雷公藤多苷片對(duì)纈沙坦在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響

趙俊 徐業(yè) 石彥波 黃科 王力勇

[摘要] 目的 研究大鼠合用雷公藤多苷片和纈沙坦后，雷公藤多苷片對(duì)纈沙坦藥代動(dòng)力學(xué)的影響。 方法 16只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為單獨(dú)給藥組和聯(lián)合給藥組兩組，其中單獨(dú)給藥組灌胃纈沙坦（20 mg/kg），聯(lián)合給藥組灌胃雷公藤多苷片（10 mg/kg）和纈沙坦（20 mg/kg）。不同時(shí)間點(diǎn)取血并采用LC-MS測(cè)定纈沙坦的血藥濃度，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果 與單獨(dú)給藥組相比，聯(lián)合給藥組纈沙坦的最大血藥濃度[（1.57±0.32） vs （1.01±0.28）μg/mL]和血漿曲線下面積[（10.01±0.58） vs （6.82±0.77）mg·h/L]明顯增加（P<0.05），說(shuō)明纈沙坦的代謝受到明顯抑制。 結(jié)論 雷公藤多苷片與纈沙坦聯(lián)用之后，會(huì)對(duì)纈沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生明顯的影響，本研究對(duì)纈沙坦和雷公藤多苷片聯(lián)合用藥具有一定的指導(dǎo)作用，可以避免臨床藥物不良相互作用的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞] 纈沙坦；雷公藤多苷片；藥代動(dòng)力學(xué)；藥物相互作用

[中圖分類號(hào)] R587.2；R692.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）14-0030-04

[Abstract] Objective To study the effect of tripterysium glycosides tablets on the pharmacokinetics of valsartan in rats combined with tripterysium glycosides tablets and valsartan. Methods 16 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups： the single administration group and the combined administration group. In the single administration group， the rats were given intragastric administration of valsartan （20 mg/kg） and the combined administered group was given intragastric administration of tripterysium glycosides tablets （10 mg/kg） and valsartan （20 mg/kg）. Blood samples were taken at different time points and plasma concentrations of valsartan were determined by LC-MS. Pharmacokinetic parameters were calculated. Results The maximum plasma concentration of valsartan was[（1.57±0.32） vs （1.01±0.28）μg/mL] and the plasma area under the curve was [（10.01±0.58） vs （6.82±0.77）mg·h/L]， which were significantly increased in the combined administration group combined with the single administration group（P<0.05）， indicating that valsartan metabolism was significantly inhibited. Conclusion Tripterysium glycosides tablets combined with valsartan has a significant effect on the pharmacokinetics of valsartan. This study plays a guiding role in the combined administration of valsartan and tripterygium glycosides tablets， which can avoid the occurrence of clinical adverse drug interactions.

[Key words] Valsartan； Tripterysium glycosides tablets； Pharmacokinetics； Drug interactions

纈沙坦是一種特異性的血管緊張素Ⅱ（AT1）受體拮抗劑，也是繼氯沙坦后又一個(gè)應(yīng)用于臨床的非肽類AT1受體拮抗劑，在調(diào)節(jié)全身血壓、維持電解質(zhì)體液平衡方面起關(guān)鍵作用[1]。

雷公藤多苷片（TGT）的主要活性成分是雷公藤多苷，藥理研究表明其具有免疫抑制、抗炎、抗腫瘤等活性[2-4]。臨床上雷公藤多苷片主要用于治療類風(fēng)濕、腎病等多種自身免疫性疾病[5]，常與纈沙坦合用治療糖尿病腎病或腎移植后蛋白尿[6-8]，但雷公藤多苷片和纈沙坦共同服用之后是否會(huì)產(chǎn)生藥物-藥物相互作用目前并不清楚。

因此，本研究旨在觀察共同服用纈沙坦及雷公藤多苷片后，雷公藤多苷片對(duì)纈沙坦體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試藥

纈沙坦（純度>98%）和厄貝沙坦（純度>98%）（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。雷公藤多苷片（上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，10 mg，國(guó)藥準(zhǔn)字Z31020415）。

1.2 纈沙坦血漿濃度測(cè)定

色譜柱：Waters Xbridge C18色譜柱（3.0×100 mm，3.5 μm，USA）。進(jìn)樣量：5 μL，流動(dòng)相：水（含0.1%的HCOOH）：甲醇（60：40，v：v），流速：0.6 mL/min。

采用SIM（Positive）模式進(jìn)行離子監(jiān)測(cè)。其中纈沙坦：m/z 436.1，厄貝沙坦：m/z 429.2。碎片電壓：110 V，干燥器流速：11.0 L/min，霧化器壓力：40 psi，干燥器溫度：350°C，毛細(xì)管電壓：3500 V。

1.3血漿樣品前處理方法

向100 μL血漿樣品中加入20 μL甲醇和180 μL含有內(nèi)標(biāo)厄貝沙坦（100 ng/mL）的乙腈溶液，渦旋30 s，12000 rpm離心10 min，取上清液進(jìn)樣分析。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱量纈沙坦置于容量瓶中，加入適量的乙腈制成濃度為2 mg/mL的樣品溶液。精密稱取一定量的內(nèi)標(biāo)厄貝沙坦于容量瓶中，加入適量的乙腈配制濃度為200 ng/mL內(nèi)標(biāo)溶液。采用乙腈將纈沙坦稀釋成（50～10000）ng/mL濃度梯度的溶液，然后取20 μL加入到含有100 μL空白甲醇的EP管中，加入180 μL內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋30 s，12000 rpm離心10 min，取上清進(jìn)樣分析。按上述方法配制質(zhì)控樣品溶液，其中纈沙坦為20、200、1600 ng/mL。樣品于-4°C保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5方法學(xué)考察

1.5.1 選擇性 將含有纈沙坦的待分析血漿樣本與來(lái)源于不同大鼠的6批血漿樣本的色譜圖進(jìn)行比對(duì)，以觀察血漿樣本中是否有其他成分存在干擾纈沙坦的檢測(cè)。

1.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及最低檢測(cè)限 采用纈沙坦的峰面積與厄貝沙坦峰面積之比對(duì)應(yīng)濃度作圖，計(jì)算線性回歸方程（最小二乘法）。將纈沙坦的信噪比為10定為最低定量限（準(zhǔn)確度和精密度≤20%）。

1.5.3 準(zhǔn)確度和精密度 日內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度采用24 h內(nèi)連續(xù)五次進(jìn)樣的樣品進(jìn)行計(jì)算；日間精密度和準(zhǔn)確度采用在連續(xù)3 d內(nèi)進(jìn)樣質(zhì)控樣品進(jìn)行計(jì)算。

1.5.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 提取回收率通過(guò)比較加纈沙坦血漿經(jīng)過(guò)前處理之后所得的峰面積與前處理之后血漿加纈沙坦測(cè)定的峰面積的比值來(lái)計(jì)算；基質(zhì)效應(yīng)通過(guò)比較前處理之后血漿加纈沙坦測(cè)定的峰面積與同濃度的乙腈樣品溶液的峰面積比值來(lái)計(jì)算。

1.5.5 穩(wěn)定性 穩(wěn)定性進(jìn)行如下考察：短期穩(wěn)定性（室溫放置4 h）、進(jìn)樣器穩(wěn)定性（進(jìn)樣器放置24 h）、三次凍融循環(huán)（-40°C凍存，室溫下融化）及長(zhǎng)期穩(wěn)定性（-40°C凍存15 d）。

1.6動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

雄性SD大鼠16只，體重（250±20） g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[合格證號(hào)：SCXK（滬）2012-000]。大鼠自由攝食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周[25℃、（60±5）%濕度]。實(shí)驗(yàn)前禁食。實(shí)驗(yàn)前將大鼠隨機(jī)分為單獨(dú)給藥組和聯(lián)合給藥組兩組，每組8只，其中單獨(dú)給藥組灌胃纈沙坦20 mg/kg；聯(lián)合給藥組灌胃雷公藤多苷片（10 mg/kg）和纈沙坦（20 mg/kg）。

于不同時(shí)間點(diǎn)（0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、24 h）眼眶取血（250 μL）置于涂有肝素的EP管中，離心（3500 rpm、5 min）取上清，-40°C保存。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Das 3.0軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1選擇性

如圖1所示，為空白血漿及含有纈沙坦及內(nèi)標(biāo)厄貝沙坦的血漿樣品色譜圖，結(jié)果表明，在待測(cè)樣品出峰位置沒(méi)有其他成分干擾樣品的檢測(cè)，表明本方法具有良好的選擇性。

2.2校正曲線及最低檢測(cè)限

纈沙坦的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0025x-0.0358（y為濃度，x為峰面積），其相關(guān)系數(shù)大于0.999，顯示在50-1000 ng/mL濃度范圍內(nèi)，纈沙坦線性關(guān)系良好，最低定量限為10 ng/mL。

2.3精密度和準(zhǔn)確度

如表1所示，纈沙坦的精密度不超過(guò)10%，而纈沙坦的準(zhǔn)確度在-9.28%到8.39%范圍內(nèi)。上述結(jié)果表明本方法的精密度和準(zhǔn)確度滿足要求。

2.4提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)

纈沙坦的基質(zhì)效應(yīng)在91.5%～96.7%范圍之內(nèi)，表明本方法無(wú)明顯的基質(zhì)效應(yīng)干擾。纈沙坦提取回收率在88.64%～92.5%范圍之內(nèi)（RSD<15%），結(jié)果表明提取回收率良好。

2.5穩(wěn)定性

穩(wěn)定性結(jié)果表明所有質(zhì)控樣品的穩(wěn)定性在85%～115%范圍之內(nèi)。

2.6藥代動(dòng)力學(xué)研究

本研究考察了同時(shí)口服雷公藤多苷片和纈沙坦之后，雷公藤多苷片對(duì)纈沙坦的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響。如圖2所示，為纈沙坦的藥時(shí)曲線。

纈沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)采用Das 3.0軟件進(jìn)行計(jì)算。如表2所示，為纈沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。從表2可以看出，同時(shí)服用兩藥后，其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)發(fā)生明顯變化。其中兩藥聯(lián)用組纈沙坦的Cmax[（1.57±0.32） vs （1.01±0.28）μg/mL]和AUC（0-t）[（10.01±0.58） vs （6.82±0.77）mg·h/L]明顯增加（P<0.05），說(shuō)明同時(shí)服用兩藥后，雷公藤多苷片會(huì)對(duì)纈沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)發(fā)生明顯影響。

3 討論

目前，隨著中草藥的廣泛應(yīng)用，中藥-西藥之間的相互作用問(wèn)題日益凸顯，而代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體是影響藥物體內(nèi)處置過(guò)程的重要因素，其表達(dá)和功能的改變常常引起藥代動(dòng)力學(xué)的變化，是藥物-藥物相互作用的主要靶點(diǎn)[9]。

細(xì)胞色素P450（CYP450）位于胞漿內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，主要存在于肝臟中，此外，在胃腸道（特別是小腸中）、肺、腎和胎盤也有表達(dá)。CYP450是重要的藥物Ⅰ相代謝酶，可以催化多種外源性化合物的氧化和還原代謝，人體內(nèi)約有75%的藥物代謝通過(guò)CYP450酶進(jìn)行，對(duì)解釋藥物在機(jī)體內(nèi)的清除過(guò)程有著非常重要的意義。CYP3A4是表達(dá)量最大的異構(gòu)體，約占人體肝臟CYP450的30%～40%，有近50%的藥物通過(guò)CYP3A4進(jìn)行代謝。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，同時(shí)服用兩藥后，雷公藤多苷片會(huì)對(duì)纈沙坦藥代動(dòng)力學(xué)行為產(chǎn)生明顯的影響，主要表現(xiàn)在抑制纈沙坦的體內(nèi)代謝，從而增加其血藥濃度，增加其系統(tǒng)暴露。纈沙坦為肝臟代謝酶CYP3A4的代謝底物[10]，而雷公藤多苷片中的主要活性成分雷公藤甲素和雷公藤紅素會(huì)抑制CYP3A4的活性[11-12]。因此，共同服用雷公藤多苷片和纈沙坦之后，雷公藤多苷片中的主要活性成分可能會(huì)抑制纈沙坦在肝臟內(nèi)的代謝，導(dǎo)致纈沙坦代謝清除減慢，導(dǎo)致其在體內(nèi)的血藥濃度升高。

多篇文獻(xiàn)報(bào)道，雷公藤多苷片與一些臨床常用藥物聯(lián)用之后，會(huì)導(dǎo)致藥物-藥物相互作用的產(chǎn)生[13，14]。主要原因是雷公藤多苷片中的主要活性成分會(huì)對(duì)肝臟藥物代謝酶的活性產(chǎn)生抑制作用，導(dǎo)致聯(lián)用藥物代謝緩慢，血藥濃度增加，對(duì)于治療窗較寬的藥物其療效會(huì)增加，但對(duì)于治療窗狹窄，有一定毒性藥物，需注意密切監(jiān)視治療藥物濃度，以防止毒性反應(yīng)的發(fā)生。

前期研究者對(duì)纈沙坦與中藥之間可能產(chǎn)生的藥物-藥物相互作用進(jìn)行了大量研究[15， 16]。槲皮素、丹參片等常用中藥與纈沙坦同時(shí)服用會(huì)對(duì)纈沙坦的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生明顯的影響。因此當(dāng)纈沙坦與中藥聯(lián)用時(shí)，一定要注意兩種藥物之間可能產(chǎn)生的相互作用，以避免不良藥物-藥物相互作用的發(fā)生。

總之，同時(shí)服用雷公藤多苷片和纈沙坦之后，會(huì)導(dǎo)致纈沙坦在體內(nèi)的血藥濃度增加，從而能增強(qiáng)其臨床療效，但是臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)病情需要適當(dāng)調(diào)整給藥劑量，以免導(dǎo)致藥物血藥濃度過(guò)高，造成毒性反應(yīng)的發(fā)生。

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（收稿日期：2018-01-22）