巴戟天寡糖對大鼠子宮缺血再灌注損傷的抗炎作用*

程亮星(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院《腫瘤基礎(chǔ)與臨床》編輯部，河南 鄭州 450052)

子宮缺血再灌注損傷是臨床常見的子宮不可逆性損傷，嚴(yán)重者可能會影響子宮正常受孕和生育等功能[1]。炎癥反應(yīng)被證實在多種器官或組織的缺血再灌注損傷過程中發(fā)揮重要作用。因此，通過減輕子宮缺血再灌注損傷過程中的炎癥反應(yīng)可能起到保護(hù)子宮缺血再灌注損傷的作用。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)和白介素-8(interleukin-8，IL-8)是重要的炎癥反應(yīng)因子，在炎癥反應(yīng)過程中這些因子的過表達(dá)均可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加重[2-3]。巴戟天寡糖提取自補(bǔ)腎壯陽中藥巴戟天的肉質(zhì)根，研究證實其具有提高免疫力、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、抗氧化、抗凋亡等藥理學(xué)作用，在多種器官或組織的缺血再灌注損傷過程中具有對抗損傷的作用[4-6]。為尋找新型的能高效干預(yù)子宮缺血再灌注損傷的藥物，本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，觀察了巴戟天寡糖對子宮缺血再灌注損傷過程中炎癥反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1 動 物

50只SPF級健康雌性Wistar大鼠，均為6月齡，體質(zhì)量(378±23)g，購自河南省實驗動物中心，并飼養(yǎng)于該中心，動物合格證號為SCXK(豫)2010-0002。

1.2 藥品、試劑與儀器

巴戟天寡糖由河南大學(xué)藥學(xué)院提取，具體方法參照文獻(xiàn)[7]。TNF-α、IL-1β和IL-6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒，均購自美國RD公司，批號依次為SRTA00、SRLB00、SR6000B；IL-8 ELISA試劑盒，購自美國MyBioSource公司，批號為MBS282844)。SynergyTM H1型全自動酶聯(lián)免疫分析儀，美國BioTek公司產(chǎn)品；Biofuge Stratos臺式高速低溫離心機(jī)，德國Heraeus公司產(chǎn)品。

1.3 動物分組與給藥方法

將50只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型對照組，巴戟天寡糖低、中、高劑量組5組，每組10只。巴戟天寡糖低、中、高劑量組按體質(zhì)量依次給予質(zhì)量分?jǐn)?shù)70，140，280 g/L巴戟天寡糖液10 μL/g灌胃，假手術(shù)組和模型對照組按體質(zhì)量給予10 μL/g雙蒸水灌胃，每天1次，連用7 d。

1.4 大鼠子宮缺血再灌注損傷模型的建立

各組大鼠末次給藥后1 h采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型[2]：以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10 g/L的戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口；經(jīng)大隱靜脈注射50 u /kg肝素鈉；鈍性分離腹主動脈，在髂總動脈分叉處上0.5 cm處結(jié)扎腹主動脈(假手術(shù)組大鼠僅穿線，不結(jié)扎)，結(jié)扎30 min；解除結(jié)扎線，復(fù)灌60 min；采用過量戊巴比妥鈉麻醉，使大鼠死亡；取出子宮，于-80 ℃冰箱中保存。

1.5 檢測指標(biāo)

每例子宮標(biāo)本稱取100 mg，制成生理鹽水勻漿，4 ℃、4 000 r/min離心15 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

與假手術(shù)組對比，模型對照組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組對比，巴戟天寡糖3個劑量組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。巴戟天寡糖3個劑量組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平兩兩對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

組 別TNF-α/(ng·g-1)IL-1β/(ng·g-1)IL-6/(ng·g-1)IL-8/(ng·g-1) 假手術(shù)組31．82±3．6019．41±2．5155．04±5．0443．57±4．25 模型對照組74．04±3．75??49．65±4．37??132．84±8．51??112．64±6．22?? 巴戟天寡糖高劑量組39．81±2．71##25．88±2．63##78．39±4．57##66．39±4．94## 巴戟天寡糖中劑量組46．13±3．39##△△31．13±2．42##△△93．23±3．90##△△78．02±3．73##△△ 巴戟天寡糖低劑量組53．55±4．57##△△＊＊34．71±2．26##△△＊＊101．81±7．22##△△＊＊87．83±6．77##△△＊＊ F193．714148．916222．766231．929 P<0．001<0．001<0．001<0．001

注：與假手術(shù)組對比，**P< 0.01；與模型對照組對比，##P< 0.01；與巴戟天寡糖高劑量組對比，△△P< 0.01；與巴戟天寡糖中劑量組對比，＊＊P< 0.01

3 討 論

炎癥反應(yīng)是一種常見的病理生理現(xiàn)象，是由眾多炎癥因子共同作用而產(chǎn)生的。炎癥反應(yīng)廣泛參與衰老、腫瘤、心肌梗死、腦梗死等多種疾病的疾病進(jìn)展過程。在心、腦、腎、肝、肺等多種器官或組織的缺血再灌注損傷過程中也有炎癥反應(yīng)的存在，許多炎癥因子已經(jīng)被證實在這一過程中水平明顯升高[5-6]。TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8均屬于炎癥因子，其水平的高低間接反映了炎癥反應(yīng)的程度。有研究[7]證實：在心肌缺血再灌注損傷的過程中，TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，而IL-10的水平則明顯升高，并且這一現(xiàn)象能夠被藥物干預(yù)。目前，關(guān)于抗缺血再灌注損傷藥物的研究是這一領(lǐng)域的熱點問題，而炎癥反應(yīng)已經(jīng)被證實參與了多種器官或組織的缺血再灌注損傷，并且這一過程能夠被藥物干預(yù)，也就是說通過抗炎能夠?qū)谷毖俟嘧p傷的進(jìn)展[8]。本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，觀察巴戟天寡糖干預(yù)對子宮缺血再灌注損傷過程中炎癥反應(yīng)的影響，初步探討巴戟天寡糖用于對抗缺血再灌注損傷的可能性。

本研究結(jié)果顯示：與假手術(shù)組對比，模型對照組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平升高(P<0.05)，提示子宮經(jīng)過缺血再灌注的過程，出現(xiàn)了炎癥反應(yīng)。與模型對照組對比，巴戟天寡糖3個劑量組的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平降低(P<0.05)，表明巴戟天寡糖用于子宮缺血再灌注損傷模型，能夠改善其炎癥反應(yīng)的損傷。巴戟天寡糖3個劑量組的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平兩兩對比差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且隨著巴戟天寡糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，炎癥因子的水平降低，表明巴戟天寡糖具有劑量依賴性的抗炎作用。

綜上所述，巴戟天寡糖能夠減輕子宮缺血再灌注損傷后的炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮保護(hù)子宮免受缺血再灌注損傷的作用。

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*基金項目：河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計劃項目(201702092)