熒光定量PCR法在產(chǎn)前篩查B族鏈球菌感染中的臨床應(yīng)用價值和意義

張文茂

摘要 目的：探討不同檢測方法對產(chǎn)前篩查B族鏈球菌感染的診斷準(zhǔn)確度。方法：收治接受產(chǎn)前篩查的孕婦1500例，采集其陰道分泌物標(biāo)本，以基因測序作為金標(biāo)準(zhǔn)，比較細(xì)菌培養(yǎng)和熒光PCR法在篩查B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度、敏感度和特異性。結(jié)果：熒光定量PCR法檢出B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度、敏感度和特異性均明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)（P<0.05）。結(jié)論：熒光PCR法在篩查B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度和敏感度中處于較高水平。

關(guān)鍵詞 熒光定量PCR;準(zhǔn)確度;B族鏈球菌;孕婦;產(chǎn)前篩查

B族鏈球菌是一類位于人體陰道和下消化道內(nèi)的致病菌，該病原菌可能會感染胎兒，導(dǎo)致胎兒窘迫、敗血癥等疾病[1]，嚴(yán)重影響孕婦和胎兒的健康。孕婦陰道內(nèi)B族鏈球菌的感染率約10%～30%，因此開展產(chǎn)前篩查具有重要的臨床意義。臨床通常將基因測序作為B族鏈球菌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法目前無法普及，對設(shè)備和檢測技術(shù)的要求較高[2]，因此本文分析熒光定量PCR法和細(xì)菌培養(yǎng)在產(chǎn)前篩查B族鏈球菌感染檢測中的作用，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

選取接受產(chǎn)前篩查的孕婦1500例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①采集標(biāo)本1周內(nèi)沒有應(yīng)用抗生素類藥物者;②孕周均34～37周。

方法：采集研究對象的陰道分泌物標(biāo)本，每例孕婦均采集3份，并在48h內(nèi)應(yīng)用不同檢測方法診斷B族鏈球菌感染。細(xì)菌培養(yǎng)法：該方法具體是將標(biāo)本在特定的培養(yǎng)基上涂勻接種，并將培養(yǎng)基置于37℃、5%CO₂無菌條件下培養(yǎng)24h，按照培養(yǎng)后菌落的形態(tài)、染色、CAMP等方法給予菌種鑒別。

熒光定量PCR法：該方法具體是將1mL緩沖液加入標(biāo)本并震蕩，離心取下層沉淀并加入緩沖液再次離心，將下層沉淀重懸后添加核酸提取劑，破碎細(xì)胞后置于100℃條件下10min，離心提取上清液備用，然后依儀器說明書實施PCR擴(kuò)增反應(yīng)操作。試劑盒來自于北京博爾誠有限公司，熒光PCR型號為AB17500。感染陽性評價標(biāo)準(zhǔn)為熒光信號曲線呈S形，且CT指標(biāo)<36。

基因測序：標(biāo)本送第三方檢驗中心檢測。

觀察指標(biāo)：以基因測序作為金標(biāo)準(zhǔn)，比較細(xì)菌培養(yǎng)和熒光PCR法在篩查B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度、敏感度和特異性。

統(tǒng)計學(xué)分析：數(shù)據(jù)均使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS22.0分析，計數(shù)資料以%的形式描述，組間比較采用Xx檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

熒光PCR法和細(xì)菌培養(yǎng)檢出B族鏈球菌感染的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），前者陽性率25.0%（390例），后者陽性率13.3%（200例）;熒光PCR法檢出B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度、敏感度和特異性均明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)（P<0.05），見表1。

討論

孕婦B族鏈球菌感染后會誘發(fā)產(chǎn)褥感染，還會通過垂直傳播引起胎兒病原菌感染，導(dǎo)致早產(chǎn)，影響妊娠結(jié)局，甚至?xí)T發(fā)新生兒腦膜炎，嚴(yán)重威脅孕婦和新生兒的生命。研究發(fā)現(xiàn)，在孕婦B族鏈球菌感染早期采用有效的藥物治療則會明顯改善妊娠結(jié)局，降低胎兒病原菌感染率[3]。在臨床中，常規(guī)診斷B族鏈球菌感染的方法通常為細(xì)菌培養(yǎng)，但是經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)部分感染孕婦仍無法有效地檢出，從而延誤病情。在本研究中，熒光定量PCR法和細(xì)菌培養(yǎng)檢出B族鏈球菌感染的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;熒光定量PCR法檢出B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度、敏感度和特異性均明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)（P<0.05），提示熒光定量PCR法篩查B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度和敏感度處于較高水平。向燕群等[4]的文獻(xiàn)研究中表明，熒光定量PCR法可有效地檢出B族鏈球菌感染病例，這同本研究一致。同細(xì)菌培養(yǎng)法相比，熒光定量PCR法的檢測耗時偏低，節(jié)省了孕婦的等待時間，而且該方法操作便捷，無須檢驗人員進(jìn)行接種、培養(yǎng)和鑒別操作，簡化了流程，明顯提高了檢驗人員的工作效率和可重復(fù)性[5]。另外，借助于B族鏈球菌的特異性核酸序列并以熒光標(biāo)記和擴(kuò)增，可檢出微量病原菌，該方法中標(biāo)本的保存環(huán)境基本不會影響檢測結(jié)果，也能檢出已死亡的B族鏈球菌，因此其敏感度較高，從而使得感染孕婦能在早期進(jìn)行用藥干預(yù)，保證妊娠和分娩的安全性。

綜上所述，熒光定量PCR法診斷B族鏈球菌感染的準(zhǔn)確度和敏感度處于較高水平，可用于臨床孕婦的產(chǎn)前篩查中。

參考文獻(xiàn)

[1]謝雯，陳敏，譚繼權(quán).長沙地區(qū)圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌帶菌狀況分析及對妊娠結(jié)局的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2018，9（5）：590-592.

[2]李青，鄧家德，陳惠玲.B族溶血性鏈球菌孕期感染分離株的耐藥基因檢測[J].廣州醫(yī)藥，2010，41（2）：47-49.

[3]黃錦平.抗菌藥物干預(yù)治療孕婦生殖道B族鏈球菌感染對妊娠和新生兒結(jié)局的影響[J].抗感染藥學(xué)，2017，14（7）：1332-1334.

[4]向燕群，范漢恭，袁春雷.2種方法在孕婦產(chǎn)前B族鏈球菌感染檢測中的價值[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（18）：2612-2614.

[5]郭琦，楊啟文，胡靜，等.孕晚期陰道B族鏈球菌定植的兩種篩查方法比較[J]協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志，2018，9（3）：242-245.