國(guó)產(chǎn)?；撬岬窝垡褐幸志鷦┦褂脿顩r分析

肖 璜，戴 ，楊美琴，馬仕洪

（中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050）

根據(jù)給藥頻次，滴眼液可分為單劑量制劑和多劑量制劑，國(guó)內(nèi)常用滴眼液以多劑量制劑為主，為保證其在連續(xù)使用過程中不發(fā)生微生物污染，需添加適宜的抑菌劑。滴眼液中所使用的抑菌劑種類和添加量對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量與臨床安全性有直接影響。本研究中通過對(duì)國(guó)內(nèi)13家企業(yè)的?；撬岬窝垡篬1－2]中抑菌劑的種類和含量進(jìn)行分析，結(jié)合抑菌效力，探討其抑菌劑使用的必要性和合理性，分析國(guó)產(chǎn)滴眼液中抑菌劑的應(yīng)用現(xiàn)狀，為提高國(guó)產(chǎn)滴眼液制劑質(zhì)量和加強(qiáng)監(jiān)管提供有效的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試劑耗材

對(duì)照品：苯扎溴銨（Sigma－Aldrich公司）；羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯（中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

樣品：?；撬岬窝垡?，來自13家企業(yè)的75批樣品，均為2015年全國(guó)評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)樣品。

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XBD－C18柱（序列號(hào)USNH033839，250 mm × 4.6 mm，5 μm）。

測(cè)試菌株：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC（B）26003、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CMCC（B）10104、大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC（B）44102、白色念珠菌（Candida albicans）CMCC（F）98001 黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC（F）98003（以下簡(jiǎn)稱金葡菌、銅綠菌、大腸菌、白念菌、黑曲霉，中國(guó)食品藥品檢定研究院醫(yī)學(xué)菌種保藏中心，均選第3代菌種）。

培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂（SDA）無菌平皿培養(yǎng)基，胰酪大豆胨瓊脂（TSA）無菌平皿培養(yǎng)基（上海諾狄生物科技有限公司）。

1.2 分析方法

抑菌劑含量按2010年版《中國(guó)藥典·第二增補(bǔ)版》中收載的阿昔洛韋滴眼液中“羥苯乙酯、苯扎溴銨與硫柳汞”項(xiàng)下方法測(cè)定；抑菌劑效力按2010年版《中國(guó)藥典（二部）》附錄ⅪⅩN“抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則”要求，測(cè)定13家企業(yè)產(chǎn)品是否滿足藥典標(biāo)準(zhǔn)?？刂茦?biāo)準(zhǔn)見表1。

2 結(jié)果

2.1 處方分析

13家企業(yè)的樣品共有14個(gè)處方，其中有1個(gè)因單劑量品種未添加抑菌劑（7.14%），有2個(gè)使用季銨鹽抑菌劑（14.29%），其余均使用尼泊金酯類抑菌劑（78.57%）。詳見表 2?？梢?，國(guó)產(chǎn)?；撬岬窝垡褐幸志鷦┦褂幂^單一，主要使用尼泊金酯類和季銨鹽類抑菌劑，且處方質(zhì)量濃度差別不大。

表1 眼用制劑抑菌效力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

表2 國(guó)產(chǎn)?；撬岬窝垡褐幸志鷦┨幏角闆r

2.2 抑菌劑含量分析

按照檢測(cè)方法，對(duì)所有含抑菌劑的產(chǎn)品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見圖1。5家企業(yè)產(chǎn)品不足5批，不利于綜合分析。箱式分布圖僅代表本次試驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)。由圖1可知，部分企業(yè)（編號(hào)為 02，05，07，11）部分批次的樣品中抑菌劑含量低于80%。

圖1 ?；撬岬窝垡褐幸志鷦?shí)測(cè)含量及相對(duì)含量

2.3 抑菌效力分析

不同菌株供試液在不同計(jì)數(shù)法下的回收率見表3。其中牛磺酸滴眼液原液經(jīng)直接接種法后回收率不足70%。可見，原液具有一定的抑菌活性，用直接接種法無法保證足夠的回收率，需要薄膜過濾法去除抑菌活力。為了獲得更真實(shí)的微生物數(shù)據(jù)及便于操作，設(shè)定方法如下：在供試品原液級(jí)計(jì)數(shù)時(shí)，取供試液1 mL，溶解于100 mL 0.9%無菌氯化鈉注射液中，全部通過薄膜過濾器，濾干后，貼于相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基表面，倒置培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。每家企業(yè)的產(chǎn)品進(jìn)行3次評(píng)價(jià)，取均值代表產(chǎn)品的抑菌效力。結(jié)果國(guó)產(chǎn)?；撬岬窝垡焊髌贩N中，苯扎溴銨類抑菌劑的抑菌效力更優(yōu)，符合2010年版《中國(guó)藥典(一部)》對(duì)抑菌效力的相關(guān)要求。而應(yīng)用較多的尼泊金酯類抑菌劑的抑菌效力未能達(dá)到藥典要求。主要表現(xiàn)在細(xì)菌組，尤其是大腸埃希菌。詳見圖2。

表3 計(jì)數(shù)方法考察結(jié)果

3 討論

3.1 抑菌劑含量

2010年版《中國(guó)藥典》在牛磺酸滴眼液品種項(xiàng)下并未收載抑菌劑含量測(cè)定方法。本試驗(yàn)中采用了阿昔洛韋滴眼液品種項(xiàng)下方法，因其分離類別多，基本能用于檢驗(yàn)添加類別不同的情況，且為2015年版《中國(guó)藥典》收載。在本實(shí)驗(yàn)室開展的專項(xiàng)研究中，該方法對(duì)尼泊金酯類（甲酯、乙酯和丙酯）、季銨鹽類（苯扎溴銨）、汞類（硫柳汞）均能達(dá)到良好分離（數(shù)據(jù)暫未發(fā)表）。

抑菌劑含量通常應(yīng)控制在處方量的80%～120%。在本試驗(yàn)中，02，05，07，11號(hào)企業(yè)的部分批次產(chǎn)品中抑菌劑含量不足其處方量的80%，排除試驗(yàn)誤差問題，通過回溯實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，可能存在以下問題：部分企業(yè)含量分布情況不一，制劑穩(wěn)定性差（05企業(yè)和11企業(yè)）；部分企業(yè)低限投料（02企業(yè)和07企業(yè)，不同來源同一批次產(chǎn)品在80%上下浮動(dòng)）。

2010年版《中國(guó)藥典》收錄了10個(gè)滴眼液品種的抑菌劑測(cè)定方法，但其測(cè)定方法并不統(tǒng)一。目前，在2015年版《中國(guó)藥典》中，收錄項(xiàng)下抑菌劑含量測(cè)定的滴眼液品種略有增加（11個(gè)），然而并未全面覆蓋所有滴眼液品種（共43個(gè)）。同時(shí)，各類抑菌劑在不同滴眼液品種中的測(cè)定方法也不相同。在文獻(xiàn)收集過程中，發(fā)現(xiàn)各藥檢單位嘗試對(duì)滴眼液品種項(xiàng)下不同抑菌劑含量測(cè)定進(jìn)行統(tǒng)一，但各單位間并未達(dá)成一致[3－7]。方法不統(tǒng)一可能會(huì)造成檢測(cè)人員操作煩瑣，工作量大，而且廠家出廠放行和監(jiān)管部門裁定認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)還存在差異。因此，需要進(jìn)一步開展標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的協(xié)調(diào)工作，以保證各級(jí)產(chǎn)品認(rèn)可部門最終試驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性和認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范性。2018年3月28日，國(guó)家藥典委員會(huì)于官網(wǎng)發(fā)布了《滴眼劑中抑菌劑含量測(cè)定法（征求意見稿）》，并提請(qǐng)相關(guān)單位按所附方法進(jìn)行自檢，于6月30日前返回檢測(cè)數(shù)據(jù)及修訂意見。統(tǒng)一規(guī)范、靈敏度高、專屬性好的滴眼劑中抑菌劑的通用檢測(cè)方法，將為企業(yè)自查提供技術(shù)支持，為監(jiān)管部門有效執(zhí)法提供有力武器，最終保障臨床安全、有效使用滴眼劑[8]。

圖2 13個(gè)含抑菌劑處方產(chǎn)品抑菌效力測(cè)試結(jié)果

3.2 抑菌效力

2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅩⅤD[9]中的《抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則》在2015年版[10]中被修訂為《抑菌效力檢查法》。名稱的改變，不僅在于執(zhí)行力度上的加強(qiáng)，同時(shí)，代表對(duì)于產(chǎn)品抑菌能力的認(rèn)知被進(jìn)一步推進(jìn)。抑菌效力已不僅僅被認(rèn)知為由抑菌劑產(chǎn)生，而是更進(jìn)一步被認(rèn)定為由產(chǎn)品整體協(xié)同產(chǎn)生。

由表2、圖1和圖2可見，在使用尼泊金酯類抑菌劑的企業(yè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)中，抑菌效力和抑菌劑質(zhì)量濃度并未呈現(xiàn)簡(jiǎn)單的正相關(guān)關(guān)系。以尼泊金乙酯處方含量最高（0.5 g／L）的企業(yè)為例，雖然08企業(yè)滴眼液中的抑菌劑實(shí)測(cè)含量明顯高于01企業(yè)，但01企業(yè)的滴眼液抑菌效力更優(yōu)?；厮萏幏?，01企業(yè)在產(chǎn)品中添加了依地酸二鈉。據(jù)報(bào)道，依地酸二鈉與抑菌劑聯(lián)用，可起到更好的抑菌作用[11]。尼泊金乙酯處方含量最低（0.25 g ／L）的 04企業(yè)，其產(chǎn)品抑菌效力在真菌方面表現(xiàn)優(yōu)異?；厮萏幏剑?4企業(yè)添加了較其他企業(yè)處方量更大的硼類化合物。硼類化合物對(duì)抑菌效力亦有貢獻(xiàn)，主要體現(xiàn)在對(duì)真菌組的抑制。此結(jié)果與同期探索試驗(yàn)結(jié)果可以相互佐證[12]。

在所有含抑菌劑的產(chǎn)品評(píng)估中，僅含苯扎溴銨類產(chǎn)品抑菌效力滿足2010年版《中國(guó)藥典》要求，而廣泛使用的尼泊金酯類產(chǎn)品抑菌效力全線不滿足要求。這一現(xiàn)象也應(yīng)引起業(yè)內(nèi)人士的重視和思考。?；撬犷惼贩N屬于非抗生素類品種，此次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其抑菌劑使用種類單一，大部分產(chǎn)品不滿足標(biāo)準(zhǔn)。相關(guān)試驗(yàn)顯示，既往抗生素類品種中抑菌劑使用種類和量差異較大[13－15]，說明過去研發(fā)階段的抑菌效力問題未引起生產(chǎn)企業(yè)重視。要解決老舊處方中的此類問題，需要得到監(jiān)管、生產(chǎn)和使用三方的進(jìn)一步重視。

目前已上市品種的評(píng)價(jià)參照2010年版《中國(guó)藥典》要求，而申報(bào)品種的評(píng)價(jià)均參照更嚴(yán)格的2015年版《中國(guó)藥典》要求。藥典對(duì)相關(guān)內(nèi)容的改版，通過提高檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)來良性引導(dǎo)企業(yè)在處方設(shè)計(jì)階段加強(qiáng)對(duì)產(chǎn)品性能的整體關(guān)注，使其關(guān)注點(diǎn)不僅僅局限于主藥和雜質(zhì)成分含量，而是擴(kuò)大到產(chǎn)品的安全性、穩(wěn)定性和有效性。

3.3 制劑展望

此次抽驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)流通領(lǐng)域存在單劑量包裝產(chǎn)品。由于2015年版《中國(guó)藥典》效力檢查標(biāo)準(zhǔn)的提高，可能造成企業(yè)選用更強(qiáng)效能的抑菌劑或增大抑菌劑投料量，從而增加不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。但單劑量包裝產(chǎn)品通過減少使用過程中微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)而降低對(duì)抑菌劑的依賴，無疑是品種研發(fā)的另一方向。