不同炮制方法對北柴胡中柴胡皂苷d的含量影響

董金石

摘 要：本文對不同炮制工藝對北柴胡中成分含量的影響進(jìn)行研究。固定相為：依利特hypersil BDS C18色譜柱（4.6*250*5u），以乙腈、水梯度洗脫為流動相，檢測波長為203nm；柴胡皂苷d在50～950μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。本法簡便、重現(xiàn)性好、回收率高，可用于不同北柴胡炮制品中柴胡皂苷d的含量測定。

關(guān)鍵詞：北柴胡；炮制；測定

北柴胡（BupleurumchinenseDC.）別名：硬苗柴胡（東北藥用植物圖志）、竹葉柴胡（植物名實圖考）、韭葉柴胡（安徽）、津柴胡等。北柴胡分布于我國東北、華北、華東、中南、西南及陜西、甘肅等地。柴胡屬多年生草本藥用植物，能解表和里、升陽、疏肝解郁。柴胡主治感冒、上呼吸道感染、肋痛、肝炎、膽道感染、膽囊炎、瘧疾、寒熱往來、脫肛等?！侗静菡x》記載：“約而言之，柴胡主治，止有二層，一為邪實，則為外邪之在半表半里者，引而出之，使達(dá)于表而外邪自發(fā)；一為正虛，則為清氣之陷于陰分者，舉而升之，使返其宅，胃中氣自振。”本文對不同炮制工藝對北柴胡中成分含量的影響進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器RephiLe Direct-Pure Genie 超純水系統(tǒng)（上海樂楓生物科技有限公司）；LC3000分析等度高效液相系統(tǒng)（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；德國美諾G7883實驗室清洗消毒機(jī)（科德恩（北京）科技發(fā)展有限公司）；HX-06超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；TGF-9075A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海喆圖科學(xué)儀器有限公司）；普利賽斯 EP125SM 電子天平（上海天美天平儀器有限公司）。

1.2 試藥：三乙胺（天津市康科德科技有限公司）、冰乙酸（山東佳泰石油化工有限公司）、乙腈（成都三維化工有限責(zé)任公司）、磷酸（濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工有限公司）、鹽酸（濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工有限公司）、甲醇（濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工有限公司）、磷酸氫二銨（天津市康科德科技有限公司）、冰醋酸（天津市康科德科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u）；流動相以乙腈為A，水為B，按下表梯度洗脫；檢測波長為203nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按柴胡皂苷d峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2 炮制品的制備

2.2.1 醋制。柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥，加醋拌勻，燜透，置鍋內(nèi)，用文火炒干，取出，放涼。每公斤柴胡，用醋0.2公斤。

2.2.2 鱉血制。柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥，置大盆內(nèi)，淋入用溫水少許稀釋的鱉血，拌勻，燜潤，置鍋內(nèi)用文火微炒，取出，放涼。每公斤柴胡，用活鱉2個取血。

2.2.3 酒制。取柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥，用黃酒拌勻，燜潤手誘，置鍋內(nèi)用文火加熱炒干，取出，放涼。每公斤柴胡，用黃酒0.1公斤。

2.2.4 炒制。柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥，用文火炒至微焦，取出，放涼。

2.2.5 制炭。柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥，用文火炒至外黑內(nèi)褐黃色，噴入少量水，取出，晾干。

2.2.6 蜜制。柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥.取蜜置鍋內(nèi)，加熱至沸，倒入柴胡片，用文火炒至深黃，不粘手為度。

2.2.7 蜜麩制。柴胡除去雜質(zhì)及殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥.將麥麩炒熱，加入蜂蜜，炒至不粘手時，加入柴胡片，炒至藥材表面顯黃色為度，取出，過篩，晾涼。每公斤柴胡，用麥麩0.03公斤，蜂蜜0.01公斤。

2.3 供試品溶液的制備

取北柴胡適量，粉碎成粗粉，精密稱定至容量瓶內(nèi)，加適量5%濃氨試液的甲醇流動相超聲20分鐘，放涼，過濾，用甲醇多次沖洗殘渣和容器，將沖洗液和濾液合并，水浴蒸干，殘渣用50%乙腈溶解并轉(zhuǎn)移至10毫升容量瓶內(nèi)，用50%乙腈定容，過0.45μm的濾膜，即得。

2.4 對照品溶液的制備

精密稱取柴胡皂苷d對照品約10mg，置5毫升棕色容量瓶中，用流動相超聲波振蕩溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1毫升，置10毫升棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含柴胡皂苷d 200μg）。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為50μg·mL-1、150μg·mL-1、250μg·mL-1、350μg·mL-1、450μg·mL-1、550μg·mL-1、650μg·mL-1、750μg·mL-1、850μg·mL-1、950μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。試驗表明，柴胡皂苷d對照品在50～950μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

精密吸取柴胡皂苷d對照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.69%。結(jié)果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批北柴胡樣品6份，分別制備成供試品，按色譜條件測定含量，并計算樣品的RSD值為0.63%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別在0，1，2，3，4h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測定，供試品柴胡皂苷d峰面積積分值的RSD為0.56%。結(jié)果表明柴胡皂苷d至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定北柴胡三批樣品中柴胡皂苷d的含量，結(jié)果柴胡皂苷d含量生柴胡〉蜜麩制〉蜜制〉醋制〉酒制〉鱉血制〉炒制〉制炭。

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