高通量測序技術(shù)分析藍(lán)狐腸道菌群多樣性

陳雙雙 司華哲 穆琳琳 李光玉 劉晗璐

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長春130117)

藍(lán)狐(Alopexlagopus)，又名北極狐，屬于脊索動物門，哺乳綱，食肉目，犬科，北極狐屬[1]。藍(lán)狐作為毛皮動物在世界范圍內(nèi)被大量飼養(yǎng)，我國的養(yǎng)殖地主要集中于膠東半島、河北以及東北三省等地。藍(lán)狐為適應(yīng)寒冷的自然氣候條件，體內(nèi)常儲存大量脂肪，對高蛋白質(zhì)、高脂肪的動物性飼料有較高的利用率，并可較大范圍的利用動物性飼料成分，其中包括各種魚類、畜禽屠宰副產(chǎn)品(去骨的牛肉、羊肉、豬肉、兔肉、雞肉等)以及畜禽的肝臟(如兔肝、牛肝、羊肝、雞肝、鴨肝、鵝肝)等。目前，大多數(shù)研究集中于藍(lán)狐的繁殖育種、營養(yǎng)需要量、毛皮發(fā)育等研究方面[2-5]，鮮有關(guān)于藍(lán)狐腸道菌群組成和多樣性的研究。腸道微生物系統(tǒng)是動物本身最復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，腸道中大量微生物參與營養(yǎng)物質(zhì)的吸收、分布、代謝以及機體的免疫生理，腸道菌群的失調(diào)通常會導(dǎo)致動物機體功能紊亂[6-7]。因此，了解健康動物正常的腸道菌群分布，對維持腸道菌群平衡、保證動物健康有重要意義。作為肉食性單胃動物，狐的胃腸道微生物主要為大腸微生物[8]，其腸道中具體含有哪些微生物，以及這些微生物在消化生理中發(fā)揮的作用，仍不清楚。本試驗采用高通量測序技術(shù)對藍(lán)狐腸道菌群組成情況進行分析，研究藍(lán)狐腸道菌群多樣性，為進一步揭示藍(lán)狐腸道菌群對營養(yǎng)物質(zhì)的代謝利用的作用提供微生物學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2017年9月17號從河北省昌黎縣(東經(jīng)39.72°、北緯119.15°)選取8只健康的育成期(5～6月齡)雄性舍飼藍(lán)狐(F1～F8)，其精神狀態(tài)良好、采食均衡正常，生活環(huán)境干凈衛(wèi)生?，F(xiàn)場采集藍(lán)狐新鮮糞便時，等待藍(lán)狐排出糞便后立即用無菌分裝袋收集，防止落地被污染。采集藍(lán)狐新鮮糞便15 g分裝于5 mL的凍存管中(分裝于3個管，每管5 g)，放入液氮罐中帶回實驗室，備后續(xù)分析。藍(lán)狐飼糧為養(yǎng)殖場中日常飼糧，其組成及營養(yǎng)水平如表1所示。

表1 藍(lán)狐飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of the diet：VA 10 000 IU，VB120 mg，VB210 mg，VB610 mg，VB120.1 mg，VC 120 mg，VE 60 mg，VK31.6 mg，生物素 biotin 0.5 mg，葉酸 folic acid 1.0 mg，泛酸 pantothenic acid 20 mg，煙酸 nicotinic acid 40 mg，膽堿 choline 400 mg，Cu (as copper sulfate) 10 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 80 mg，Mn (as manganese sulfate) 15 mg，Zn (as zinc sulfate) 60 mg，I (as potassium iodide) 0.50 mg，Se (as sodium selenite) 0.20 mg。

2)代謝能為計算值，其余為實測值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.2 樣品處理

1.2.1 微生物總DNA的提取

基因組DNA的鑒定：提取的基因組DNA經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳(電壓120 V，電泳23 min，Marker為λⅢ DNA Maker)檢測，DNA產(chǎn)物在14 000 bp左右，并且DNA條帶亮度較高，無明顯降解、無雜質(zhì)，可進行下一步試驗[9]。將目的DNA送至北京諾禾致源科技股份有限公司，基于Illumina Miseq測序平臺，設(shè)備名稱為HiSeq PE250，測序長度為250 bp。

1.2.2 目的基因的擴增與測序

以樣品中提取的總DNA為模板，細(xì)菌選用16S rRNA V3/V4區(qū)合成特定引物，利用338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)引物進行PCR擴增。PCR擴增體系(50 μL)：上游引物(338F)1 μL，下游引物(806R)1 μL，DNA樣品1 μL，Taq酶25 μL，ddH2O 22 μL。PCR擴增條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃復(fù)性2 min，25個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。擴增產(chǎn)物4 ℃保存，經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.3 生物信息學(xué)分析

通過對原始數(shù)據(jù)進行拼接、過濾去雜得到有效信息，從而使信息結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。對有效信息進行聚類分析和物種分類分析，設(shè)定具有97%以上相似度的序列為1個操作分類單元(OTU)，并在各分類水平統(tǒng)計每個樣品的菌群組成。根據(jù)OTU聚類結(jié)果，進行菌群豐富度、Alpha多樣性計算，其中Ace和Chao1指數(shù)用來表示菌群的豐富度，Simpson和Shannon指數(shù)用來表示菌群的多樣性。在門和屬2個分類水平上統(tǒng)計樣品物種的豐度和多樣性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，數(shù)據(jù)用Excel 2013進行整理并用SAS 9.4軟件進行分析。

2 結(jié) 果

2.1 多樣性指數(shù)

如表2所示，8個樣本共得到654 716條序列，單個樣本序列范圍為57 002～95 638條，其中共得到569 930條有效序列(有效序列指tags，下文同)，單個樣本序列范圍為52 758～84 112條。對樣本進行聚類分析，在97%相似度下的OTU生物信息統(tǒng)計顯示，共得到4 071個OTU(樣本范圍為468～574)。豐富度指數(shù)：Ace指數(shù)平均值為559，范圍為480～699；Chao1指數(shù)平均值為595，范圍為465～1036。多樣性指數(shù)：Shannon指數(shù)平均值為5.27，范圍為4.05～5.80；Simpson指數(shù)平均值為0.936，范圍為0.847～0.957。每個樣本的具體參數(shù)見表2。

表2 樣本測序數(shù)據(jù)分析

利用mothur對97%相似度的OTU做稀釋曲線(圖1-A)，可知，當(dāng)測序數(shù)量超過40 000時，各樣本(F8除外)曲線逐漸趨于平緩，同時Shannon曲線(圖1-B)也趨于平坦。

圖1 稀釋曲線(A)和Shannon曲線(B)分析

2.2 門分類水平下菌群結(jié)構(gòu)

在門分類水平上分析，這些菌群在分類學(xué)上歸屬于16個門，其中厚壁菌門(Firmicutes)在藍(lán)狐腸道菌群中的所占比例最多，占62.97%；擬桿菌門(Bacteroidetes)為第二大優(yōu)勢菌門，所占比例為22.05%；隨后依次為放線菌門(Actinobacteria)，占8.89%；變形菌門(Proteobacteria)，占5.15%；梭桿菌門(Fusobacteria)，占0.88%。以上5個菌門為藍(lán)狐腸道菌群中的優(yōu)勢菌門，共占99.94%，具體門分類水平的分布見圖2。8只藍(lán)狐中F4與其他藍(lán)狐的腸道菌群相似性較低，F(xiàn)4腸道中Bacteroidetes所占比例最高，而其他藍(lán)狐腸道中Firmicutes為最優(yōu)勢菌門。

2.3 屬分類水平下菌群結(jié)構(gòu)

在屬分類水平上分析，這些菌群在分類學(xué)上歸屬于209個屬，其中有30個屬的相對豐度占總體的85.95%。這30個屬中鏈球菌屬(Streptococcus)所占比例最高，為11.75%；隨后比例較高的依次為乳桿菌屬(Lactobacillus)，占9.86%；普雷沃菌屬(Prevotella)，占9.28%；巨型球菌屬(Megasphaera)，占8.21%；柯林斯菌屬(Collinsella)，占7.27%；Blautia，占7.08%；擬桿菌屬(Bacteroides)，占5.64%；擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)，占5.50%；Peptoclostridium，占5.07%；巨單胞菌屬(Megamonas)，占3.55%。具體屬分類水平的相對豐度見圖3。

Firmicutes：厚壁菌門；Bacteroidetes：擬桿菌門；Actinobaeteria：放線菌門；Proteobacteria：變形菌門；Fusobacteria：梭桿菌門；Cyanobacteria：藍(lán)藻菌門；Verrucomicrobia：疣微菌門；Spirochaetes：螺旋體門；Tenericutes：柔壁菌門；Fibrobacteres：纖維桿菌門；Others：其他。

圖2基于UnweightedUnifrac距離的UPGMA聚類樹

Fig.2 UPGMA clustering tree based on Unweighted Unifrac distance

在屬水平上每只藍(lán)狐腸道菌群中排名靠前的10種菌屬所占比例見表3。F1腸道菌群中最優(yōu)勢菌屬為Collinsella，占17.45%；F2、F3、F4腸道菌群中最優(yōu)勢菌屬為Prevotella，分別占14.52%、13.06%、22.16%；F5、F7腸道菌群中最優(yōu)勢菌屬為Lactobacillus，分別占17.56%、21.55%；F6、F8腸道菌群中最優(yōu)勢菌屬為Streptococcus，分別占15.80%、25.72%。與其他藍(lán)狐相比，F(xiàn)8腸道菌群中Streptococcus、Lactobacillus、Megasphaera所占比例較高，3個菌屬共占71.00%。

3 討 論

3.1 多樣性指數(shù)分析

一般通過Alpha多樣性分析反映樣本的豐富度和多樣性。本試驗中，所有樣本測序覆蓋率(coverage)均在0.997以上，說明測序結(jié)果對藍(lán)狐糞便樣品中的細(xì)菌覆蓋率高，測序結(jié)果合適，可滿足腸道菌群多樣性的分析需求[10]。當(dāng)測序數(shù)量超過40 000時，各樣本(F8除外)曲線逐漸趨于平緩，表明該測序數(shù)據(jù)量合理，隨著數(shù)據(jù)量的增加幾乎不產(chǎn)生新的OTU[11]。同時，Shannon曲線也趨于平坦，表明測序數(shù)據(jù)量足夠大，從而能夠反映出樣品中絕大多數(shù)菌群[12]。Shannon指數(shù)越大則表示該樣本中微生物多樣性越豐富，由表2中Shannon指數(shù)數(shù)據(jù)可知，F(xiàn)8腸道中菌群多樣性較低。由圖1-A顯示，較其他個體而言，F(xiàn)8個體的稀釋曲線存在一定的坡度，可能是其取樣深度不夠，從而導(dǎo)致F8個體腸道菌群多樣性較低。從整體來看，藍(lán)狐腸道菌群中OTU平均值為509，Chao1指數(shù)平均值為595，Shannon指數(shù)平均值為5.27。范忠原等[13]研究發(fā)現(xiàn)，舍飼水貂腸道菌群中OTU為294，Chao1指數(shù)為350，Shannon指數(shù)為3.74。因此，與毛皮動物水貂相比，藍(lán)狐腸道菌群具有較高的豐度與多樣性。

Others：其他；Fusobacterium：梭桿菌屬;Roseburia：羅斯氏菌屬；Dialister：桿菌屬；Enterococcus：腸球菌屬；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Phascolarctobacterium：考拉桿菌屬；Anaerobiospirillum：厭氧螺菌屬；Bifidobacterium：雙歧桿菌屬；Succinivibrio：琥珀酸弧菌屬；Desulfovibrio：脫硫弧菌屬；Sutterella：薩特氏菌屬；Megamonas：巨單胞菌屬；Bacteroides：擬桿菌屬；Alloprevotella：擬普雷沃菌屬；Collinsella：柯林斯菌屬；Prevotella：普雷沃菌屬；Megasphaera：巨型球菌屬；Lactobacillus：乳桿菌屬；Streptococcus：鏈球菌屬。

圖3 藍(lán)狐腸道菌群屬分類的相對豐度

續(xù)表3項目 ItemsF1F2F3F4F5F6F7F8平均值Mean巨單胞菌屬Megamonas5.351.553.311.351.745.617.112.373.55±0.78總比例Total proportion74.0672.6168.8672.7469.7067.4976.4283.8977.22±1.84

3.2 門分類水平下菌群結(jié)構(gòu)分析

從門分類水平上看，藍(lán)狐腸道菌群中主要優(yōu)勢菌門為Firmicutes和Bacteroidetes。8個樣本中F4腸道中Bacteroidetes所占比例最高，而其他藍(lán)狐腸道中Firmicutes為最優(yōu)勢菌門。研究表明，腸道中的Firmicutes主要是對碳水化合物及蛋白質(zhì)起水解作用，Bacteroidetes則是對類固醇、膽汁酸及多糖起代謝作用，從而促進多糖的吸收以及蛋白質(zhì)的合成[14-15]。腸道內(nèi)Firmicutes與Bacteroidetes的比例對動物的肥胖程度有影響。Turnbaugh等[16]發(fā)現(xiàn)肥胖小鼠的腸道微生物中Firmicutes細(xì)菌的豐富度增加，Bacteroidetes細(xì)菌的豐富度降低，并發(fā)現(xiàn)飲食過程中對能量攝入量增多。飲食的改變會引起動物腸道菌群的改變，當(dāng)動物飲食從低脂肪、高纖維素的飲食轉(zhuǎn)變?yōu)楦咧?、高糖的飲食時，腸道菌群中Bacteroidetes細(xì)菌所占比例顯著下降[17]，從而導(dǎo)致肥胖增加。因此，F(xiàn)4腸道中菌群可能對高脂、高糖的代謝作用較強，但本試驗未對試驗動物的體重水平進行觀察。除此之外，動物腸道菌群的組成和數(shù)量受動物的年齡、性別、生活環(huán)境、飼糧組成、生理狀態(tài)、遺傳因素[18-20]等的影響。8只藍(lán)狐在生活環(huán)境和飼糧組成相同的情況下，F(xiàn)4和F8個體的腸道菌群組成與其他個體的腸道菌群組成存在差異性，其原因可能與動物個體的生理狀態(tài)和遺傳因素有關(guān)系。因此，相同環(huán)境下的不同個體間腸道菌群組成也存在一定的差異性。

研究發(fā)現(xiàn)，犬科動物腸道菌群在種類及數(shù)量方面存在較大差異。生活在野生環(huán)境下的健康狼(Canislupus)的糞便中最豐富的菌門是Firmicutes(60.0%)，其次是Bacteroidetes(16.9%)、Proteobacteria(9.2%)、Fusobacteria(9.2%)和Actinobacteria(4.6%)[21]；豺(Cuonalpinus)的腸道菌群中較豐富的5個菌門依次為Firmicutes(20.97%～44.01%)、Bacteroidetes(21.63%～38.97%)、Proteobacteria(9.33%～17.60%)、Fusobacteria(9.11%～17.90%)和Actinobacteria(1.22%～2.87%)[22]；家犬的腸道菌群中最豐富的菌門為Firmicutes(47.7%)，其次為Proteobacteria(23.3%)、Fusobacteria(16.6%)和Bacteroidetes(12.4%)[23]。寵物犬的腸道菌群中最豐富的菌門為Firmicutes(64.17%)，其次是Bacteroidetes(19.89%)、Fusobacteria(13.58%)、Actinobacteria(1.5%)和Proteobacteria(0.86%)[24]。與其他犬科動物相比，藍(lán)狐腸道菌群中Actinobacteria所占比例較高，該菌門中大部分細(xì)菌為紅蝽菌科(Coriobacteriaceae)和雙歧桿菌科(Bifidobacteriaceae)(共占Actinobacteria的99.99%)，而在狼和豺腸道菌群中Bifidobacteriaceae的數(shù)量很少[21-22]。藍(lán)狐腸道菌群Bifidobacteriaceae中僅有雙歧桿菌(bifidobacteria)。研究發(fā)現(xiàn)人類從出生就開始攜帶雙歧桿菌，但隨著年齡的增加雙歧桿菌的數(shù)量逐漸減少，并且發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌的主要產(chǎn)物為乳酸、乙酸等，其可調(diào)節(jié)腸道pH，抑制有害菌增殖[25]；同時，研究發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌在能夠維持機體腸道健康和減緩腸道老化方面具有重要作用[26]。本試驗中育成期藍(lán)狐年齡(5～6月齡)較小，因此其腸道中Bifidobacteria數(shù)量較多。與其他動物相比，藍(lán)狐腸道菌群中Actinobacteria所占比例較高。研究發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)激情況下Coriobacteriaceae細(xì)菌會明顯增加，該科細(xì)菌的大量存在易引起動物焦慮、緊張等情緒[27]。研究表明，Coriobacteriaceae還與高膽固醇血癥[28]、肥胖、2型糖尿病[29]等密切相關(guān)。與狼和藍(lán)狐比較，犬的腸道菌群中Fusobacteria所占比例較高[21-24,30]，Bacteroidetes所占比例較低。根據(jù)《伯吉氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊》，可把Bacteroidetes分為4個菌綱：擬桿菌綱(Bacteroidia)、黃桿菌綱(Flavobacteria)、鞘脂桿菌綱(Sphingobacteria)、纖維黏網(wǎng)菌綱(Cytophagia)[31]。藍(lán)狐腸道菌群中Bacteroidia在Bacteroidetes中所占比例為99.77%。家犬腸道菌群中Bacteroidetes比例較低的主要原因可能在于家犬的飲食受到人為干預(yù)，飲食以狗糧為主，其飼糧中除蛋白質(zhì)以外碳水化合物成分增加，與其他犬科動物相比飲食中的脂肪含量下降。將本試驗結(jié)果與其他犬科動物腸道菌群結(jié)構(gòu)進行比較，發(fā)現(xiàn)藍(lán)狐腸道菌群多樣性特征與其他犬科動物基本相同，僅在Fusobacteria、Actinobacteria的數(shù)量上存在較大差別，但藍(lán)狐腸道菌群差異對宿主的生活習(xí)性是否存在影響還需進一步深入研究。

水貂作為我國飼養(yǎng)的主要毛皮動物之一，在國內(nèi)被大量養(yǎng)殖，研究發(fā)現(xiàn)其腸道菌群中較豐富的5個菌門為Firmicutes(60.0%)、Bacteroidetes(16.2%)、Fusobacteria(11.5%)、Actinobacteria(5.9%)和Proteobacteria(5.3%)[13]。與藍(lán)狐腸道菌群相比，除Fusobacteria在水貂腸道菌群中所占比例較高外，其他菌門種類與藍(lán)狐相似。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中纖維含量的增加會導(dǎo)致Fusobacteria細(xì)菌數(shù)量減少[32]。水貂為肉食動物，與藍(lán)狐飼糧相比，水貂飼糧中纖維含量較低可能導(dǎo)致水貂腸道細(xì)菌中Fusobacteria數(shù)量增加。研究發(fā)現(xiàn)，馬作為草食動物，其腸道菌群中沒有發(fā)現(xiàn)Fusobacteria細(xì)菌的存在[33]。同時，研究發(fā)現(xiàn)人腸道菌群中Fusobacteria所占比例較低，不足1%[34]。因此，F(xiàn)usobacteria細(xì)菌可能受飼糧中植物性飼料組成的影響。

3.3 屬分類水平下菌群結(jié)構(gòu)分析

從屬分類水平上看，藍(lán)狐腸道菌群中最大的優(yōu)勢菌屬為Streptococcus，與舍飼水貂的研究結(jié)果一致[13]。Streptococcus在動物腸道中能夠發(fā)酵簡單的糖類、分解蛋白質(zhì)，其與宿主體內(nèi)能量代謝緊密相關(guān)[35]。Lactobacillus是藍(lán)狐腸道菌群中的第二大菌屬。Lactobacillus作為益生菌，近年來受到越來越多的關(guān)注。Lactobacillus可與其他益生菌相互作用，治療腸易激綜合癥(IBS)等疾病[36]，其在動物腸道中能夠發(fā)酵分解碳水化合物，產(chǎn)生乳酸、丁酸等，使腸道內(nèi)pH下降，抑制有害菌的生長；Lactobacillus還可以產(chǎn)生過氧化氫，抑制腸道中念珠菌等真菌的毒性和生長[37]；同時，Lactobacillus還可以激活免疫細(xì)胞，破壞機體腸道中的病原微生物，從而提高機體的免疫力[38]。Streptococcus和Lactobacillus同屬于Firmicutes中的乳桿菌目(Lactobacillales)，該目在藍(lán)狐腸道菌群中所占比例為22.5%。Prevotella為Bacteroidetes中的擬桿菌目(Bacteroidales)，具有促進蛋白質(zhì)分解的作用，其在瘤胃中還能協(xié)同其他微生物分解纖維素，提高纖維素的降解能力[39]。研究發(fā)現(xiàn)，非洲布基納法索(Burkina Faso)兒童腸道中普氏菌屬占53%，而同齡的歐洲兒童卻很少[40]，飲食習(xí)慣與腸道菌群的組成密切相關(guān)，以蛋白質(zhì)和動物性脂肪為主要食物的西方人腸道菌群多以Bacteroides為主，而以碳水化合物為主要食物的非洲人，腸道菌群則主要以Prevotella為主[41]。Collinsella屬于Actinobacteria中的Coriobacteriales，研究發(fā)現(xiàn)該屬中的細(xì)菌能夠發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生甲酸、乳酸鹽、乙醇等，并與體重、體重指數(shù)(BMI)呈負(fù)相關(guān)[42]。Blautia屬于Firmicutes，該菌屬能將腸道中的氣體轉(zhuǎn)化成乙酸，從而可清除腸道中的氣體[10]。Blautia屬于毛螺旋菌科(Lachnospiraceae)，該菌科在瘤胃動物中主要具有降解半纖維素的能力[43]，而這些細(xì)菌同樣大量存在于藍(lán)狐腸道中，但該類細(xì)菌在藍(lán)狐腸道中的作用仍有待進一步研究確定。因此，藍(lán)狐腸道菌群中包括能夠促進類固醇、膽汁酸及多糖代謝的Bacteroidetes，能夠促進蛋白質(zhì)分解的Streptococcus，能夠發(fā)酵分解碳水化合物、抑制有害菌的生長的Lactobacillus和Collinsella，以及能夠促進纖維降解的Prevotella和Blautia等，從而組成豐富多樣化的腸道菌群。

藍(lán)狐為肉食性動物，但人們?yōu)闇p少藍(lán)狐的養(yǎng)殖成本，在養(yǎng)殖過程中對藍(lán)狐飼糧進行人為干預(yù)，使藍(lán)狐飼糧的動物性蛋白質(zhì)在飼糧中的比例降低，而植物性蛋白質(zhì)在飼糧中的比例增加。目前并未發(fā)現(xiàn)對野生藍(lán)狐和以動物性蛋白質(zhì)為主的藍(lán)狐腸道菌群的報道，本試驗藍(lán)狐飼糧以植物性蛋白質(zhì)為主，因此其腸道菌群不能代表以肉食(野生藍(lán)狐或者以動物性蛋白質(zhì)為主的藍(lán)狐)為主的藍(lán)狐的腸道菌群，以植物性蛋白質(zhì)為主的藍(lán)狐腸道菌群和以肉食為主的藍(lán)狐腸道菌群差異性無從得知。但在野生犬科動物(狼、沙狐、赤狐、烏蘇里貉、豺)腸道菌群中并未發(fā)現(xiàn)纖維素降解菌Prevotella的存在[8]，而在本試驗飼糧條件下藍(lán)狐腸道菌群中Prevotella為優(yōu)勢菌屬，藍(lán)狐腸道菌群中Prevotella增加的原因可能是其飼糧組成的改變導(dǎo)致其腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變。因此，后續(xù)試驗需對野生藍(lán)狐和以動物性蛋白質(zhì)為主的藍(lán)狐的腸道菌群組成進行研究，并對以植物性蛋白質(zhì)為主和以肉食為主的藍(lán)狐腸道菌群組成的差異性進行研究。

屬水平上個體間差異性分析顯示，F(xiàn)8腸道菌群中Streptococcus、Lactobacillus、Megasphaera所占比例較高，其他菌屬所占比例較低，這種現(xiàn)象可能是樣本的測序取樣深度不夠所致。除此之外，動物腸道菌群組成和多樣性還受到動物的遺傳因素的影響[20]，因此，相同環(huán)境下的不同個體間腸道菌群組成和多樣性也存在一定的差異性。這些優(yōu)勢菌屬與營養(yǎng)物質(zhì)代謝存在密切的聯(lián)系，在動物腸道中主要起到分解蛋白質(zhì)以及提高纖維素的降解能力的作用，但對于這種聯(lián)系的機理仍需繼續(xù)開展大量的研究。

4 結(jié) 論

本試驗飼糧條件下的8只藍(lán)狐腸道菌群分布于16個菌門，主要為Firmicutes(62.97%)、Bacteroidetes(22.05%)、Actinobacteria(8.89%)、Proteobacteria(5.15%)和Fusobacteria(0.88%)，占菌門總量的99.94%；所有菌門分布于209個菌屬，組成豐富多樣化的腸道菌群，在屬的分類水平上Streptococcus所占比例最高，為11.75%，其次為Lactobacillus，占9.86%。