脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體1在不同病程糖尿病大鼠心肌缺血預(yù)適應(yīng)中的變化*

郭竹英， 徐芒華， 赫 瑋， 王世婷△

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院1檢驗科，2實驗中心，上海 201900)

隨著臨床冠脈溶栓術(shù)、經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)和動脈搭橋等手術(shù)的發(fā)展，缺血再灌注(ischemia-reperfusion, IR)損傷在臨床中十分常見且難以避免，是影響缺血性疾病治療效果的重要因素。糖尿病(diabetes mellitus，DM)患者心肌梗死的發(fā)病率明顯高于非糖尿病患者，如何預(yù)防與治療糖尿病患者的IR損傷越來越受到人們的關(guān)注。1986年Murry等[1]提出心肌缺血預(yù)適應(yīng)(ischemic preconditioning，IPC)的概念，即預(yù)先1次或反復(fù)短時間缺血可以對隨后長時間缺血再灌注損傷的心肌產(chǎn)生保護(hù)作用，是一種有效的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制。此后，大量實驗證實IPC在心肌缺血再灌注損傷中具有減少心肌梗死面積、降低心律失常發(fā)生率和保護(hù)心肌舒縮功能的作用，這種被大量實驗證實有效的缺血再灌注心肌保護(hù)方法在糖尿病動物模型上卻出現(xiàn)了不同的結(jié)果[2]:早期輕度糖尿病的心肌通過上調(diào)PI3K/Akt信號通路，使細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)而表現(xiàn)出對IR敏感性降低,損傷減輕[3];但隨著誘導(dǎo)時間的延長，心肌細(xì)胞對IR損傷敏感性增高[4]，IPC的心肌保護(hù)效果明顯減弱。而我們在1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)模型大鼠離體心臟實驗中發(fā)現(xiàn)T1DM大鼠4周時對IR損傷的耐受性增強(qiáng)，IPC保護(hù)作用弱于對應(yīng)的正常大鼠,8周時IPC保護(hù)作用消失[5]。糖尿病的持續(xù)時間可能是影響心肌對IR損傷敏感性和IPC保護(hù)作用的重要因素。

脂聯(lián)素(adiponectin，APN)基因是Scherer等[6]于1995年對小鼠3T3-L脂肪細(xì)胞cDNA測序時發(fā)現(xiàn)的一段新序列，有研究表明敲除APN基因的大鼠心肌細(xì)胞IR損傷加重，心肌梗死面積明顯擴(kuò)大[7-8];在正常和糖尿病鼠轉(zhuǎn)染APN后，IR損傷所致的心肌梗死面積及心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均降低[9-10]，因此APN在正常和DM鼠IR損傷心肌中均具有保護(hù)作用，但在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)中APN的這種心肌保護(hù)作用降低[11]。脂聯(lián)素的這些效應(yīng)必須通過脂聯(lián)素受體的介導(dǎo)來完成。2003年Yamauchi等[12]從Ba/F3細(xì)胞中提取出APN特異性受體的cDNA，把其編碼的2種蛋白質(zhì)分別命名為脂聯(lián)素受體1(adiponectin receptor 1，Ad-R1)和脂聯(lián)素受體2(adiponectin receptor 2，Ad-R2), Ad-R1主要分布在骨骼肌和心肌，Ad-R2主要分布在肝組織，脂聯(lián)素通過結(jié)合脂聯(lián)素受體發(fā)揮其作用。雖然Ad-R1和Ad-R2已被克隆，研究表明這些受體的刺激與葡萄糖穩(wěn)態(tài)有關(guān)[13]，但關(guān)于Ad-R在糖尿病IR和IPC中的表達(dá)變化及其與APN在兩類糖尿病大鼠的心肌IR損傷和IPC保護(hù)中的作用差異研究較少。

因此本研究制備T1DM和T2DM模型大鼠，觀察不同病程對DM大鼠IPC的影響， 并探討心肌APN與Ad-R1在1型及2型糖尿病大鼠心肌IR損傷和IPC保護(hù)作用中的變化，為更好地判斷糖尿病心血管疾病預(yù)后及治療提供實驗依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1動物及飼料 選取8～10周齡清潔級Sprague-Dawley (SD)大鼠250只，體質(zhì)量(192±23) g，雌雄兼用，生產(chǎn)許可證：西普爾-必凱實驗動物有限公司 SCXK(滬)2003-0002，自由飲食，在室溫20～23 ℃、濕度45%條件下飼養(yǎng)，實驗前在恒溫室[(20±3) ℃]飼養(yǎng)適應(yīng)1周，選出生長正常的健康動物。高脂飼料購自上海斯萊克實驗動物有限公司，含豬油15%、蛋黃粉10%、膽固醇2%、膽酸0.02%和基礎(chǔ)飼料72.98%，脂肪供能比為48%。

1.2主要試劑 鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)購自Sigma (Cat: S0130)；兔抗大鼠脂聯(lián)素受體1抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司(Cat: bs-0610R)；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG (H+L) II抗購自Jackson ImmuoResearch (Cat: 111-035-003)；Wes-tern blot化學(xué)發(fā)光試劑盒購自Millipore (Cat： WBKLS0100)；大鼠胰島素檢測試劑盒購自Mercodia (Cat: 16070)；脂聯(lián)素檢測試劑盒購自Assaypro (Cat： ERA2500-1)。

2 方法

2.1DM動物模型制備和采血 T1DM組：85只SD大鼠普通飼料喂養(yǎng) 1 個月，禁食12 h后腹腔注射高劑量STZ(0.1 mol/L，枸櫞酸緩沖液溶解)，60 mg/kg，繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，72 h后空腹剪尾采血，采用OneTouch血糖測定儀(LifeScan)測定血糖，血糖大于16.7 mmol/L，持續(xù)1周以上，并出現(xiàn)糖尿病“三多一少”癥狀(多飲、多食、多尿、體重減輕)定為造模成功，繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)；T2DM組：85只SD大鼠用高脂飲食喂養(yǎng)1個月后，禁食12 h，腹腔注射低劑量STZ(0.1 mol/L，枸櫞酸緩沖液溶解)35 mg/kg，72 h后空腹剪尾采血測定血糖，血糖大于16.7 mmol/L，持續(xù)1周以上，胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)高為造模成功，繼續(xù)高脂飲食喂養(yǎng)；正常對照(normal)組：取SD大鼠80只，用普通飼料喂養(yǎng)，腹腔注射等量枸櫞酸緩沖液。每2周空腹后剪尾采血測定血糖并測體重1 次，3組大鼠分別在注射STZ和枸櫞酸緩沖液后4周和8周眼眶靜脈叢采集血樣分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆?，離心后測定胰島素和脂聯(lián)素。所有大鼠專人飼養(yǎng)，自由飲食、飲水，不給予胰島素等降糖治療。

2.2DM動物模型分組 大鼠注射STZ和枸櫞酸緩沖液4周及8周后，將成功建模的大鼠再分為4周和8周組,共6組，每組剔去一般情況特別不好的大鼠，進(jìn)一步篩選出40只備用以防Langendorff方法建立離體心臟體外灌流模型時偶爾的不成功；在進(jìn)行Langendorff灌流時normal、T1DM和T2DM這3組大鼠再分別隨機(jī)分為對照(control, Con)組、IR組和IPC組，確保每個亞組有12只大鼠，其中6只大鼠心臟用于心肌梗死面積測定，6只用于制備組織勻漿。

2.3Langendorff方法建立離體心臟體外灌流模型 取出心臟立即放入0～4 ℃ Krebs-Henseleit (K-H)液中，輕輕擠壓心臟，排空心臟內(nèi)殘留的血液，將主動脈固定于灌流裝置中的心臟套管上，立即用95%O2+5%CO2飽和的K-H液進(jìn)行逆行灌流。K-H液的成分為(mmol/L)： NaCl 118.4， KC1 4.7， MgSO41.1， KH2PO41.18， NaHCO324.5， CaCl22.55， glucose 1.1， pH 7.4。富氧灌流液充以95%O2+5%CO2混合氣體，乏氧灌流液充以95%N2+5%CO2混合氣體。IR組心臟富氧灌流液灌流15 min(預(yù)灌)，乏氧灌流液灌流30 min(缺血)，富氧灌流液再灌流40 min(再灌注)；IPC組心臟預(yù)灌后，乏氧灌流液灌流5 min(短暫缺血)，富氧灌流液灌流5 min(短暫復(fù)灌)，重復(fù)3次，再行長時間缺血再灌注處理(同IR組)； Con組大鼠心臟富氧灌流液灌流100 min。

2.4血清胰島素水平測定 胰島素檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，按試劑盒操作說明檢測，并計算HOMA-IR，其計算公式為：HOMA-IR=空腹血糖水平(mmol/L)×空腹胰島素水平(mU/L)/22.5。

2.5血清脂聯(lián)素水平測定 采用ELISA方法按照試劑盒(Cat： ERA2500-1； Lot： 031101003)說明檢測大鼠血清脂聯(lián)素水平,按1∶500稀釋血清標(biāo)本，用Model 680型酶標(biāo)儀(Bio-Rad)讀取450 nm處的吸光度。

2.6灌流冠脈流出液肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性測定 根據(jù)前期預(yù)實驗結(jié)果，收集各組大鼠最后一次再灌流(40 min再灌注)期間10 min這一時點的冠脈流出液，采用速率法在LX20型全自動生化分析儀(Beckman Coulter)上測定冠脈流出液中CK和LDH的活性。

2.7左心室乳頭肌超微結(jié)構(gòu)改變 每組隨機(jī)選取1只大鼠，再灌注結(jié)束后，將表面水分吸除后將心室腔暴露，用夾子夾住并取左室乳頭肌，之后用2.5%戊二醛和1%鋨酸固定，進(jìn)一步脫水、包埋、切成超薄切片，然后隨機(jī)選取一部分用醋酸雙氧鈾-枸櫞酸鉛染色。H-7500型透射電鏡(Hitachi)觀察超薄切片，拍照并觀察乳頭肌超微結(jié)構(gòu)。

2.8心肌梗死區(qū)域面積的測定 采用四唑氮藍(lán)(nitroblue tetrazolium，NBT)染色法測量心肌梗死面積。每組隨機(jī)選6只大鼠，灌注結(jié)束后剪去心房，吸干心臟表面水分，置于-20 ℃冰箱1 h后取出，趁未解凍前將心臟從心尖向心底方向切片，每片厚約3 mm，浸于pH 7.4、0.25%的NBT磷酸鹽緩沖液中，放入37 ℃恒溫水浴箱孵育10 min，其間每分鐘攪拌1次，非梗死區(qū)染為藍(lán)色，梗死區(qū)不染色。隨后置于10%甲醛溶液固定約20 min。將處理后的切片固定于2層樹脂玻璃中間并拍照，之后采用Image Tool軟件計算心肌梗死區(qū)域所占比例。

2.9心肌組織勻漿的制備 每組隨機(jī)選6只大鼠，再灌注結(jié)束后剪去心房，吸干心臟表面水分后，稱取100～200 mg組織,剪成小塊,置于2.0 mL EP管中，用預(yù)冷PBS洗滌1～2次，按照1 ∶9的比例加入PBS制備勻漿，-80 ℃保存用于檢測APN和Ad-R1表達(dá)水平。

2.10心肌組織APN水平檢測 取上述組織勻漿，4 ℃、500×g離心3 min，上清用于ELISA檢測，按照大鼠ELISA試劑盒說明書檢測上清液中脂聯(lián)素水平。上清液用樣本稀釋液1∶50稀釋，Model 680型酶標(biāo)儀讀取450 nm處的吸光度(A)值。

2.11心肌組織Ad-R1水平檢測 取大鼠心肌組織的勻漿樣本進(jìn)行Western blot。目的蛋白的I 抗稀釋度為1 ∶400，抗GAPDH的 I 抗稀釋度為1∶6 000，4 ℃過夜，II 抗[山羊抗兔IgG(H+L)，稀釋度為1 ∶2 000] 室溫振蕩孵育2 h，洗滌后顯影。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)對各條帶的總灰度值作相對定量比較分析。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0進(jìn)行正態(tài)性檢驗、方差齊性檢驗和單因素方差分析(one-way ANOVA)，各組間兩兩比較用Bonferroni校正的t檢驗。以P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 T1DM和T2DM大鼠模型制備和血清脂聯(lián)素水平

如表1所示，T1DM大鼠血糖≥16.7 mmol/L，體重較正常大鼠減輕，表明造模成功；T2DM大鼠血糖≥16.7 mmol/L，HOAM IR明顯高于正常和T1DM大鼠，說明造模成功；糖尿病大鼠血清APN水平明顯低于正常組，尤以T2DM為低。

表1 DM模型制備后各組大鼠體重、血糖、血清胰島素和血清APN水平以及HOMA-IR的變化

*P<0.05vsnormal group.

2 離體心臟灌流冠脈流出液中LDH與CK活性情況

如圖1所示，與Con組相比，IR組大鼠(包括normal、T1DM和T2DM)心臟冠脈流出液中的LDH和CK活性顯著增加(P<0.01)；糖尿病大鼠(包括T1DM和T2DM)4周時，IPC組較IR組的LDH和CK活性顯著降低(P<0.01)，而8周時兩組LDH和CK活性的差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性。

Figure 1. The changes of LDH (A) and CK (B) released in coronary effluent after reperfusion in all groups. Mean±SD.n=12.**P<0.01 Con group;##P<0.01vsIR group.

3 左室乳頭肌超微結(jié)構(gòu)改變

電鏡下可見normal大鼠Con組左室乳頭肌線粒體、核膜完整，嵴清晰，肌小節(jié)完整，肌絲排列整齊；糖尿病大鼠8周 時Con組部分線粒體輕度腫脹，可見收縮帶或空泡，而IR組表現(xiàn)為線粒體腫脹，呈空泡狀，嵴消失或變形，肌絲溶解甚至消失，肌小節(jié)結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞核內(nèi)染色體核邊聚等改變；normal大鼠IPC組較糖尿病IPC組線粒體上述改變均有不同程度的改善，見圖2。

4 實驗大鼠心肌梗死區(qū)域面積的改變

在normal、T1DM和T2DM大鼠IR組的心肌梗死區(qū)域面積較對應(yīng)的Con組均顯著增加(P<0.01)；T1DM和T2DM大鼠4周時的IPC組較IR組心肌梗死區(qū)域面積顯著降低(P<0.01)，而8周時，IPC組較IR組心肌梗死區(qū)域面積略有降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性,見圖3。

Figure 2. Transmission electron microscopic images of left ventricular papillary muscles from the rats in all groups at 8 weeks. Scale bar=2 μm.

5 實驗大鼠心肌組織APN含量的改變

Normal和T1DM大鼠Con、IR和IPC各組的心肌組織脂聯(lián)素含量均無改變；但T2DM大鼠IR組的心肌組織脂聯(lián)素含量在4和8周時均較Con組明顯減少(P<0.01)，T2DM大鼠IPC組4周時的脂聯(lián)素含量明顯高于IR組(P<0.05)，而8周時2組結(jié)果的差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性,見圖4。

6 大鼠心肌組織Ad-R1表達(dá)水平

Western blot結(jié)果顯示，normal大鼠Con、IR和IPC各組的心肌組織Ad-R1表達(dá)量均無改變；而T1DM大鼠中， IR組4周和8周的心肌組織Ad-R1表達(dá)量較Con組明顯增加(P<0.01)，IPC組較對應(yīng)IR組Ad-R1表達(dá)量降低(P<0.01)；同樣，在T2DM大鼠，IR組4周和8周的心肌組織Ad-R1表達(dá)量較Con組明顯增加(P<0.01)，而IPC組4周較對應(yīng)IR組Ad-R1表達(dá)量降低(P<0.01)，8周時2組Ad-R1表達(dá)量的差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性，見圖5。

討 論

心肌缺血預(yù)適應(yīng)是心肌經(jīng)過幾次反復(fù)短暫的缺血后，對隨后長時間持續(xù)性缺血損傷耐受性增強(qiáng)的一種適應(yīng)性機(jī)制，是防止心肌IR損傷的有效方法[14]，目前研究[15]認(rèn)為IPC是心臟的一種自我保護(hù)機(jī)制，可觸發(fā)心臟在缺血早期釋放某些內(nèi)源性活性物質(zhì)，經(jīng)中介物激活效應(yīng)物，通過細(xì)胞內(nèi)多介質(zhì)多途徑的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)節(jié)心臟功能。本研究結(jié)果顯示無論是T1DM還是T2DM模型大鼠，4周時IR組的LDH及CK活性和心梗面積均較各自的Con組顯著增加，4周時IPC組中各損傷指標(biāo)較IR組明顯回落，而8周時IPC組各指標(biāo)較對應(yīng)的IR組無明顯差異，表明T1DM和T2DM模型大鼠在4周時有IPC保護(hù)作用，但到8周時這種保護(hù)作用基本消失；normal組大鼠4周和8周時IPC組的LDH與CK活性、心肌超微結(jié)構(gòu)改變及心肌梗死面積較對應(yīng)的IR組均有明顯改變，normal組大鼠始終存在IPC保護(hù)。進(jìn)一步分析實驗數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，DM大鼠4周時IR組的LDH和CK活性及心肌梗死面積都小于normal大鼠4周的IR組我們曾報道的超微結(jié)構(gòu)也顯示T1DM大鼠4周時IR組的心肌線粒體明顯腫脹，部分肌絲溶解、肌小節(jié)結(jié)構(gòu)破壞，但損傷程度較大鼠4周時IR組輕[5]，與本次T2DM大鼠4周時的結(jié)果相似。以上結(jié)果提示1型和2型糖尿病早期如4周時其本身所致的較輕的心肌損傷都可能是一種預(yù)適應(yīng)，可減輕IR損傷。糖尿病早期對抗IR損傷的耐受力增強(qiáng)，隨著糖尿病病程的延長，其心肌對IR損傷的抵抗作用減弱。根據(jù)這一現(xiàn)象，Hadour等[16]推測機(jī)體在糖尿病早期可能產(chǎn)生了“代謝預(yù)適應(yīng)”，這種適應(yīng)在糖尿病早期發(fā)揮了抗氧化、抗凋亡、保護(hù)心肌的作用。隨著糖尿病時間的延長，其本身所致的心肌損傷也加重，IPC保護(hù)作用消失(DM大鼠8周時IPC組電鏡所示的心肌超微結(jié)構(gòu)損傷與相應(yīng)IR組近似)。長期高脂環(huán)境引起能量代謝障礙，心肌耗氧量增高和心肌細(xì)胞衰老導(dǎo)致對缺血缺氧的耐受力下降，而在缺血再灌注過程中，大量氧自由基和炎癥因子的釋放,使體內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡，使心肌處于氧化應(yīng)激狀態(tài)而加重了糖尿病患者心肌的IR損傷。有研究表明老年鼠由于心臟氧化應(yīng)激水平增加，致線粒體損傷和細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致心臟IPC保護(hù)作用減弱[17]。DM大鼠隨著時間延長，eNOS表達(dá)上調(diào)，氧化應(yīng)激增加，細(xì)胞凋亡[4]。這種氧化應(yīng)激通路的變化是DM大鼠8周時IPC保護(hù)作用減弱或消失的原因之一。

Figure 3. The changes of myocardial infarct area in all groups. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCon group;##P<0.01vsIR group.

Figure 4. The changes of APN levels in the cardiac tissue in all groups. Mean±SD.n=6.** P<0.01vsCon group;##P<0.05vsIR group.

脂聯(lián)素是脂肪組織分泌的一種脂肪細(xì)胞因子，在血清中含量豐富，與肥胖、脂代謝異常及T2DM的抗心肌IR損傷等密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞等均可分泌APN[18]。當(dāng)在體心臟發(fā)生IR損傷時血清APN通過結(jié)合受體發(fā)揮抗心肌IR損傷等作用，當(dāng)離體心臟IR損傷時心肌局部分泌具有生物活性的APN，保護(hù)心肌免受IR損傷，其機(jī)制與Ad-R1變化和降低氧化硝化應(yīng)激有關(guān)[8]。我們檢測了心臟離體實驗前血清APN含量和離體實驗后心肌組織APN含量和Ad-R1蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示，normal組大鼠心肌APN和Ad-R1經(jīng)IR和IPC處理后較Con處理無變化，說明心肌APN和Ad-R1不參與正常大鼠離體心臟的IR損傷和IPC保護(hù)作用。T1DM組大鼠血清APN較正常大鼠降低，離體心臟行IR處理后較Con組心肌APN無變化，但心肌Ad-R1表達(dá)較Con組升高。這種升高可能與血清APN下降有關(guān)。APN由脂肪組織分泌，T1DM大鼠體重下降、脂肪組織減少而導(dǎo)致血清APN減少；當(dāng)行離體心臟IR處理時，心肌分泌APN又沒有變化，可能導(dǎo)致心肌本身通過升高Ad-R1表達(dá)來對抗IR損傷；當(dāng)行IPC處理時心肌損傷較IR組輕，心肌Ad-R1表達(dá)較IR組減少，IPC組的Ad-R1表達(dá)量較IR組顯著降低，同時結(jié)合T1DM離體心臟經(jīng)IR和IPC處理其心肌APN含量均無變化，推測T1DM離體心臟早期IPC保護(hù)作用與心肌分泌APN無關(guān)，但可能與心肌Ad-R1有一定關(guān)聯(lián)。有研究報道在T1DM心肌細(xì)胞Ad-R1表達(dá)隨著糖尿病持續(xù)時間而變化，低脂聯(lián)素血癥是T1DM小鼠IR損傷的主要原因[10, 19]。T2DM組大鼠血清APN較正常和T1DM大鼠更為降低，離體心臟行IR處理后較Con組心肌APN明顯減少，心肌Ad-R1表達(dá)升高，4周時大鼠心肌APN含量IPC組較IR組明顯回升，Ad-R1較IR組顯著下降，8周大鼠IPC組較IR組心肌APN含量和Ad-R1表達(dá)均無變化。這些結(jié)果提示4周時T2DM大鼠IR損傷與心肌APN含量下降有關(guān)，心肌分泌的APN參與了T2DM大鼠早期的IPC保護(hù)作用。T2DM大鼠心肌APN與Ad-R1表達(dá)量變化關(guān)系提示，4周時T2DM大鼠經(jīng)IR處理，Ad-R1代償性升高以彌補(bǔ)APN含量的下降所致的心肌損傷，推測T2DM大鼠IR處理本身產(chǎn)生了心肌局部的低脂聯(lián)素癥；而IPC組較IR組心肌Ad-R1表達(dá)水平下降考慮與心肌APN含量較高足以維持心肌保護(hù)作用有關(guān)，推測IPC處理可改善IR處理所致的局部低脂聯(lián)素癥。隨著病程延長，8周時T2DM大鼠血清和心肌APN含量進(jìn)一步降低，Ad-R1的調(diào)節(jié)功能衰退，最終導(dǎo)致IPC保護(hù)作用消失。有研究表明心肌APN和Ad-R1蛋白表達(dá)下降以及胰島素抵抗促進(jìn)2型糖尿病心肌病的發(fā)生發(fā)展[20]，這可能是后期T2DM大鼠心肌IPC保護(hù)作用減弱甚至消失的因素之一。

Figure 5. The changes of Ad-R1 levels in cardiac tissue in all groups. Mean±SD.n=6.**P<0.01vsCon group;##P<0.01vsIR group.

綜上所述，在1型和2型糖尿病大鼠，糖尿病本身可致心肌損傷，早期產(chǎn)生“預(yù)適應(yīng)”保護(hù)作用，對IR損傷的耐受性較正常大鼠增強(qiáng)，且隨著時間的延長這種損傷逐漸加重，在4周糖尿病心臟IPC具有一定的保護(hù)作用但弱于正常大鼠，到了8周，糖尿病心臟對缺血耐受性差，IPC保護(hù)作用基本消失。T1DM離體心臟早期IPC保護(hù)作用與心肌分泌APN無關(guān)，但可能與心肌Ad-R1有一定關(guān)聯(lián)。T2DM大鼠IR處理本身導(dǎo)致心肌局部的低脂聯(lián)素癥，早期IPC處理可改善這種局部低脂聯(lián)素癥。心肌組織APN和Ad-R1在T2DM早期抗心肌IR損傷中發(fā)揮重要作用，參與了T2DM大鼠的IPC保護(hù)作用，提示APN可能就是T2DM心肌在缺血早期釋放的內(nèi)源性活性物質(zhì)之一。