芻議姜黃素逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥性與P—gp ATP酶活性的關(guān)系研究

王煉詞

【摘要】姜黃素是目前受世界各國(guó)科學(xué)家非常關(guān)注的一個(gè)藥物，也是世界各國(guó)花大量人力財(cái)力來(lái)開(kāi)發(fā)和研究的一個(gè)藥物。中國(guó)人從古代就開(kāi)始使用中藥姜黃來(lái)治療各種疾病。本文主要從三個(gè)方面進(jìn)行分析了姜黃素逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥性與P-gp ATP酶活性的關(guān)系研究。

【關(guān)鍵詞】姜黃素 肝癌多藥耐藥性 P-gp ATP酶活性 研究

一、姜黃素逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥性與P-gp ATP酶活性的關(guān)系研究的重要意義

惡性腫瘤是危害人類(lèi)健康最嚴(yán)重的一類(lèi)疾病，尋找高效低毒的抗腫瘤藥物對(duì)提高化學(xué)治療水平具有重要意義。

姜黃素是從姜黃中提取的一種植物多酚，以往研究表明姜黃素具有多種藥理活性，如抗炎、抗病毒、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤等。據(jù)臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，姜黃素是有效的抗突變劑，也是抗促癌劑。以前的研究在姜黃素抗腫瘤轉(zhuǎn)移方面?zhèn)戎赜趯?duì)血道轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞的研究，但尚未見(jiàn)對(duì)小鼠腹水型肝癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移影響的報(bào)道。本篇文章主要從姜黃素逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥性與P-gpATP酶活性的關(guān)系研究進(jìn)行了探討分析，同時(shí)對(duì)姜黃素抗腫瘤作用機(jī)理進(jìn)行初步的探討。因此，此處研究既有理論意義，又有潛在的應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)也為開(kāi)發(fā)價(jià)格低廉、高效低毒的天然抗腫瘤藥物提供了可靠的理論依據(jù)。

二、姜黃素的主要功效以及藥用價(jià)值

（1）姜黃素與癌癥之間的關(guān)系。姜黃素可以有效治療大多數(shù)癌癥及其它炎性誘發(fā)的疾病。經(jīng)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素能阻斷結(jié)腸癌蛋白質(zhì)一一皮層蛋白。皮層蛋白對(duì)于癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)是必需的蛋白質(zhì)，它經(jīng)常在癌癥中過(guò)度表達(dá)，從而促使癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到身體其他器官。姜黃素是姜黃的活性成分，已被科學(xué)研究用于許多類(lèi)型癌癥的治療。

姜黃素已被證明具有癌化學(xué)預(yù)防作用，能扭轉(zhuǎn)，抑制或阻止癌癥發(fā)展的能力。新的研究發(fā)現(xiàn)了姜黃素阻止結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。姜黃素與沙利度胺合璧殺死癌細(xì)胞。

（2）姜黃素與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系。姜黃素類(lèi)似物可有效抵御阿爾茲海默氏癥，能夠防治帕金森氏病，姜黃素或可開(kāi)發(fā)成治療老年癡呆癥藥物。含姜黃素藥物有助中風(fēng)病患腦細(xì)胞再生，姜黃素有助延長(zhǎng)壽命，利用姜黃發(fā)現(xiàn)延長(zhǎng)壽命及控制老化的現(xiàn)象。

（3）姜黃素在臨床實(shí)踐中的藥用價(jià)值。姜黃素也有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣泛的藥理作用：第一，姜黃素針對(duì)降血脂、抗氧化、抗發(fā)炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化等具有顯著的效果。第二，2004年時(shí)發(fā)現(xiàn)姜黃素能抑制HIV-1整合酶活性用于艾滋病的臨床試驗(yàn)。第三，抗癌是姜黃素的主要藥理活性之一，其抑制腫瘤的作用已在許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到反復(fù)證實(shí)，其具體抗癌機(jī)制已成為近期研究熱點(diǎn)。

三、姜黃素聯(lián)合FAP對(duì)于P-gp ATP酶活性的影響

研究姜黃素聯(lián)合FAP對(duì)于P-gp ATP酶活性的影響，進(jìn)一步探討MJ聯(lián)合FAP對(duì)肝癌多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制。該研究對(duì)進(jìn)一步揭示肝癌發(fā)病的分子機(jī)制、設(shè)計(jì)合理的治療藥物及判斷預(yù)后，提高我國(guó)肝癌的治療水平具有重要意義。

（1）細(xì)胞株與動(dòng)物。H22肝癌細(xì)胞株由本實(shí)驗(yàn)室保存，H22/FAP肝癌多藥耐藥細(xì)胞株由本實(shí)驗(yàn)室模擬臨床FAP方案，采用藥物ADR、CDDP、5-FU濃度梯度遞增誘導(dǎo)法誘導(dǎo)而成。

（2） MTT法檢測(cè)姜黃素、VER對(duì)H22/FAP的最大無(wú)毒劑量。抽取小鼠H22/FAP腹水瘤細(xì)胞，PBS洗2次，采用Ficoll -H ypaqie不連續(xù)密度梯度法，圓2000r/min，20min水平離心后收集Ficoll- Hypaqie液和細(xì)胞懸液間的腫瘤細(xì)胞。PBS洗1次，0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色，計(jì)活細(xì)胞率（藍(lán)染率

（3）耐藥倍數(shù)的測(cè)定和計(jì)算。用MTT法測(cè)定肝癌H22/FAP細(xì)胞對(duì)ADR、CDDP、5-FU的耐藥倍數(shù)。分別抽取H22肝癌敏感小鼠和H22/FAP肝癌多藥耐藥小鼠的腹水瘤細(xì)胞，按方法2處理制得H22和H22/FAP腫瘤細(xì)胞并培養(yǎng)細(xì)胞，然后依實(shí)驗(yàn)要求加入不同濃度測(cè)試藥物ADR、CDDP、5-FU，另設(shè)不加藥的空白對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)48h后，加入MTT和DMSO，490nm和630nm雙波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD），并計(jì)算耐藥倍數(shù)。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率%=（對(duì)照組吸光度平均值一加藥組吸光度平均值）/對(duì)照組吸光度平均值×100%；求出IC50；RI=A/B，A為化療藥物對(duì)H22/FAP瘤細(xì)胞的IC50值；B為化療藥物對(duì)H22瘤細(xì)胞的IC50值。

（4）質(zhì)膜的制備。BALB/c小鼠腹腔接種H22/FAP細(xì)胞（每只0.2ml，1×108/L），隨機(jī)分成9組，每組10只：①NS組；②FAP+姜黃素（20mg/Kg）組；③FAP+姜黃素（10mg/Kg）組；④FAP+姜黃素（5mg/Kg）組；⑤FAP+姜黃素（2.5mg/Kg）組；⑥FAP+VER（ 3.Omg/Kg）組；（0FAP+ VER（1.5mg/Kg）組；⑧FAP+VER（o.75mg/Kg）組；⑨FAP+VER（0.375mg/Kg）組；尾靜脈注射給藥，F(xiàn)AP給藥方案同“1.4”，7d后抽取腹水瘤，按照MTT法中的步驟制取腫瘤細(xì)胞，加入6ml裂解液，在4℃下孵育20min后，4000g下離心10min，收集上清，100000g下離心1h，取沉淀，加入含0.25mol/l蔗糖的裂解液，備用。

（5）P-gp ATP酶活性的測(cè)定。每只實(shí)驗(yàn)小鼠取20μg質(zhì)膜，加入以下試劑（mmol/l）：Tris-HCL 50μl（ pH6.8），二硫蘇糖醇2μl，Mgcl25μl，毒毛花苷?qǐng)A2μl（清除Na+，K+-ATP酶活性），依他酸2μl（清除Ca2+- ATP酶活性），疊氮化鈉5（清除線粒體ATP酶活性），然后加入Mg-ATP反應(yīng)開(kāi)始。加入Iml定磷試劑，37℃下反應(yīng)30min，以分光光度計(jì)測(cè)定720nm下吸光度（OD）值。

四、結(jié)論

發(fā)現(xiàn)不同濃度姜黃素對(duì)p-gp ATP酶的活性有影響！到目前為止，體外實(shí)驗(yàn)研究證明姜黃素能逆轉(zhuǎn)人類(lèi)癌癥耐藥細(xì)胞多藥耐藥性，但對(duì)于逆轉(zhuǎn)肝癌多藥耐藥的體內(nèi)研究，尤其通過(guò)影響P-gpATP酶活性的體內(nèi)研究比較少見(jiàn)。據(jù)臨床實(shí)踐觀察發(fā)現(xiàn)，肝癌患者更易對(duì)多柔比星、順鉑、5-氟尿嘧啶產(chǎn)生耐藥，通過(guò)建立BLAB/c小鼠肝癌多藥耐藥的模型，研究姜黃素聯(lián)合FAP對(duì)P-gp ATP酶活性的影響，深入探討MJ聯(lián)合FAP對(duì)肝癌多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

[1]梁華茂，姜潔，孔北華，等.Y-干擾素對(duì)姜黃素抑制人卵巢癌細(xì)胞株3AO增殖的影響，山東大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2002，40（4）：307-309.

[2]蔡永娥，喬建錦，孫曉茹，等.我國(guó)原發(fā)性肝癌研究進(jìn)展，現(xiàn)代腫瘤學(xué)，2008，16 （1）：141-143.

[3]崔淑香，金東慶，周玲，等，姜黃素抗腫瘤作用試驗(yàn)觀察，腫瘤防治雜志，2002，9（1）：50-52.