白及顆粒對(duì)家兔鹽酸吸入性肺損傷預(yù)防作用的研究

辛田田，杜玲玲，張曉艷，賀外信

(陜西省延安市人民醫(yī)院，陜西 延安 716000)

鹽酸吸入性肺損傷是一種多發(fā)于急、危重癥患者的疾病，主要是由于胃液吸入肺中造成，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[1-2]。目前，臨床對(duì)于該疾病并無(wú)根治手段，常采用外源性肺泡表面活性物質(zhì)等藥物進(jìn)行治療，雖具有一定的療效，但仍存在效果不穩(wěn)定、部分患者療效不佳等情況[3-4]。而中醫(yī)藥在多種肺部疾病的預(yù)防和治療中具有較好的效果，故篩選有效中藥治療該病可能是途徑之一[5]。白及顆粒具有補(bǔ)肺、收斂及止血的功效，主要用于慢性氣管炎、肺結(jié)核等呼吸道疾病的治療[6]。本研究觀察了白及顆粒對(duì)家兔鹽酸吸入性肺損傷的預(yù)防作用，期望為該疾病的預(yù)防提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1藥物及試劑 白及顆粒購(gòu)自云南省曲靖藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2014120934；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)及C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)所需試劑盒購(gòu)自美國(guó)SIGMA，批號(hào)分別為9801231，98223103及98120934；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)檢測(cè)所用試劑盒均購(gòu)自美國(guó)博大生物科技公司，批號(hào)分別為89110923，89119823及8978245。蘇木精-伊紅染色(HE染色)所需試劑購(gòu)自武漢博士德公司，批號(hào)：2014110923。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 雄性新西蘭大白兔40只,體質(zhì)量1.6～2.2 kg,購(gòu)自西安交通大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK(陜)2014-1216,并由該院動(dòng)物飼養(yǎng)中心代養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)開始前，將上述家兔置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d，飼養(yǎng)條件：12 h光照/12 h黑暗,55%濕度,25 ℃,禁食不禁水。將上述40只新西蘭大白兔隨機(jī)分為空白組、模型組、白及顆粒高劑量組、白及顆粒中劑量組及白及顆粒低劑量組，每組8只。

1.3給藥劑量 根據(jù)白及顆粒的藥物說(shuō)明書，該藥物的治療劑量為15 g/d，結(jié)合文獻(xiàn)[7]中家兔使用劑量轉(zhuǎn)換公式：家兔劑量=3.27×成人劑量(g/kg)，成人體質(zhì)量以70 kg計(jì)，故本研究家兔正常劑量=15 g/70 kg×3.27=0.70 g/kg，選取該劑量為中劑量，并設(shè)置2倍正常劑量為高劑量(1.4 g/kg)，0.5倍正常劑量為低劑量(0.35 g/kg)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法 采用李冰冰等[8]設(shè)計(jì)的吸入性肺損傷預(yù)防實(shí)驗(yàn)方法，白及顆粒高、中、低劑量組分別給予1.4 g/kg、0.70 g/kg、0.35 g/kg的白及顆粒灌胃，空白組及模型組則均給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)30 d。于末次灌胃12 h后，采用25%氨基甲酸乙酯耳緣靜脈注射對(duì)家兔進(jìn)行麻醉，并依次行氣管切開與頸總動(dòng)脈插管，待穩(wěn)定10 min后對(duì)各組家兔行純氧機(jī)械通氣，通氣參數(shù)：吸呼比為1∶2，呼吸頻率為13次/min，潮氣量為10 mL/kg。穩(wěn)定15 min后，向白及顆粒各劑量組及模型組家兔氣管中注入pH 1.0的鹽酸溶液(2.0 mL/kg)，注入完成后依上述通氣條件進(jìn)行純氧定壓機(jī)械通氣，每10 min檢測(cè)1次家兔血?dú)庵?，至p(CO2)持續(xù)小于20 kPa為造模成功；空白組則注入等量生理鹽水。造模結(jié)束后，對(duì)各組家兔繼續(xù)進(jìn)行5 h的純氧機(jī)械通氣，然后利用HU-90型全自動(dòng)血?dú)夥治鰞x(日本島津)檢測(cè)各組家兔p(O2)、p(CO2)及pH值。檢測(cè)結(jié)束后，采用10%氯化鉀處死各組家兔，在無(wú)菌條件下迅速取其左右側(cè)肺。左側(cè)肺采用玻璃勻漿器制備組織勻漿，利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)CRP、IL-6、TNF-α及CAT含量，利用黃嘌呤氧化酶法、化學(xué)比色法分別檢測(cè)SOD、GSH-Px含量；取右側(cè)肺置于-80 ℃條件下保存，按照常規(guī)病理學(xué)處理方法，依次進(jìn)行切片、脫色、烤片及HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察其病理變化。

2 結(jié) 果

2.1各組家兔血?dú)庵笜?biāo)比較 空白組、白及顆粒各劑量組p(O2)及pH均明顯高于模型組而p(CO2)均明顯低于模型組，且白及顆粒高劑量組p(O2)及pH均明顯高于白及顆粒低劑量組，而p(CO2)明顯低于白及顆粒低劑量組，但白及顆粒各劑量組p(O2)及pH均明顯低于空白組而p(CO2)均明顯高于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 各組家兔血?dú)庵笜?biāo)比較

注:①與模型組比較，P<0.05；②與白及顆粒低劑量組比較，P<0.05；③與空白組比較，P<0.05；1 mmHg=0.133 kPa。

2.2各組家兔肺勻漿中炎性因子含量比較 空白組、白及顆粒各劑量組肺勻漿中CRP、IL-6、TNF-α含量均明顯低于模型組，且白及顆粒高劑量組上述因子含量均明顯低于白及顆粒低劑量組，但白及顆粒各劑量組各因子含量均明顯高于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

表2 各組家兔肺勻漿中炎性因子含量比較

注:①與模型組比較，P<0.05；②與白及顆粒低劑量組比較，P<0.05；③與空白組比較，P<0.05。

2.3各組家兔肺勻漿中氧化應(yīng)激因子含量比較空白組、白及顆粒各劑量組肺勻漿中SOD、CAT及GSH-Px含量均明顯高于模型組, 且白及顆粒高劑量組上述因子含量均明顯高于白及顆粒低劑量組，但白及顆粒各劑量組各因子含量均明顯低于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表3。

組別nSODCATGSH-Px空白組8112.13±9.29①22.60±2.11①182.12±24.23①模型組851.22±6.306.89±0.6171.77±33.80白及顆粒低劑量組873.34±6.85①③11.36±1.15①③92.14±9.98①③白及顆粒中劑量組881.31±8.02①③15.92±1.47①③119.24±11.03①③白及顆粒高劑量組8100.39±9.16①②③17.69±1.54①②③157.45±15.32①②③

注:①與模型組比較，P<0.05；②與白及顆粒低劑量組比較，P<0.05；③與空白組比較，P<0.05。

2.4各組家兔肺組織病理學(xué)比較 HE染色顯示，空白組家兔肺組織結(jié)構(gòu)清晰完整，肺泡壁光滑且肺泡腔無(wú)白細(xì)胞及滲出液；模型組家兔肺泡腔中存在大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡壁增厚且充血嚴(yán)重，肺泡間隔不均；白及顆粒各劑量組家兔肺泡均呈不同程度的萎陷、組織水腫及炎性浸潤(rùn)，但程度明顯輕于模型組，且白及顆粒高劑量組明顯輕于中劑量組和低劑量組，而中劑量組明顯輕于低劑量組。見圖1～5。

3 討 論

鹽酸吸入性肺損傷是臨床麻醉及昏迷患者常見的并發(fā)癥之一，其主要發(fā)病機(jī)制為胃液倒吸入肺后，胃液中主要成分鹽酸對(duì)肺組織產(chǎn)生直接損傷，誘導(dǎo)患者肺血管內(nèi)皮及肺泡內(nèi)炎性細(xì)胞大量分泌并釋放白細(xì)胞介素等各類型炎性遞質(zhì)，激活中性粒細(xì)胞及多形核白細(xì)胞并聚集于肺組織中，產(chǎn)生大量的活性氧自由基及蛋白酶等物質(zhì)，導(dǎo)致患者肺部出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，最終引起肺水腫、肺部氧合功能障礙及頑固性低氧等，直接威脅患者生命[9-11]。目前，臨床對(duì)于該疾病并無(wú)根治方法，常采用糖皮質(zhì)激素及外源性肺泡表面活性物質(zhì)等進(jìn)行治療。Holms等[12]認(rèn)為，可在鹽酸吸入性肺損傷高危人群中先使用藥物對(duì)可能發(fā)生的疾病進(jìn)行預(yù)防，并通過(guò)該預(yù)防方法減輕鹽酸吸入后所產(chǎn)生的肺部損傷。

圖1 空白組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖2 模型組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖3 白及顆粒低劑量組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖4 白及顆粒中劑量組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

圖5 白及顆粒高劑量組家兔肺組織HE染色(HE，×400)

白及顆粒主要由白及、百合、海浮石、浙貝母、紫菀、百部、三七、桔梗、功勞木及甘草等藥材組成?，F(xiàn)代藥學(xué)研究結(jié)果表明，白及中所含白及多糖具有較好的抗氧化應(yīng)激活性，可有效緩解組織損傷[13]；百合中百合多糖則可抗炎、抗氧化，改善局部微循環(huán)[14]；浙貝母中多類黃酮成分能夠有效增加肺組織對(duì)局部炎性反應(yīng)的耐受性[15]；三七中三七皂苷則可增加機(jī)體SOD等抗氧化應(yīng)激因子的合成，改善氧自由基對(duì)損傷肺組織的損害[16]。鑒于白及顆粒具有較好的抗炎、抗氧化應(yīng)激及肺部保護(hù)活性的化學(xué)成分基礎(chǔ)，筆者對(duì)其用于鹽酸吸入性肺損傷的預(yù)防作用進(jìn)行了探討。

本研究采用的新西蘭家兔模型是鹽酸吸入性肺損傷的常用模型，與小鼠及大鼠相比較，盡管實(shí)驗(yàn)成本增加，但具有更好的可操作性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為準(zhǔn)確[17]。目前研究表明，急性肺損傷后，肺部CRP、IL-6及TNF-α等炎性因子的含量急劇增高，可進(jìn)一步介導(dǎo)肺組織中脂類遞質(zhì)及氧自由基的釋放，加速肺損傷[18]。SOD、CAT及GSH-Px均是機(jī)體重要的氧化應(yīng)激指標(biāo)，可有效清除機(jī)體氧自由基，緩解由于氧自由基所造成的機(jī)體損傷[19]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，白及顆粒各劑量組p(CO2)和肺勻漿中IL-6、TNF-α、CRP含量均明顯低于模型組，p(O2)、pH和肺勻漿中SOD、CAT、GSH-Px含量均明顯高于模型組，且白及顆粒高劑量組p(CO2)和肺勻漿中IL-6、TNF-α、CRP含量均明顯低于白及顆粒低劑量組，p(O2)、pH和肺勻漿中SOD、CAT、GSH-Px含量均明顯高于白及顆粒低劑量組；肺組織病理切片觀察顯示白及顆粒各劑量組肺損傷情況明顯輕于模型組。提示白及顆?？深A(yù)防鹽酸吸入所致炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激紊亂及肺部損傷。然而其具體作用機(jī)制尚不明確，預(yù)防效果的有效成分亦未研究清楚，對(duì)于藥物的物質(zhì)基礎(chǔ)還有待進(jìn)一步探索；另外本研究?jī)H對(duì)該藥物的預(yù)防作用進(jìn)行了探討，而對(duì)于其治療作用則未進(jìn)行探討，與臨床實(shí)際應(yīng)用仍存在著一定的差距，后續(xù)還需要對(duì)白及顆粒用于鹽酸吸入性肺損傷治療作用及其給藥方式進(jìn)行進(jìn)一步研究。