高效液相色譜法測定頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量

王妍

摘 要：頭孢氨芐為半合成頭孢菌素類廣譜抗生素。頭孢氨芐的作用機制是抑制細菌細胞壁的合成。方法：采用安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm），水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），檢測波長為254nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量測定。

關(guān)鍵詞：頭孢氨芐干混懸劑；含量；測定

頭孢氨芐化學(xué)名為（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。頭孢氨芐為半合成頭孢菌素類廣譜抗生素。頭孢氨芐抗菌譜與頭孢噻吩相似，除腸球菌屬、甲氧西林耐藥葡萄球菌外，多數(shù)革蘭陽性球菌對本品敏感。

頭孢氨芐干混懸劑適用于敏感細菌所致的輕、中度急性扁桃體炎、咽峽炎、中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等呼吸道感染、尿路感染和皮膚軟組織感染等。頭孢氨芐的測定方法較多[1-5]。本實驗采用高效液相色譜法對頭孢氨芐干混懸劑中的頭孢氨芐的進行了含量測定。

1儀器與試藥

1.1儀器：液相柱溫箱（滕州市滕海分析儀器有限公司）；TH-UP實驗室專用高純水機（滕州市滕海分析儀器有限公司）；德安特分析天平 0.1mg（上海升徽電子有限公司）；精密電子天平（廈門德量檢測儀器有限公司）；HS11-1電熱恒溫水浴鍋（上海昨非實驗室設(shè)備有限公司）；Waters2695高效液相色譜儀（北京京科瑞達科技有限公司）；721可見光分光光度計（四川賽恩思儀器有限公司）；SB25-12D超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2色譜柱：安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：青霉素 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4試劑：甲醇（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、三乙胺（濟南匯豐達化工有限公司）、乙腈（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、磷酸二氫鈉（濟南匯豐達化工有限公司）、冰醋酸（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、醋酸鈉（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、醋酸（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、磷酸（濟南匯豐達化工有限公司）。甲基纖維素（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、枸櫞酸（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、枸櫞酸鈉（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、檸檬黃（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、香精（湖北武漢新河生物工程有限責(zé)任公司）、蔗糖（湖北武漢新河生物工程有限責(zé)任公司）。

1.5試藥：頭孢氨芐干混懸劑

2測定方法確定

2.1色譜條件

頭孢氨芐水溶液在pH8.5以下較穩(wěn)定。依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動相：水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），檢測波長：254nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按頭孢氨芐峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取頭孢氨芐對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取頭孢氨芐干混懸劑適量，研細，精密稱取，加5毫升流動相，超聲2分鐘，過濾，濾液轉(zhuǎn)移至10毫升容量瓶內(nèi)，即得。

2.4專屬性試驗

取甲基纖維素、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、檸檬黃、香精、蔗糖等制成陰性樣品，依上述方法測定，結(jié)果在頭孢氨芐出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗

精密稱取頭孢氨芐對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.89%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取頭孢氨芐對照品20mg，置250ml容量瓶中，加入流動相溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5、1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。結(jié)果表明，頭孢氨芐在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7準(zhǔn)確度試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的頭孢氨芐對照品，上述方法進行測定，計算回收率，平均回收率為99.1%，RSD=0.99%。結(jié)果表明此方法的回收率良好。

3結(jié)論

頭孢氨芐干混懸劑適用于流行性感冒，氣腫疽、惡性水腫、壞死桿菌病、等所引起的敗血性高熱（41～43℃）或持續(xù)低溫（37℃以下）等，是臨床常用藥物。本實驗分別考察磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10），甲醇-0.2%磷酸溶液（40：60），甲醇-水（67：33），乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液 （pH 6.5）（36：64），水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）不同比例的流動相，結(jié)果以水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）為流動相。本實驗表明此方法可用于頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量測定。頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量為標(biāo)示量的95-105%。

參考文獻：

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[3]張??；王長遠；劉琦；郭鑫金；蒼健；孟強；Taiichi Kaku；劉克辛；JBP485與頭孢氨芐相互作用的藥動學(xué)研究[A]；第九屆全國藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會議論文集[C]；2009年

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