不同實(shí)驗(yàn)室間單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)消化條件與 酶水解物能值測(cè)定再現(xiàn)性的研究

高慶濤 張 虎 趙 峰* 王鈺明 杜青之 鄧耀輝

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193； 2.湖南中本智能科技發(fā)展有限公司，長(zhǎng)沙410013)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 6379.1—2004規(guī)定測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度包括重復(fù)性和再現(xiàn)性2個(gè)方面[1]。在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作員使用相同的設(shè)備和測(cè)試方法進(jìn)行獨(dú)立檢測(cè)的精密度稱為重復(fù)性；而在不同的實(shí)驗(yàn)室，由不同的操作員使用不同的設(shè)備，按相同的方法進(jìn)行獨(dú)立檢測(cè)的精密度稱為再現(xiàn)性，它們是確定方法是否可行的重要依據(jù)。Bourdillon等[2]建立的歐洲肉雞飼糧代謝能值測(cè)定方法中，4個(gè)飼糧的氮校正表觀代謝能(AMEn)值在7個(gè)實(shí)驗(yàn)室間的平均變異系數(shù)為2.92%。Carabao等[3]采用Boisen等[4]的方法體外模擬家兔的消化過(guò)程，獲得8個(gè)樣品4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間干物質(zhì)消化率(DMD)的平均變異系數(shù)為3.24%。這表明，實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定飼料養(yǎng)分生物學(xué)效價(jià)的再現(xiàn)性變異相對(duì)較大。對(duì)于動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果的重復(fù)性，李輝等[5]采用第1代單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)(SDS-1)在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)鴨飼料酶水解物能值(EHGE)的批內(nèi)與批間變異系數(shù)均不超過(guò)1.40%。趙峰等[6]采用第2代單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)(SDS-2)測(cè)定4種雞飼料原料EHGE的批內(nèi)與批間變異系數(shù)均不高于1.64%。由此可見(jiàn)，SDS-2重復(fù)性是滿意的。然而，在不同實(shí)驗(yàn)室間，試驗(yàn)環(huán)境條件并非完全一致，其測(cè)試結(jié)果的再現(xiàn)性需要進(jìn)一步佐證。為此，本研究通過(guò)比較4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間SDS-2模擬豬消化過(guò)程中的緩沖液流速、消化液流速、清洗液流速和開(kāi)機(jī)后溫度、混合頻率變化曲線等消化條件以及EHGE測(cè)定的再現(xiàn)性，探討SDS-2在不同實(shí)驗(yàn)室間測(cè)試結(jié)果的再現(xiàn)性能否達(dá)到定量分析的要求。

1 材料與方法

1.1 飼料原料

采集玉米、大豆粕各2.5 kg，用萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎后過(guò)60目方形篩孔。樣品采用抽真空充氮避光包裝，普通條件運(yùn)輸至各實(shí)驗(yàn)室，并于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)-20 ℃保存?zhèn)溆?。玉米、大豆粕的概略養(yǎng)分與總能值見(jiàn)表1。

表1 玉米、大豆粕的概略養(yǎng)分與總能值(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

所有實(shí)驗(yàn)室SDS-2均按照生長(zhǎng)豬仿生消化過(guò)程的消化參數(shù)設(shè)置[7]，且保持一致。根據(jù)SDS-2的設(shè)計(jì)原理[8-9]，對(duì)實(shí)驗(yàn)室間儀器內(nèi)2組仿生消化管路的緩沖液流速、清洗液流速、消化液流速的差異采用嵌套設(shè)計(jì)，其中一級(jí)處理因素為實(shí)驗(yàn)室，共設(shè)4個(gè)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室1臺(tái)SDS-2，二級(jí)處理因素為SDS-2內(nèi)2個(gè)仿生消化組，每個(gè)處理進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定。對(duì)SDS-2酶促反應(yīng)室、緩沖液控溫室、消化液儲(chǔ)存室的溫度通過(guò)溫度傳感器檢測(cè)，混合頻率通過(guò)電磁傳感器測(cè)定。實(shí)驗(yàn)室間飼料的DMD和EHGE的差異，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1根消化管。

1.3 仿生消化中消化條件的測(cè)定

緩沖液流速的測(cè)定：在SDS-2的1號(hào)蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速設(shè)置為60 r/min時(shí)，泵轉(zhuǎn)動(dòng)2 min后通過(guò)量筒計(jì)量第1個(gè)和第2個(gè)仿生消化組管路泵入去離子水的體積，每組重復(fù)測(cè)定3次。

清洗液流速的測(cè)定：在SDS-2的2號(hào)蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速設(shè)置為180 r/min時(shí)，泵轉(zhuǎn)動(dòng)2 min后通過(guò)量筒計(jì)量第1個(gè)和第2個(gè)仿生消化組管路泵入去離子水的體積，每組重復(fù)測(cè)定3次。

消化液流速的測(cè)定：1)模擬小腸液注入流速，用移液器往1～10號(hào)加液管中加入2 mL去離子水，開(kāi)啟3號(hào)蠕動(dòng)泵，用秒表記錄液體完全泵入模擬消化器的時(shí)間，重復(fù)測(cè)定3次。2)模擬大腸液注入流速，用移液器往11～20號(hào)加液管中加入2 mL去離子水，開(kāi)啟4號(hào)蠕動(dòng)泵，用秒表記錄液體完全泵入模擬消化器的時(shí)間，重復(fù)測(cè)定3次。

溫度與混合頻率的監(jiān)測(cè)：由溫度傳感器、電磁傳感器通過(guò)SDS-2控制軟件采集仿生消化過(guò)程中酶促反應(yīng)室、緩沖液控溫室、消化液儲(chǔ)存室的溫度變化曲線及搖床混合頻率的變化曲線。

1.4 飼料EHGE的測(cè)定

豬模擬消化液試劑盒由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，采用低溫運(yùn)輸。實(shí)驗(yàn)室4 ℃保存?zhèn)溆谩ＤM消化液消化酶活性及仿生消化測(cè)定飼料DMD和EHGE的方法參考《單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)操作手冊(cè)》(第2版)[7]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)原理，用SAS 9.0的MEANS模塊對(duì)基本統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行分析，根據(jù)嵌套設(shè)計(jì)原理，用ANOVA模塊對(duì)流速進(jìn)行方差分析。用GLM模塊對(duì)各處理下飼料原料的DMD和EHGE進(jìn)行方差分析，平均值通過(guò)Duncan氏法進(jìn)行多重比較；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)及總變異系數(shù)參照蔣紅衛(wèi)等[10]方法計(jì)算。數(shù)據(jù)計(jì)算公式及統(tǒng)計(jì)模型如下：

嵌套設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)模型為：

Yijk=μ+Li+B(L)ij+εijk。

單因素方差分析統(tǒng)計(jì)模型為：

Yij=μ+Li+εij。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同實(shí)驗(yàn)室間SDS-2消化條件實(shí)測(cè)值的再現(xiàn)性

由表2可見(jiàn)，在SDS-2控制參數(shù)的測(cè)定中，實(shí)驗(yàn)室間胃、小腸、大腸緩沖液流速以及清洗液流速無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但仿生消化組間的胃、小腸、大腸緩沖液流速及清洗液流速有顯著性差異(P<0.01)。其中實(shí)驗(yàn)室2、3和4在2個(gè)仿生消化組的胃緩沖液流速上有顯著性差異(P<0.05)，相差16～18 mL/min；實(shí)驗(yàn)室3和4在2個(gè)仿生消化組的小腸和大腸緩沖液流速上有顯著性差異(P<0.05)，相差12～18 mL/min；實(shí)驗(yàn)室1、2和4在2個(gè)仿生消化組的清洗液流速上有顯著差異(P<0.05)，相差3～35 mL/min。實(shí)驗(yàn)室間小腸和大腸消化液流速有顯著性差異(P<0.05)，其中實(shí)驗(yàn)室1和4的小腸和大腸消化液流速均顯著高于實(shí)驗(yàn)室2和3(P<0.05)。2個(gè)仿生消化組間的小腸消化液流速有顯著性差異(P<0.05)，而大腸消化液流速無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

4個(gè)實(shí)驗(yàn)室SDS-2開(kāi)機(jī)后仿生消化的混合頻率及酶促反應(yīng)室、緩沖液控溫室、消化液儲(chǔ)存室溫度的變化曲線如圖1。由圖1-A可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)室3的初始混合頻率最低(79 r/min)，實(shí)驗(yàn)室1的初始混合頻率最高(135 r/min)，實(shí)驗(yàn)室2和4的初始混合頻率居中(平均為108 r/min)；開(kāi)機(jī)6 min以后，4個(gè)實(shí)驗(yàn)室的混合頻率均能達(dá)到預(yù)設(shè)的180 r/min，并維持這一混合頻率。由圖1-B可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)室3的緩沖液控溫室初始溫度最低(20.9 ℃)，實(shí)驗(yàn)室1的緩沖液控溫室初始溫度最高(39.1 ℃)，實(shí)驗(yàn)室2和4的緩沖液控溫室初始溫度居中(28.0～29.1 ℃)；開(kāi)機(jī)60 min后，4個(gè)實(shí)驗(yàn)室的緩沖液控溫室溫度均趨于設(shè)定值(39.0 ℃)。由圖1-C可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)室3的酶促反應(yīng)室初始溫度最低(19.0 ℃)，實(shí)驗(yàn)室1的酶促反應(yīng)室初始溫度最高(38.1 ℃)，實(shí)驗(yàn)室2和4的酶促反應(yīng)室初始溫度居中(28.8～29.8 ℃)；開(kāi)機(jī)后24～36 min，4個(gè)實(shí)驗(yàn)室的酶促反應(yīng)室的溫度均趨于設(shè)定值(39.0 ℃)。實(shí)驗(yàn)室3在開(kāi)機(jī)后42～48 min因酶促反應(yīng)室的操作門(mén)打開(kāi)溫度從39.0 ℃急劇下降至31.0 ℃，關(guān)閉操作門(mén)后在開(kāi)機(jī)60 min后再次趨于設(shè)定值。由圖1-D可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)室1的消化液儲(chǔ)存室初始溫度最低(8.9 ℃)，實(shí)驗(yàn)室2和4的消化液儲(chǔ)存室初始溫度最高(28.2～29.6 ℃)，實(shí)驗(yàn)室3的消化液儲(chǔ)存室初始溫度居中(17.9 ℃)，開(kāi)機(jī)12 min后，4個(gè)實(shí)驗(yàn)室的消化液儲(chǔ)存室溫度在3.9～11.4 ℃內(nèi)變化。

表2 4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間SDS-2消化條件實(shí)測(cè)值的差異

相同項(xiàng)目同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。表3同。

In the same item and column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as
Table 3.

2.2 實(shí)驗(yàn)室間SDS-2測(cè)定飼料DMD和EHGE的再現(xiàn)性

由表3可見(jiàn)，在玉米的仿生消化中，4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間的DMD和EHGE均沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)，分別介于78.03%～78.69%和15.43～15.63 MJ/kg。玉米DMD的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)及總變異系數(shù)均低于1.23%。玉米EHGE的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)及總變異系數(shù)均低于0.99%。

在大豆粕的仿生消化中，4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間的DMD和EHGE均有顯著性差異(P<0.01)，分別介于58.36%～61.58%和13.14～13.62 MJ/kg。大豆粕DMD的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)及總變異系數(shù)分別為1.30%、2.23%和2.52%。大豆粕EHGE的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)及總變異系數(shù)分別為0.89%、1.43%和1.64%。

3 討 論

3.1 SDS-2消化條件的控制及變異因素

在體外模擬消化中，消化條件將直接影響模擬消化的程度及其與體內(nèi)消化的相關(guān)性[11]。然而，在傳統(tǒng)的以三角瓶為反應(yīng)器的模擬消化液中，不同研究者在同種動(dòng)物體外消化條件的設(shè)置上并不統(tǒng)一[12]。即使是自動(dòng)化程度高的體外消化系統(tǒng)在使用上也鮮見(jiàn)關(guān)于設(shè)定消化條件與實(shí)際消化條件是否吻合方面的報(bào)道[13]。本試驗(yàn)中，所有實(shí)驗(yàn)室的SDS-2在消化條件參數(shù)的設(shè)置上是一致的，但仿生消化實(shí)測(cè)的消化條件與設(shè)置的消化條件的接近程度受參與控制過(guò)程的電器元件自身控制精度的影響。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 6379.1—2004[1]關(guān)于測(cè)定再現(xiàn)性的定義，不同實(shí)驗(yàn)室間的SDS-2在設(shè)置的消化條件參數(shù)一致的前提下，仿生消化實(shí)測(cè)的消化條件上也是有變異的，從而影響到再現(xiàn)性的程度。

圖1 4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間SDS-2消化條件實(shí)測(cè)值的變化曲線Fig.1 Curve of determined values of digestion condition of SDS-2 among 4 laboratories

從SDS-2的設(shè)計(jì)原理看，同一臺(tái)SDS-2的2組仿生消化組中，緩沖液、模擬小腸液及模擬大腸液泵入模擬消化器分別由蠕動(dòng)泵1、3、4提供動(dòng)力，每次清洗需要的去離子水由2號(hào)蠕動(dòng)泵定量泵取[7](表4)。2組仿生消化組都是通過(guò)同軸同步的雙泵頭為溶液的泵入提供動(dòng)力，因此，脈沖流量主要受泵管磨損程度及管路阻力的影響。本研究組前期試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)新泵管裝入泵頭(6滾輪)在60 r/min下運(yùn)行180 h后，流速?gòu)?60 mL/min降至140 mL/min，并趨于穩(wěn)定。這一現(xiàn)象與蠕動(dòng)泵是通過(guò)泵頭滾輪脈沖擠壓泵管提供泵入動(dòng)力的原理有關(guān)。新泵管擠壓空間較大，脈沖流量也相對(duì)較大；當(dāng)泵管經(jīng)泵頭擠壓一段時(shí)間后，空間變小并趨于穩(wěn)定，因此脈沖流量也相應(yīng)地變小并趨于穩(wěn)定。此外，進(jìn)入模擬消化器循環(huán)的胃、小腸、大腸緩沖液是由3組(每組2個(gè))電磁閥的開(kāi)關(guān)來(lái)控制的，管道的長(zhǎng)短與電磁閥觸點(diǎn)擠壓會(huì)影響到液體流動(dòng)的阻力。本試驗(yàn)中，緩沖液的流速在130～156 mL/min間變化，實(shí)驗(yàn)室間在緩沖液的平均流速上無(wú)顯著差異，而在同一臺(tái)儀器的2組仿生消化組間有顯著差異。這表明，實(shí)驗(yàn)室間SDS-2在緩沖液流速上總體一致，但在2組仿生消化組間存在差異。從單胃動(dòng)物仿生消化的原理看，飼料與消化液在透析袋內(nèi)，緩沖液在透析袋外通過(guò)蠕動(dòng)泵泵入循環(huán)，當(dāng)緩沖液循環(huán)速度大大超過(guò)透析袋內(nèi)外物質(zhì)交換的速度時(shí)，緩沖液流速的差異將不會(huì)導(dǎo)致透析袋內(nèi)物質(zhì)帶走及消化產(chǎn)物對(duì)仿生消化抑制程度的差異，同時(shí)由于上樣量與緩沖液的比例為5～10 g∶1 000 mL，緩沖液流速的差異不會(huì)引起緩沖液中水解產(chǎn)物濃度的差異。在本試驗(yàn)的SDS-2中，緩沖液7～8 min循環(huán)1次，2個(gè)仿生消化組緩沖液流速的差異約需要50 min才引起緩沖液循環(huán)相差1次，而透析袋內(nèi)外物質(zhì)交換的速度約40 min。因此，本試驗(yàn)條件下緩沖液流速的差異將不會(huì)導(dǎo)致消化率的差異。在消化液流速中，實(shí)驗(yàn)室間存在顯著差異。根據(jù)單胃動(dòng)物仿生消化的原理，每根模擬消化器泵入的模擬小腸消化液、模擬大腸消化液均為2 mL，為了把所有消化液完全泵入模擬消化器中，對(duì)10通道的蠕動(dòng)泵(3、4號(hào))，以通道的最低流速作為消化液泵入速度，從而保證2 mL消化液能完全泵入模擬消化器，從而消除流速差異對(duì)仿生消化的影響。仿生消化后，清洗水解產(chǎn)物所用去離子水的體積與上樣量比例為300 mL：1～2 g，累計(jì)清洗4次。若同一臺(tái)SDS-2中2個(gè)仿生消化組的清洗液流速相差40 mL/min，則泵取1 500 mL去離子水后體積相差150 mL以內(nèi)，折算到每根消化管相差30 mL。按照每根消化管上樣量2 g，DMD為75%計(jì)算，則

共計(jì)通過(guò)清洗液帶出的物質(zhì)為1.5 g。由于采用逐級(jí)清洗，則理論上2組仿生消化組未清洗出的消化物質(zhì)量相差量為：1.5×(20/350)4-1.5×(20/320)4<0.000 1 g。由此可見(jiàn)，在清洗液總體積相對(duì)樣品量大很多時(shí)，通過(guò)4次逐級(jí)清洗后，即使清洗液泵入體積每次相差10%，但未清洗出物質(zhì)的差異可以忽略不計(jì)。李輝等[5]的試驗(yàn)結(jié)果證明了同一臺(tái)SDS-2中，2個(gè)仿生消化組對(duì)同一樣品的消化率無(wú)顯著性差異，這表明SDS-2在當(dāng)前設(shè)計(jì)及電器元件條件下的溶液流速變異不會(huì)引起EHGE測(cè)定值的差異。

表3 4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間玉米和大豆粕DMD和EHGE測(cè)定值的差異

表4 SDS-2溶液泵入所用蠕動(dòng)泵的參數(shù)

實(shí)驗(yàn)室間SDS-2的初始混合頻率有所差異，這是由于電機(jī)的實(shí)際電容量有所差異，導(dǎo)致電機(jī)加電啟動(dòng)時(shí)轉(zhuǎn)速不同。加電運(yùn)行6 min后，各實(shí)驗(yàn)室的混合頻率能達(dá)到設(shè)定要求。實(shí)驗(yàn)室間酶促反應(yīng)室、緩沖液控溫室及消化液儲(chǔ)存室的初始溫度相差較大，除實(shí)驗(yàn)室1屬于SDS-2剛運(yùn)行1個(gè)消化周期，緊接著開(kāi)展本試驗(yàn)外，其他3個(gè)實(shí)驗(yàn)室都是SDS-2未經(jīng)開(kāi)機(jī)運(yùn)行開(kāi)展的本試驗(yàn)。因此，實(shí)驗(yàn)室1在酶促反應(yīng)室、緩沖液控溫室及消化液儲(chǔ)存室都與設(shè)定參數(shù)很接近。而其他3個(gè)實(shí)驗(yàn)室的初始溫度條件都接近自身的實(shí)驗(yàn)室溫度條件。緩沖液控溫室達(dá)到設(shè)定溫度所需要的時(shí)間比酶促反應(yīng)室及消化液儲(chǔ)存室達(dá)到設(shè)定溫度的時(shí)間長(zhǎng)，這是因?yàn)樗臒崛萘勘瓤諝獾臒崛萘看?。雖然各實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度相差較大，但經(jīng)過(guò)60 min運(yùn)行后，溫度條件都能達(dá)到設(shè)定要求。因此，SDS-2的開(kāi)機(jī)預(yù)熱時(shí)間設(shè)為60 min，可以排除實(shí)驗(yàn)室間環(huán)境溫度對(duì)仿生消化的影響。

3.2 SDS-2測(cè)定飼料原料DMD和EHGE的再現(xiàn)性

在仿生消化方法中，盡管不同實(shí)驗(yàn)室間的模擬消化參數(shù)、消化過(guò)程的控制都一致，且最大限度地減少了人為操作引起的干擾，但在實(shí)際測(cè)定中不同實(shí)驗(yàn)室間在試驗(yàn)用水規(guī)格、氧彈計(jì)測(cè)定總能值、操作人員熟練程度等方面均有差異。在同一實(shí)驗(yàn)室條件下，趙峰等[6]的試驗(yàn)結(jié)果表明，雞仿生消化法測(cè)定玉米、小麥、棉籽粕的DMD和EHGE的批內(nèi)、批間變異系數(shù)及總變異系數(shù)均不超過(guò)1.00%。Carabao等[3]采用三角瓶體外模擬消化法在4個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定兔飼糧DMD的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)為1.73%，實(shí)驗(yàn)室間的變異系數(shù)為3.24%。Bourdillon等[2]測(cè)定歐洲7個(gè)實(shí)驗(yàn)室間雞飼糧的干物質(zhì)含量、總能、氮含量及雞表觀代謝能的變異系數(shù)分別為1.27%、1.29%、4.39%和2.92%。Getachew等[14]采用產(chǎn)氣法測(cè)定7個(gè)實(shí)驗(yàn)室間24 h產(chǎn)氣量的變異系數(shù)為7.88%。本試驗(yàn)仿生消化法測(cè)定玉米的DMD、EHGE的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)均在1.23%以內(nèi)，且實(shí)驗(yàn)室間無(wú)顯著性差異。大豆粕的DMD、EHGE的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、實(shí)驗(yàn)室間變異系數(shù)均在2.23%以內(nèi)，實(shí)驗(yàn)室間在DMD與EHGE上有顯著差異，且DMD的極差、變異系數(shù)比能量消化率的相應(yīng)值大。這可能與各實(shí)驗(yàn)室在仿生消化過(guò)程中清洗產(chǎn)物時(shí)所用的水不一致有關(guān)(實(shí)驗(yàn)室通常使用2類試驗(yàn)用水：市售桶裝純凈水、膜過(guò)濾去離子水)。此外，在仿生消化方法中，大豆粕上樣量為1 g，而玉米上樣量為2 g，從數(shù)據(jù)的計(jì)算上也使得大豆粕的測(cè)定值誤差比玉米高1倍，從而也增加了實(shí)驗(yàn)室間的差異。盡管如此，與前述方法相比，本仿生消化方法在實(shí)驗(yàn)室間的再現(xiàn)性更好。

4 結(jié) 論

① 雖然實(shí)驗(yàn)室間SDS-2在消化液流速有顯著差異，但不會(huì)引起飼料原料EHGE測(cè)定結(jié)果的差異。4個(gè)實(shí)驗(yàn)室間SDS-2開(kāi)機(jī)運(yùn)行60 min后混合頻率及酶促反應(yīng)室、緩沖液控溫室、消化液儲(chǔ)存室的溫度均達(dá)到一致。

② 實(shí)驗(yàn)室間玉米EHGE的再現(xiàn)性高于大豆粕，2個(gè)飼料原料EHGE的總變異系數(shù)都可控制在1.64%以內(nèi)，具有滿意的再現(xiàn)性。