jié)果考核內(nèi)容不斷豐富，增加了時(shí)效性和原始記錄真實(shí)性的部分。通過(guò)組織實(shí)施這一項(xiàng)目以及對(duì)結(jié)果的整理分析，也發(fā)現(xiàn)了尚存的部分問(wèn)題。

3.1 不滿(mǎn)意結(jié)果原因分析

檢測(cè)結(jié)果不滿(mǎn)意的1家實(shí)驗(yàn)室（代碼2014-LA-004），樣品CB-G-160的設(shè)定結(jié)果是a型，樣品CBG-233的設(shè)定結(jié)果是c型，該實(shí)驗(yàn)室得出的結(jié)果與設(shè)定結(jié)果完全相反。同時(shí)，ac雜合型樣品即便在降解的情況下，也可以表現(xiàn)為重帶c型。但與其他9家實(shí)驗(yàn)室不同的是，該實(shí)驗(yàn)室把該雜合型判定為a型。從該實(shí)驗(yàn)室提供的結(jié)果圖中，也很難看出目的條帶。綜合分析認(rèn)為，該實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有檢出目的條帶，判定為不滿(mǎn)意結(jié)果。

3.2 應(yīng)注重原始記錄的完整性

在本次結(jié)果統(tǒng)計(jì)中，沒(méi)有填寫(xiě)上樣量的實(shí)驗(yàn)室有2家，0.3 μL上樣量的實(shí)驗(yàn)室有2家（含不滿(mǎn)意結(jié)果的1家），0.6 μL上樣量的實(shí)驗(yàn)室有5家，0.9 μL上樣量的單位有1家?？梢?jiàn)上樣量的差異并不是造成是否能夠得到滿(mǎn)意結(jié)果的關(guān)鍵影響因素，但仍應(yīng)填寫(xiě)完整。本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目考察了檢測(cè)的時(shí)效性、原始記錄的真實(shí)性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。雖然沒(méi)有將原始記錄的完整性列入考核，仍應(yīng)提起各實(shí)驗(yàn)室的注意。原始記錄的完整性，不僅是實(shí)驗(yàn)的一部分，對(duì)結(jié)果核查、檔案管理和質(zhì)量控制都十分重要。

3.3 接收樣品無(wú)誤后應(yīng)盡快開(kāi)始試驗(yàn)

本次能力驗(yàn)證活動(dòng)中，10家實(shí)驗(yàn)室均在5 d內(nèi)接收到了樣品，并且樣品狀態(tài)良好。其中，1 d接收到樣品的實(shí)驗(yàn)室有4家，2 d接收到的有4家（含不滿(mǎn)意結(jié)果的1家），4 d和5 d接收到樣品的各1家。

而對(duì)于實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始時(shí)間上，收到樣品次日開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室1家，收到4 d開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的1家，收到5 d開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的3家（含不滿(mǎn)意結(jié)果1家），收到8 d開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的4家，最晚的1家收到12 d開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

表1　能力驗(yàn)證酯酶-3結(jié)果統(tǒng)計(jì)一覽表Tab.1 Analysis of the comparative test results of esterase-3 detection

表2　能力驗(yàn)證酯酶-3項(xiàng)目各參加實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)表及原始記錄情況表Tab.2 The quiz information from the laboratories entered into the esterase-3 detection project

經(jīng)過(guò)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)并綜合各實(shí)驗(yàn)室的反饋結(jié)果來(lái)看，運(yùn)輸和開(kāi)始實(shí)驗(yàn)室間也不是最終影響實(shí)驗(yàn)室是否能得到滿(mǎn)意結(jié)果的關(guān)鍵影響因素，但還是建議各實(shí)驗(yàn)室在接收確認(rèn)后，盡早開(kāi)始試驗(yàn)，以期得到更容易判讀的結(jié)果并有利于樣品的復(fù)檢等工作。在本次結(jié)果回收統(tǒng)計(jì)中，有兩家單位的原始記錄中都能清晰的看到雜合型的條帶，無(wú)論出于何種原因沒(méi)有判定為雜合型，但還是顯示出檢測(cè)時(shí)間對(duì)于結(jié)果的重要性。凍干樣品模擬了實(shí)際檢測(cè)樣品，如果是活體動(dòng)物新鮮采集樣品，就應(yīng)盡快實(shí)驗(yàn)，防止酶蛋白的降解，進(jìn)而獲得更貼近實(shí)際的檢測(cè)結(jié)果。

3.4 需要提高非常規(guī)樣品的檢測(cè)和復(fù)檢意識(shí)

本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目首次引入了雜合型樣品，雜合型的條帶一般出現(xiàn)于近交系小鼠發(fā)生遺傳變異和封閉群小鼠中［8］，而在遺傳質(zhì)量合格的近交系小鼠中不會(huì)檢出。由于雜合型樣品的穩(wěn)定性會(huì)收到溫度的影響，本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目雖然發(fā)放了雜合型樣品，但并沒(méi)有把該樣品作為滿(mǎn)意結(jié)果評(píng)價(jià)的硬性指標(biāo)，僅作為滿(mǎn)意之上的優(yōu)秀的結(jié)果評(píng)價(jià)指標(biāo)。從各實(shí)驗(yàn)室原始記錄圖中可以看到，2家實(shí)驗(yàn)室的圖譜中能夠清晰的看到雜合型條帶，但是并沒(méi)有進(jìn)行復(fù)檢，也沒(méi)有判為雜合型結(jié)果，而判定為其中的重帶（c型）。另有1家進(jìn)行了復(fù)檢并采用了2種緩沖液（2014-LA-006），但也沒(méi)有檢出雜合型。除了和上述穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)室間等因素有關(guān)，反映出參與實(shí)驗(yàn)室對(duì)于非常規(guī)樣品還沒(méi)有足夠的準(zhǔn)備，對(duì)于相關(guān)的檢品的檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)上還有待積累。

3.5 組織對(duì)實(shí)驗(yàn)室的培訓(xùn)宣貫

能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保障體系的重要組成部分，實(shí)驗(yàn)室則是能力驗(yàn)證活動(dòng)中的主體。通過(guò)組織和參與能力驗(yàn)證活動(dòng)，能更好的衡量實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部質(zhì)控水平、人員能力、設(shè)備狀況、運(yùn)行能力等因素。通過(guò)長(zhǎng)期的參與、交流和學(xué)習(xí)，有助于發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，改進(jìn)檢測(cè)技術(shù)方法，提升檢測(cè)及管理水平［9-10］。

從結(jié)果反饋來(lái)看，有部分實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備并不充分，發(fā)樣結(jié)束訂購(gòu)檢測(cè)試劑盒、樣品接收確認(rèn)表不蓋章、原始記錄圖片不能及時(shí)提供的情況均有發(fā)生。這和有些參與實(shí)驗(yàn)室對(duì)能力驗(yàn)證項(xiàng)目認(rèn)識(shí)不足有關(guān)，需要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)體系的管理，減輕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人員的負(fù)擔(dān)，充分利用參加能力驗(yàn)證的機(jī)會(huì)檢驗(yàn)所有相關(guān)環(huán)節(jié)的質(zhì)量活動(dòng)，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)整改，從而使質(zhì)量體系得到完善。

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Proficiency evaluation of laboratories for the detection of esterase-3 in the kidneys of laboratory mice

WEI Jie，WANG Hong，GONG Wei，HE Zheng-ming，YUE Bing-fei*
（National Institutes for Food and Drug Control，Beijing 100050，China）

【Abstract】Objective To investigate the detection capacity of esterase-3（Es-3）in the laboratory animals monitoring laboratories in China，and to improve the quality management of laboratories.Methods We prepared the test samples according to the criteria of China National Accreditation Service for Conformity Assessment（CNAS），all the samples were certificated by homogeneity test and stability test.Then，samples with random numbers and standard operation instruction were distributed to the participant laboratories.The laboratories should submit their reports before the deadline expires. When the results are the same as the standard results，the laboratories will receive excellent remark；when the results are the same as the standard results except the hybridization type，the laboratories will receive satisfactory remark；otherwise，it will receive unsatisfactory remark.If a laboratory did not submit report，the laboratory will also receive unsatisfactory remark.Results Ten laboratories participated in the program，and no laboratory received excellent remark.Nine laboratories （90.0%of enrolled laboratories）had satisfactory results，while one laboratory（10.0%of enrolled laboratories）had unsatisfactory results.Conclusions The nationwide overall detection level of laboratories in Es-3 is relatively high.However，some details should be noticed and several laboratories should improve their detecting ability.

【Key words】Capacity evaluation；Quality control；Laboratory animal；Esterase-3

【中圖分類(lèi)號(hào)】Q95-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1005-4847（2016）02-0204-04

Doi：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.02.018

［基金項(xiàng)目］國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2015BAI07B02）：實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物病原分子生物學(xué)快速檢測(cè)新技術(shù)研究與應(yīng)用。

［作者簡(jiǎn)介］魏杰（1982-），女，碩士。研究方向：免疫遺傳檢測(cè)。E-mail：jane3040320@163.com。

［通訊作者］岳秉飛（1960-），男，研究員，博士。研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)。E-mail：y6784@126.com。

Corresponding author：YUE Bing-fei，Email：y6784@126.com

［收稿日期］2016-01-13