白鮮皮中脂肪酸類成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

楊圣財，王劍麗，李 正，鄭 暢，王 濤，張 祎

（天津中醫(yī)藥大學,天津市中藥化學與分析重點實驗室，天津 300193）

白鮮皮是白鮮（Dictamnus dasycarpus Turcz.）的干燥根皮，其主要成分為萜、檸檬苦素、生物堿、脂肪酸等化學成分，首錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》中品系列，性苦、寒，歸脾、胃、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕、祛風解毒之功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，白鮮皮具有抗菌、抗腫瘤、抗炎、抗變態(tài)反應、抗?jié)?、抗冠狀動脈粥樣硬化及保護肝臟、神經(jīng)等多種生理活性[2]。作者采用多種色譜法相結(jié)合，對白鮮皮70%乙醇提取物的化學成分進行分離制備，并利用與文獻[3-4]類似的方法，鑒定了5個脂肪酸類化合物，分別為亞油酸（1）、1-O-linoleoyl-glycerol（2）、油酸（3）、棕櫚酸（4）、α-棕櫚酸單甘油酯（5）。其中2為首次從白鮮屬中分離得到，5為首次從該植物中分離得到的化合物。圖1。

1 儀器與材料

Bruker 500MR超導核磁共振波譜儀（德國Bruker公司，AvanceⅢ 500 MR），安捷倫 6520系列四級桿-飛行時間質(zhì)譜儀（美國Aglient公司，6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS）。正相柱色譜用硅膠（48～75 μm），高效液相色譜法用分析柱以及制備柱型號分別為 [Cosmosil 5C18-MS-II（250 mm×4.6 mm，5 μm）及（250 mm × 20 mm，5 μm），Cosmosil PBr（250 mm×4.6 mm，5 μm）及（250 mm×20 mm，5 μm），日本 Nacalai Tesque公司]，氘代試劑（北京崇熙科技孵化器公司）。分析/色譜純氯仿、乙酸乙酯、石油醚、正己烷、甲醇、乙腈、冰醋酸等試劑購自天津康科德科技有限公司。白鮮皮購自于河北安國，由天津中醫(yī)藥大學李天祥教授鑒定為白鮮屬植物白鮮（Dictamnus dasycarpus Turcz.）的干燥根皮。標本保存于天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究中心。

圖1 化合物1-5的結(jié)構(gòu)

2 提取與分離

取干燥白鮮皮（9.0 kg），用70%乙醇溶液加熱回流提取，減壓回收溶劑，得浸膏1 910.1 g。取浸膏1 725.3 g溶于水，用EtOAc-H2O萃取，得到EtOAc和H2O層萃取物分別為267.3 g和1454.9 g。EtOAc層萃取物（175.0 g）經(jīng)硅膠柱層析 [正己烷-乙酸乙酯（100∶1 → 20∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 3∶1 → 1∶1 → 0∶1，v/v）→ MeOH]，得到 10 個組分（Fr.E1～Fr.E10）。FractionE5（3.9g）經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備[MeOH-H2O（90∶10，v/v）5C18-MS-II柱]，得到 10個組分（Fr.E5-1～5-10）。Fraction E5-8（190.0 mg）經(jīng) PHPLC 分離制備 [MeOH-H2O（88∶12，v/v）+1%HAc，PBr柱]，得到棕櫚酸（4，57.2 mg）和油酸（3，32.3 mg）。Fraction E6（13.0 g）經(jīng)硅膠柱層析[石油醚-氯仿（1∶1 → 1∶5，V/V）→ 氯仿-丙酮（100∶0→ 100∶1 → 100∶2 →0∶100，V/V）]，得到 5 個組分（Fr.E6-1～Fr.E6-5）。Fraction E6-3（3.4 g）經(jīng) PHPLC 分離制備 [MeOH-H2O（85∶15，v/v），PBr柱]，得到 8 個組分（Fr.E6-3-1～Fr.E6-3-8）。Fraction E6-3-6（107.3 mg）經(jīng) PHPLC 分離制備 [MeOH-H2O（90∶10，V/V），PBr柱]，得亞油酸（1，34.5 mg）。Fraction E8（37.0 g）經(jīng)正己烷溶解后離心，將上清液（35.1 g）經(jīng)硅膠柱層析[石油醚-乙酸乙酯（5∶1 → 3∶1 → 2∶1 →1∶1 → 0∶1，V/V）]，得到 9 個組分（Fr.E8-2-1～Fr.E8-2-9）。Fraction E8-2-6（7.1 g）經(jīng)硅膠柱層析 [石油醚-乙酸乙酯（5∶1 → 4∶1 → 3∶1 → 2∶1 → 1∶1 → 0∶1，V/V）→ 甲醇]，得 8 個組分（Fr.E8-2-6-1～Fr.E8-2-6-8）。Fraction E8-2-6-4（3.5 g）經(jīng) PHPLC 分離制備[MeOH-H2O（85∶15，V/V），5C18-MS-II柱]，得到 10個組分（Fr.E8-2-6-4-1～Fr.E8-2-6-4-10）。Fraction E8-2-6-4-6（50.1 mg）與 E8-2-6-4-7（66.7 mg）分別經(jīng) PHPLC 分離制備 [MeOH-H2O（90∶10，V/V），5C18-MS-II 柱]，得到 1-O-linoleoyl-glycerol（2，33.5 mg）和 α-棕櫚酸單甘油酯（5，29.5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色油狀固體。高分辨Q-TOF-ESIMS給出其準分子離子峰m/z 279.2324[M-H]-（calcd for C18H31O2，279.2330），確定其分子式為 C18H32O2。1H NMR（CDCl3，500 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 2.33（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.63（2H，m，H2-3），1.32（10H，m，H2-4～7 and 15），2.05（4H，m，H2-8 and 14），5.37（2H，m，H-9 and 13），5.34（1H，m，overlapped，H-10），2.77（2H，t，J=7.0 Hz，H2-11），5.34（1H，m，overlapped，H-12），1.28（2H，m，H2-16），1.27（2H，m，H2-17），0.89 （3H，t，J=6.5 Hz，H3-18）。13C NMR（CDCl3，125 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 180.0（C-1），34.2（C-2），24.8（C-3），29.1～29.6（C-4～7 and 15），27.2（C-8 and 14），130.2（C-9 and 13），128.1（C-10），25.7（C-11），127.9（C-12），31.6（C-16），22.6（C-17），14.1（C-18）。C-8和C-14的化學位移為27.2，確定其構(gòu)型為9Z，12Z[5-6]。其1H、13C NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[14]中報道的亞油酸基本一致，故鑒定化合物1為亞油酸（linoleic acid）。

化合物2：黃色油狀固體。高分辨Q-TOF-ESIMS給出其準分子離子峰m/z 433.1956[M+Br]-（calcd for C21H38O4Br，433.1959），確定其分子式為C21H38O4。1H NMR（C5D5N，500 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 2.34（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.63 （2H，m，H2-3），1.14～1.28（6H，m，H2-4～6），1.34（2H，m，H2-7），2.08（2H，m，H2-8），5.47（2H，m，H-9 and 13），5.48（2H，m，H-10 and 12），2.91（2H，t，J=5.5 Hz，H2-11），2.11（2H，m，H2-14），1.36（2H，m，H2-15），1.26（2H，m，overlapped，H-16 and 17），0.86（3H，t，J=7.5 Hz，H3-18），[4.63 （1H，dd，J=6.5、11.0 Hz），4.70（1H，dd，J=4.5、11.0 Hz），H2-1']，4.44（1H，m，H-2'），4.11（2H，d，J=5.5 Hz，H2-3'）。13C NMR（C5D5N，125 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 173.7（C-1），34.4（C-2），25.3（C-3），29.4（C-4 and 6），29.5（C-5），29.9（C-7），27.5（C-8 and 14），130.4（C-9 and 13），128.4（C-10 and 12），26.0（C-11），29.6（C-15），31.7（C-16），22.8（C-17），14.2（C-18），66.8（C-1'），70.9（C-2'），64.3（C-3'）。C-8和C-14的化學位移為27.5，確定其構(gòu)型為9Z，12Z[12-13]。其1H、13C NMR 譜數(shù)據(jù)與文獻[17]相對照，鑒定該化合物為1-O-linoleoyl-glycerol。

化合物3：黃色油狀固體。高分辨Q-TOF-ESIMS給出其準分子離子峰m/z 281.2475[M-H]-（calcd for C18H33O2，281.2486），確定其分子式為 C18H34O2。1H NMR（C5D5N，500 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 2.51（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.79 （2H，m，H2-3），1.24～1.40（16H，m，H2-4～7 and 12～15），2.09（4H，m，H2-8 and 11），5.47（2H，m，H-9 and 10），1.24（2H，m，overlapped，H2-16），1.24（2H，m，overlapped，H2-17），0.87（3H，t，J=6.5 Hz，H3-18）。13C NMR（C5D5N，125 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 176.1（C-1），34.9（C-2），25.7（C-3），29.5～30.1（C-4～7 and 12～15），27.5（C-8 and 11），130.2（C-9 and 10），32.1（C-16），22.9（C-17），14.3（C-18）。C-8和C-11的化學位移為27.5，確定其構(gòu)型為9Z[5-6]。其1H、13C NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[6]相對照，鑒定該化合物為油酸（oleic acid）。

化合物4：白色固體。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 255.2325[M-H]-（calcd for C16H31O2，255.2330），確定其分子式為 C16H32O2。1H NMR（C5D5N，500 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 2.51（2H，t，J=7.0 Hz，H2-2），1.79（2H，m，H2-3），1.20～1.41（20H，m，overlapped，H2-4～13），1.25 （2H，m，H2-14），1.24（2H，m，H2-15），0.87 （3H，t，J=7.0 Hz，H3-16）。13C NMR（C5D3N，125 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 176.0（C-1），34.9（C-2），25.7（C-3），29.6～30.0（C-4～13），32.2（C-14），23.0（C-15），14.3（C-16）。該化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1D NMR及包括1H1H COSY、HSQC及HMBC在內(nèi)的2D NMR譜的解析，鑒定為棕櫚酸（palmitic acid）[9]。

化合物5：白色固體。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 365.2474[M+Cl]-calcd for C19H38O4Cl，365.2464），確定其分子式為 C19H38O4。1H NMR（C5D5N，500 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 2.37（2H，t，J=7.5 Hz，H2-2），1.66（2H，m，H2-3），1.21～1.26（24H，m，overlapped，H2-4～H2-15），0.89（3H，t，J=7.0 Hz，H3-16），[4.66 （1H，dd，J=5.5、11.0 Hz），4.73（1H，dd，J=4.5、11.0 Hz），H2-1']，4.47（1H，m，H-2'），4.13 （2H，d，J=5.5 Hz，H2-3'）。13C NMR（C5D5N，125 MHz）譜數(shù)據(jù)：δ 173.7（C-1），34.4（C-2），25.3（C-3），29.4～30.0（C-4～C-13），32.2（C-14），22.9（C-15），14.3（C-16），66.8（C-1'），70.9（C-2'），64.3（C-3'）。其1H、13C NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[10]相對照，并結(jié)合2D NMR的解析，鑒定該化合物為α-棕櫚酸單甘油酯（glyceryl α-mono-palmitate）。

4 總結(jié)與討論

由于傳統(tǒng)中藥多采取水煎的服藥方法，脂肪酸的藥理作用長期以來未得到足夠的重視。近年來，隨著對脂肪酸成分研究的不斷深入，其抑菌、抗炎、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、抗氧化以及調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活性陸續(xù)被挖掘出來。本課題以白鮮皮為例，對其中的脂肪酸類化合物進行了初步化學成分研究，以期為后續(xù)藥理學研究奠定了物質(zhì)基礎。