回醫(yī)烙灸療法對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能修復(fù)研究

【摘 要】 目的：觀察回醫(yī)烙灸療法對(duì)脊髓損傷后大鼠神經(jīng)功能修復(fù)的影響。方法：采用Allens法制備急性脊髓損傷模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組、模型組、西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組，其中50只于第7、14、28、42、56天采用脊髓損傷運(yùn)動(dòng)功能改良Tarlov評(píng)分法及皮層體感誘發(fā)電位（CSEP）檢測。另外60只取損傷脊髓組織，于1、7、14、28d電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果：Tarlov評(píng)分：損傷7d，除假手術(shù)組，其它4組均小于3分，4組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05） ；損傷14d，西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組評(píng)分均大于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷28d，評(píng)分排序?yàn)?h烙灸組和6h烙灸組>西藥組>模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷42、56d，西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組Tarlov評(píng)分均大于模型組（P<0.05）。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CSEP潛伏期：損傷7、14d，5組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷28d，排序?yàn)?h烙灸組和6h烙灸組<西藥組<模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷42d，各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。排序?yàn)?h烙灸組<6h烙灸組<西藥組<模型組；損傷56d，排序?yàn)?h烙灸組<6h烙灸組<模型組和西藥組（P<0.05），模型組和西藥組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。電鏡觀察損傷脊髓超微結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分結(jié)果顯示2h烙灸組、6h烙灸組中細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、軸突髓鞘、軸突及線粒體恢復(fù)情況好于西藥組。結(jié)論：回醫(yī)烙灸療法對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)有促進(jìn)作用。

【關(guān)鍵詞】 回醫(yī)烙灸；大鼠；脊髓損傷；神經(jīng)修復(fù)

【中圖分類號(hào)】R-332 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）05-0020-05

Abstract：Objective To obserue the influence of hui medicine lao moxibustion to the neural function recovery of the rats which spinal cord injured.Methods Allens method was used to make the ratsmodel of acute spinal cord injury. Experimental animals were divided into sham operation group、the model group， treatment group by western medicine ， treatment group by hui medicine lao moxibustion two hours after manufacturing model， treatment group by hui medicine lao moxibustion six hours after manufacturing model. 50 rats of them were detected on 7th， 14th，28th， 42th， 56th days by scoring method of tarlov and CSEP.The injured spinal cord tissue of the other 60 rats were observed on ultrastructure of the spinal cord and scored on 1th，7th，14th，28th day.Results Tarlov score： injury on the 7th day， in addition to sham operation group， the other four groups were less than three points， the four groups were not statistically significant （P>0.05）；injury on the 14th day， the scores of the western medicine group， the 2 hours lao moxibustion group， the 6 hours lao moxibustion group were higher than the model group， the difference was statistically significant （P<0.05）.The difference between the western medicine group， the 2 hours lao moxibustion group， the 6 hours lao moxibustion had no statistically significance （P>0.05）；injury on the 28th days，The scores range from high to low is the 2 hours moxibustion group and 6 hours moxibustion group ，the western medicine group ，the model group （P< 0.05）， the 2 hours moxibustion group and the 6 hours moxibustion group were not statistically significant （P>0.05）.injury on the 42th days and 56th days， the score of the western medicine group， the 2 hours moxibustion group， the 6 hours moxibustion group were all higher than the model group （P<0.05）. There was no statistical difference between the western medicine group， the 2 hours moxibustion group and the 6 hours moxibustion group （P>0.05）.The latent period of CSEP： injury on the 7th days and 14th days， there was no statistica difference between the 5 groups （P>0.05）； injury on the 28th days， sort from low to high are the 2 hours moxibustion group and the 6 hours moxibustion group ，the western medicine group，model group （P<0.05）.The difference between the 2 hours lao moxibustion group and the 6 hours lao moxibustion group was not statistically significant（P>0.05）；The difference between the five groups were statistically significant on the 42th days （P<0.05）. The order from low to high was the 2 hours moxibustion group，the 6 hours moxibustion group，the western medicine group，the model group； injury on the 56th days，the sequence from low to high was 2 hours moxibustion group，the 6 hours moxibustion group，the model group and the western medicine group （P<0.05）. There was no significant difference between the model group and the western medicine group （P>0.05）； The electron microscopy result of the ultrastructure of the spinal cord show the recover condition of the 2 hours lao moxibustion group， the 6 hours lao moxibustion group were better than western medicine group on cytoplasm， nucleus， axon myelin sheath and axon and mitochondria.Conclusion Hui medicine lao moxibustion has promoting effect on the recovery of neural function of rats which spinal cord injured.

Keywords：Hui Medicine Lao Moxibustion；Rats；Spinal Cord Injury；Recovery of Neural Function

創(chuàng)傷性脊髓損傷在臨床上是一種比較嚴(yán)重的疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)沒有特別有效的治療方法，只停留在對(duì)癥治療階段?；蒯t(yī)烙灸療法是治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的一種新方法，在臨床上已經(jīng)取得一定療效。本實(shí)驗(yàn)采用脊髓損傷運(yùn)動(dòng)功能改良Tarlov評(píng)分法及皮層體感誘發(fā)電位CSEP檢測的方法，取大鼠脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)分。通過觀察脊髓損傷大鼠行為、神經(jīng)電生理傳導(dǎo)及脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)分，旨在探討回醫(yī)烙灸療法對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)修復(fù)功能的修復(fù)研究。

1 材料和方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)在寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成，選取清潔級(jí)SD大鼠110只（寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK（寧）2015-0001，12周齡，體質(zhì)量230～305g，雄性）。

1.2 方法

1.2.1 分組 將110只大鼠隨機(jī)數(shù)字表法分為5組：假手術(shù)組、 模型組、西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組，每組22只，其中50只于第7、14、28、42和56天采用脊髓損傷運(yùn)動(dòng)功能改良Tarlov評(píng)分法及皮層體感誘發(fā)電位（CSEP）檢測。另外60只于第1、7、14和28天取損傷脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)分。假手術(shù)組，只做椎板切除，不做脊髓損傷；模型組，脊髓Allens打擊損傷后灌胃給予一定量生理鹽水，持續(xù)56d；醋酸潑尼松治療組（西藥組），脊髓Allens打擊損傷后0.5h內(nèi)首次按20mg/kg，隨后按 4.6mg/kg/h腹腔注射給藥，3h連續(xù)給藥，之后按7.2mg/kg/d，連續(xù)給藥7d；2h烙灸組，脊髓Allens打擊損傷后2h采用烙灸治療，烙灸隔日1次，每次5min，持續(xù)28d；6h烙灸組，脊髓Allens打擊損傷后6h采用烙灸治療，烙灸隔日1次，持續(xù)28d。各組于術(shù)后1h經(jīng)皮下注射青霉素，每日1次，連續(xù)7d。各組均給予一定量生理鹽水，持續(xù)56d。

1.2.2 模型制備 改良的脊髓損傷Allens[1]造模。操作：大鼠麻醉、消毒，以T10為中心，沿脊柱方向切約3cm的切口，切開皮膚、肌肉，分離并暴露棘突，將T10椎板全部切除，保留硬脊膜。采用自制的 Allens 改良式打擊裝置（將15g打擊棒套入鋼管內(nèi)，卡住打擊高度，松開打擊棒即可下落） ，高度為5cm，致傷量為75g·cm-1，造成T10～T11 節(jié)段急性脊髓損傷（此致傷量可造成大鼠的不完全性截癱，屬中等程度損傷）。動(dòng)物出現(xiàn)擺尾反射，雙下肢及軀體回縮撲動(dòng)后，見雙下肢不完全癱瘓，標(biāo)志造模成功。

1.2.3 治療方法 固定大鼠，回醫(yī)特制烙灸器放在損傷大鼠兩側(cè)夾脊穴（在距損傷上下端兩個(gè)椎體的棘突間隙旁開距中線3～4mm處取穴）?；蒯t(yī)特制烙灸器利用自制和脊柱形狀相似鐵質(zhì)灸具制成，在灸槽內(nèi)放有艾絨，點(diǎn)燃艾絨，利用鐵質(zhì)灸具熱傳導(dǎo)，使局部發(fā)紅，排出異常體液。部位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》（上?？茖W(xué)技術(shù)出版社）烙灸組于造模后2h和6h分別開始，隔日同一時(shí)間重復(fù)治療1次，每次灸5min，持續(xù)28d，并防止時(shí)間過長造成皮膚損傷。

1.2.4 改良Tarlov 評(píng)分法[2] 評(píng)價(jià)后肢神經(jīng)功能 0分：完全癱瘓，針刺時(shí)下肢無反應(yīng)；1分：后肢完全癱瘓，針刺時(shí)下肢無反應(yīng)，但肢體不能活動(dòng)；2分：后肢肢體可輕微活動(dòng)，但不能站立；3分： 后肢肢體可水平活動(dòng)，但后肢無法爬行；4分：后肢肢體可爬行數(shù)步，但不穩(wěn)定；5分：后肢能緩慢爬行走，但不靈活；6分： 后肢能正常行走。所有大鼠術(shù)前評(píng)分均正常，分別于7、14、28、42、56d評(píng)分，共5次，所有觀察均在19：00于開放空間進(jìn)行，觀察時(shí)間為10min。

1.2.5 大鼠皮層體感誘發(fā)電位（CSEP）檢測 采用誘發(fā)電位儀檢測皮層體感誘發(fā)電位，分別于脊髓損傷后7、14、28、42、56d對(duì)下肢進(jìn)行觀察。大鼠腹腔注射麻醉，刺激電極插入下肢后部，陰陽電極相距1cm，周圍以溫鹽水濕潤。記錄電極置于大鼠對(duì)側(cè)感覺皮質(zhì)表面，參考電極插入前額皮下。電位儀給予直流方波電脈沖刺激，強(qiáng)度為60mA，波寬0.3ms，頻率2.1Hz，疊加300～400次，分析時(shí)間100ms，觀察P1波的反應(yīng)潛伏期。

1.2.6 電鏡觀察 每組又按不同時(shí)間點(diǎn)分別在1、7、14、28d各取3只，共計(jì)60只，處死大鼠，取脊髓損傷部位上下1cm的脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)分。采用Kaptanoglu等[3-4]創(chuàng)立的脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)評(píng)分法。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞質(zhì)、軸突、線粒體根據(jù)水腫程度分0～3分；細(xì)胞核根據(jù)染色質(zhì)損傷程度分0～3分；軸突髓鞘根據(jù)損傷情況分0～3分。 評(píng)定各項(xiàng)分值相加 ，計(jì)算各組中胞質(zhì)內(nèi)水腫、細(xì)胞核損傷、軸突變性、髓鞘分解、和線粒體損傷的平均評(píng)分及標(biāo)準(zhǔn)誤，數(shù)值越高，則脊髓損傷程度越嚴(yán)重。數(shù)值的大小與脊髓損傷的嚴(yán)重程度成正比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能Tarlov評(píng)分 實(shí)驗(yàn)開始前5組大鼠評(píng)分均正常。除假手術(shù)組，其它各組大鼠經(jīng)改良Allens打擊后，雙后肢不完全癱瘓，第7、14、28、42和56天 Tarlov評(píng)分均小于假手術(shù)組 （P<0.05）。損傷7d評(píng)分：除假手術(shù)組，其它4組均小于3分，4組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05） ；損傷14d評(píng)分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組評(píng)分均大于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷28d評(píng)分：經(jīng)兩兩比較Tarlov評(píng)分排序?yàn)?h烙灸組和6h烙灸組>西藥組>模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷42d評(píng)分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組Tarlov評(píng)分均大于模型組（P<0.05）。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；損傷56d評(píng)分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組Tarlov評(píng)分均大于模型組。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 脊髓損傷大鼠CSEP檢測 正常CSEP潛伏期是（16.45±0.61）ms，波形為“W”形。除假手術(shù)組，其它各組大鼠經(jīng)改良Allens打擊后，雙后肢不完全癱瘓，第7、14、28、42、56天CSEP潛伏期均大于假手術(shù)組 （P<0.05）。損傷7d和14d時(shí)，4組之間CSEP潛伏期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。損傷28d時(shí)，經(jīng)兩兩比較，CSEP潛伏期排序?yàn)?h烙灸組和6h烙灸組<西藥組<模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。損傷42d時(shí)，經(jīng)兩兩比較各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CSEP潛伏期排序?yàn)?h烙灸組<6h烙灸組<西藥組<模型組。損傷56d時(shí)，經(jīng)兩兩比較CSEP潛伏期排序?yàn)?h烙灸組<6h烙灸組<模型組和西藥組（P<0.05），模型組和西藥組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3 電鏡觀察脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)評(píng)分 采用Kaptanoglu等創(chuàng)立的脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)評(píng)分法。評(píng)分結(jié)果顯示除假手術(shù)組，其它各組各時(shí)間點(diǎn)評(píng)分均大于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。損傷1d評(píng)分，除假手術(shù)組，其它各組評(píng)分明顯升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05） ；7d評(píng)分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組均小于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；14d評(píng)分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組的評(píng)分要小于模型組。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；28d評(píng)分：評(píng)分排序?yàn)?h烙灸組<6h烙灸組<西藥組<模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

脊髓損傷的程度和臨床表現(xiàn)是由原發(fā)性損傷的部位和性質(zhì)決定的，中醫(yī)學(xué)病因病機(jī)為瘀血停滯導(dǎo)致“腰痛”、“痿證”、“癃閉”等病證范疇。在脊髓中中樞神經(jīng)結(jié)構(gòu)的獨(dú)特，造成了脊髓損傷后修復(fù)的過程相當(dāng)困難，因此讓損傷的腦和脊髓獲得再生，成為許多神經(jīng)科學(xué)家研究的目標(biāo)[5]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究大多放在神經(jīng)營養(yǎng)因子及去除神經(jīng)生長抑制因子方面。實(shí)驗(yàn)研究顯示，由于神經(jīng)營養(yǎng)因子的神經(jīng)系統(tǒng)老化、創(chuàng)傷、神經(jīng)退行性變等情況下能調(diào)節(jié)神經(jīng)元的可塑性和神經(jīng)再生，它們具有支持運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活、促進(jìn)感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長的作用[6-7]?，F(xiàn)在激素類藥物作為脊髓損傷的常用藥物，研究顯示激素類藥物對(duì)近期脊髓損傷功能恢復(fù)的具有顯著療效，對(duì)遠(yuǎn)期的功能恢復(fù)效果并不十分顯著，而且長期運(yùn)用激素類藥物副作用比較多[8]。通過前期臨床研究發(fā)現(xiàn)回醫(yī)烙灸療法對(duì)脊髓損傷臨床效果十分明顯，且安全穩(wěn)定，副作用較小，它是治療脊髓損傷新的手段[9]。

Tarlov、CSEP是一個(gè)相對(duì)定量、客觀的檢測技術(shù)，能夠?qū)顾钃p傷作出功能性診斷及正確的定量分析。改良Tarlov評(píng)分主要對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，而CSEP根據(jù)潛伏期變化的程度判斷脊髓損傷的嚴(yán)重程度，潛伏期越接近正常值療效越顯著。Tarlov、CSEP統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，回醫(yī)烙灸療法療效明顯優(yōu)于西藥組療效，尤其28d最顯著。在42d和56d時(shí)，2h烙灸組、6h烙灸組和西藥組之間沒有差異（P>0.05），由于烙灸療法只治療28d，后續(xù)沒有采取治療，后續(xù)的康復(fù)功能與西藥組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。以上實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)通過28d烙灸治療，脊髓損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)速度明顯好于西藥組及模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。烙灸治療28d后，一旦結(jié)束烙灸治療神經(jīng)功能恢復(fù)的速度明顯降低，與其它各組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），證實(shí)回醫(yī)烙灸療法對(duì)脊髓損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)確有促進(jìn)作用。每個(gè)組又按1、7、14、28d不同時(shí)間點(diǎn)分別取3只，共計(jì)60只，做電鏡觀察損傷脊髓超微進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分結(jié)果顯示2h烙灸組、6h烙灸組中細(xì)胞質(zhì)水腫、細(xì)胞核染色質(zhì)損傷、軸突髓鞘、軸突及線粒體水腫程度恢復(fù)情況好于西藥組。結(jié)果又進(jìn)一步證實(shí)了回醫(yī)烙灸治療脊髓損傷療效確切。

回醫(yī)烙灸療法是灸法治療方式的一種，它能夠結(jié)合腧穴組織特點(diǎn)和經(jīng)絡(luò)功能，利用藥物、器械加熱所產(chǎn)生的火熱刺激，通調(diào)氣血，直接或間接地引導(dǎo)自然中存在“三子”（回醫(yī)認(rèn)為構(gòu)成生命的三種本源）元素來激發(fā)人體內(nèi)的稟性體液活動(dòng)機(jī)能，通過皮膚和血管感受器的反射途徑傳到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，通過興奮和抑制的調(diào)節(jié)作用，使之趨于相對(duì)平衡。在溫?zé)嵝源碳ば?yīng)的作用下，導(dǎo)致局部血管擴(kuò)張，促進(jìn)體液循環(huán)，加強(qiáng)新陳代謝，改變局部組織營養(yǎng)狀態(tài)，增強(qiáng)血管壁通透性及白細(xì)胞吞噬能力，增強(qiáng)局部耐受性及機(jī)體抵抗力 [10]。而脊髓損傷后期其元陽不振，氣血不調(diào)，經(jīng)絡(luò)淤阻造成肢體活動(dòng)不利。治療正需要回醫(yī)烙灸強(qiáng)刺激手段，刺激周圍神經(jīng)的敏感度，加強(qiáng)其與大腦中樞神經(jīng)的聯(lián)系。這種獨(dú)具特色的灸法，是祖國醫(yī)學(xué)“化膿灸”的發(fā)展與深化，它較“化膿灸”療法操作更加精準(zhǔn)，醫(yī)者對(duì)施灸的火力與程度能夠進(jìn)行較好控制，且對(duì)皮膚的損傷程度較輕，對(duì)元?dú)獾恼駣^與恢復(fù)較為迅速[11]?；蒯t(yī)在長期臨床使用中證實(shí)，烙灸療法對(duì)于經(jīng)絡(luò)、筋經(jīng)的不暢，骨與關(guān)節(jié)損傷性疾病有不可替代的獨(dú)特療效。本療法在長期的傳承和實(shí)踐中，積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，治療效果相對(duì)可靠，對(duì)醫(yī)療設(shè)備設(shè)施的依賴小，技術(shù)操作便于掌握，適合在基層推廣。

總之，本實(shí)驗(yàn)研究表明回醫(yī)烙灸對(duì)脊髓損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)確有促進(jìn)作用，從而對(duì)神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用，并減少髓鞘的脫失，其為脊髓損傷后神經(jīng)的修復(fù)提供理論和實(shí)踐基礎(chǔ)，豐富了脊髓損傷的新的治療手段，更為脊髓損傷的治療開辟新的途徑、新的方法，從而有利于提升脊髓損傷患者的康復(fù)治療水平。

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（收稿日期：2018-01-17 編輯：程鵬飛）