熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應(yīng)用

李晶

[摘要]目的：探討熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應(yīng)用價值。方法：選取南陽市第一人民醫(yī)院收治的800例患者作為研究對象，其中淋球菌（NG）感染206例，沙眼衣原體（CT）感染358例，解脲支原體（UU）感染236例。使用熒光PCR檢測儀進(jìn)行檢測。結(jié)果：研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CT檢測，陽性例數(shù)為38例，陽性率為1 0.61%，NG陽性率為14.08%，陽性率最高，UU陽性檢測率為14.41%，僅次于NG。結(jié)論：采用熒光定量PCR對病原微生物進(jìn)行檢測，可以有效提高檢測的準(zhǔn)確度，值得推廣使用。

[關(guān)鍵詞]熒光定量PCR；病原微生物；淋球菌；解脲支原體

熒光定量PCR，是一種新的定量測驗(yàn)技術(shù)，這種檢測技術(shù)有效保留了常規(guī)PCR的優(yōu)勢，具有較高的特異性和靈敏性，而且還可以有效降低檢測的假陽性率。對此，本院對熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應(yīng)用價值進(jìn)行了研究，具體研究情況如下：

1資料與方法

1.1一般資料

選取南陽市第一人民醫(yī)院門診科、泌尿科以及皮膚科收治的患者800例作為研究對象，其中男性390例，女性410例，其中淋球菌（NG）感染206例，解脲支原體（UU）感染236例，沙眼衣原體（CT）感染358例。取這些患者的宮頸、尿道分泌物進(jìn)行檢測。

1.2檢測儀器及工具

在本研究中，使用的檢測儀器為美國生產(chǎn)的型號為BIO-RAD iCylcer的熒光PCR檢測儀，檢測中所使用的試劑盒為核酸擴(kuò)增熒光檢測試劑盒。

1.3檢測原理

在進(jìn)行檢測時，在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上，添加了熒光雙標(biāo)記探針的使用，在該探針上會標(biāo)記2個熒光基團(tuán)。將其中的一個熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的5'端，同時將另一個熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的3'端。通過這兩個標(biāo)記可以構(gòu)成一個完整的能量傳遞結(jié)構(gòu)。也就是說5'端熒光基團(tuán)所發(fā)出的熒光，能夠被另外一端的熒光基團(tuán)所吸收或抑制。在檢測中，無特異性PCR發(fā)生時，探針的熒光信號不會發(fā)生任何的變化。但是如果有特異性PCR擴(kuò)增發(fā)生時，探針會在PCR檢測過程中，Taq酶的5'到3'外切酶活性作用會將5探針信號切斷，從而導(dǎo)致切下的3'端熒光基團(tuán)抑制作用會消失，而切下的5'端熒光基團(tuán)信號會增長。探針的3'端羥基已被去除或封閉，不具有延伸能力。熒光信號會隨著PCR產(chǎn)物的增長而不斷增長。

1.4檢測方法

首先使凍存的細(xì)胞完全溶解，加入樣品處理液，以13000r/min將標(biāo)本進(jìn)行離心，10分鐘后使用RNA去除掉上清液，完成上述操作后，采用常規(guī)堿裂解法將CT、NG、UU-DNA提取出來。提取完成后，就可以對其進(jìn)行熒光PCR檢測了。首先將各反應(yīng)管放入熒光PCR檢測儀上，在不同條件下對其進(jìn)行擴(kuò)增，共進(jìn)行42次該循環(huán)。等到所有反應(yīng)都結(jié)束后，使用電腦對所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并計算出結(jié)果。每次檢驗(yàn)完成后均需要做陽性和陰性對照。

2結(jié)果

檢測完成后，嚴(yán)格按照試劑盒上的說明，對熒光定量PCR檢測的結(jié)果進(jìn)行分析，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CT檢測，陽性例數(shù)為38例，陽性率為10.61%，NG陽性率為14.08%，陽性率最高，UU陽性檢測率為14.41%，見表1。

3討論

病原微生物種類眾多，會對人的機(jī)體造成巨大影響，其中，淋球菌（NG）、解脲支原體（UU）、沙眼衣原體（CT）都是非常常見的病原微生物，患者一旦感染上這些病原微生物，會對患者的健康造成很大影響，因此，提高對病原微生物診斷的準(zhǔn)確性具有非常重要的臨床意義，可以為臨床的診斷和治療提供重要的參考作用。傳統(tǒng)對病原微生物的檢測主要是通過細(xì)菌培養(yǎng)、細(xì)菌涂片等方式進(jìn)行檢測，但是這些檢測方法的檢測率普遍較低，且所需周期較長，會影響患者的及時治療。

PCR檢測技術(shù)的應(yīng)用在一定程度上提高了檢測的準(zhǔn)確率，早期的PCR檢測技術(shù)雖然彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測方式的不足，但是還是存在假陽性較高等問題，無法有效發(fā)揮對臨床治療的指導(dǎo)作用。隨著PCR檢測技術(shù)的不斷發(fā)展完善，熒光定量PCR的檢測能力更強(qiáng)，靈敏性和特異性都較好，能夠正確指導(dǎo)臨床做出診斷，是臨床治療的重要參考，因此，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)其在臨床診治中的應(yīng)用。