氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定果蔬中赤霉素

□趙海玲 邱宏萌 雷 瓊 朱豐秀 江西省贛州市疾病預(yù)防控制中心

赤霉素，是一種廣譜性的植物生長調(diào)節(jié)劑，被廣泛應(yīng)用于植物生長和發(fā)育的各個階段。赤霉素雖屬于低毒的植物生長調(diào)節(jié)劑，但大量使用時會產(chǎn)生一定的毒性。美國、歐盟和日本等國家規(guī)定水果和蔬菜中赤霉素最高殘留限量為0.2mg/kg[1]。

目前，檢測赤霉素方法有高效液相色譜法[2-3]、氣相色譜法[4]、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[5]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[6]、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法。赤霉素是內(nèi)源性激素之一，在植物中含量很少。質(zhì)譜檢測靈敏度高，重復(fù)性好，尤其適合痕量植物樣品的檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

2010SE氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司；HC-3018R高速冷凍離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；PB303-S電子天平，梅特勒-托利多公司；vorter-genie2渦旋混勻器，美國SI公司；勻漿機(jī)；超聲波清洗器；氮吹儀。

MCS固相萃取柱，500mg/6mL；HLB固相萃取柱，200mg/6mL。

甲酸（分析純），氯化鈉（分析純），鹽酸（優(yōu)級純），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純）。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：赤霉素購自Dr.EhrenstorferGmbH（Germany）。

1.2 樣品處理

1.2.1 提取

稱取5.00g試樣于50mL離心管中，加入20μL甲酸和20mL乙腈，勻漿1min，10000r/min冷凍離心5min，移取上清液至新的50mL離心管中，加入3g氯化鈉（飽和有結(jié)晶），渦旋混勻2min，10000r/min冷凍離心2min，吸出5mL乙腈相于15mL離心管中，40℃氮?dú)獯蹈?，加?.2mL甲醇渦旋溶解，再加入3mL40mmol/L的鹽酸溶液混勻，10000r/min冷凍離心5min，上清液待凈化。

1.2.2 凈化

用5mL甲 醇、5mL水、5mL40mmol/L的鹽酸溶液活化MCS柱，將上清液轉(zhuǎn)移至MCS柱內(nèi)，待樣品過柱后，用5mL水淋洗除雜質(zhì)，真空抽干5min，加入3mL甲醇洗脫收集于15mL離心管中，抽干得洗脫液，40℃氮?dú)獯蹈?，加?.0mL甲醇超聲溶解殘留物，待GCMS測定。

1.3 色譜質(zhì)譜條件

氣相色譜質(zhì)譜儀條件：Rts-5ms毛 細(xì) 管 色 譜 柱，30m×0.25mm×0.25μm； 進(jìn) 樣 口 溫 度，230℃； 柱溫，初溫100℃，以15℃/min升至280℃保持2min；載氣，氦氣，純度≥99.999%，流速1mL/min；電離模式，電子轟擊源（EI），電子能量70eV；離子源溫度，200℃；傳輸線溫度，280℃；溶劑延遲，4min；進(jìn)樣方式，不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量，1μL；檢測方式，選擇離子掃描（SIM）采集，選擇離子m/z為 121、136、284、328、346。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液的選擇

本方法選取了乙腈和80%甲醇-水溶液提取，回收率分別為91.5%和85.2%?？紤]到固相萃取柱凈化，甲醇提取液容易堵柱，而乙腈干擾物質(zhì)少，所以選用乙腈作為提取液，提取過程中加入氯化鈉進(jìn)行鹽析，有利于分析物提取。

2.2 凈化條件的選擇

2.2.1 凈化方式

本方法選用MCS固相萃取柱和HLB固相萃取柱凈化，回收率分別為91.2%和87.5%。兩種萃取柱的損失都比較少，基于MCS萃取柱去除雜質(zhì)的效果更好，所以選用MCS固相萃取柱凈化。

2.2.2 洗脫液

分別用3mL100%甲醇、80%甲醇-水溶液、50%甲醇-水溶液洗脫，回收率均能達(dá)90%以上，100%甲醇洗脫，氮吹干，效率高，所以選用100%甲醇作為洗脫液。

2.3 方法評價

2.3.1 方法的線性范圍和檢出限

空白基質(zhì)樣品經(jīng)1.2樣品前處理后，配 制 0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL赤霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，其相關(guān)系數(shù)為0.996，線性范圍在0.1～10μg/mL，方法檢出限為0.1μg/mL（S/N=3）。

2.3.2 方法的回收率和精密度

選取3種果蔬樣品黃瓜、蘋果、葡萄添加高、中、低3個濃度的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。

2.4 實(shí)際樣本檢測

2016年采集了贛州市市售水果樣品75份，檢測6種植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量（4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、多效唑、赤霉素、噻苯隆、氯吡脲），9份樣品檢出，其中2份檢出4-氯苯氧乙酸，5份檢出2,4-二氯苯氧乙酸，3份檢出多效唑，5份檢出氯吡脲，未檢出赤霉素和噻苯隆。檢測結(jié)果與2015年吉林省市售水果中植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量監(jiān)測結(jié)果接近。

表1 3種蔬菜水果中赤霉素回收率和精密度（n=6）

3 結(jié)語

本方法研究建立了氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定果蔬中赤霉素殘留量的方法。樣品前處理采用乙腈提取，提取液經(jīng)MCS固相萃取柱凈化，不僅有效去除干擾物質(zhì)，而且得到較高的回收率。方法檢出限滿足國內(nèi)外限量要求，是一種較好的檢測赤霉素殘留的方法。