高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法分析煙草中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

劉曉婷 范保奎

摘 要：建立了一種高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定煙葉中甲胺磷、乙酰甲胺磷、樂果，敵百蟲、毒死蜱五種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法。樣品經(jīng)水和乙腈混合液提取，以石墨化炭黑（GCB）和N-丙基乙二胺（PSA）萃取凈化，應(yīng)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在多反應(yīng)監(jiān)測模式下進(jìn)行定性和定量分析。結(jié)果表明：該方法性范圍在5 ～ 200g/mL之間，線性關(guān)系良好（R ≥0.9984），回收率在88.4-106.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在3.9-6.9%之間，適用于煙葉中5種有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；串聯(lián)質(zhì)譜法；煙葉；有機(jī)磷農(nóng)藥

一、串聯(lián)質(zhì)譜法分析煙草中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的意義概述

農(nóng)藥殘留不僅關(guān)系到煙草制品的質(zhì)量安全，還會(huì)對(duì)壞境和消費(fèi)者健康造成影響。有機(jī)磷農(nóng)藥是一類廣譜性殺蟲劑，具有藥效高、用途廣、易分解等特點(diǎn)，在煙草中有著廣泛的應(yīng)用。有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測方法有氣相色譜法（GC）和氣相色譜 - 質(zhì)譜法（GC-MS）。近年來，隨著農(nóng)藥新品種的不斷出現(xiàn)，加上各種農(nóng)藥理化性質(zhì)差異較大，分析基質(zhì)復(fù)雜，氣相色譜法越來越不適應(yīng)。LC/MS具有很好的抗基質(zhì)干擾能力，且靈敏度較高，因此，有關(guān)LC-MS 法分析農(nóng)藥殘留的報(bào)道越來越多。本文建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測樂果，敵百蟲、毒死蜱等5種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，該方法前處理簡便、選擇性和靈敏度高，可滿足煙草中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測的需要。

二、材料和方法

1.材料試劑和儀器

20個(gè)國內(nèi)烤煙煙葉樣品。

乙腈、甲醇 、 甲胺磷、乙酰甲胺磷、樂果，敵百蟲、毒死蜱、氘代-4-甲基亞硝氨基吡啶基丁酮、PSA和GCB。

Agilent 1200高效液相色譜儀；API5500質(zhì)譜儀）；Milli-Q超純水儀；Sigma3-30K高速離心機(jī)；VX200 渦旋振蕩儀。

2.樣品的提取與凈化

準(zhǔn)確稱取研磨過得煙葉樣品2.00g于50ml具塞離心管中，加入10ml水充分浸潤樣品，靜置10min。加入10mL乙腈和100μL混合內(nèi)標(biāo)溶液，置于渦旋振蕩器以3000r/min振蕩3min。加入4g無水硫酸鎂、1g氯化鈉和1g檸檬酸鈉，在渦旋振蕩器以3000r/min振蕩3min。在10000rpm速度下離心5min，取1 mL清液放于1.5mL離心管中，加入200mg無水MgSO4、30mgPSA和30mgGCB，置于渦旋振蕩器上以3000r/min振蕩3min，再以10000r/min的速率離心5min。取上清液經(jīng)有機(jī)相濾膜過濾后進(jìn)行LC-MS/MS 分析。

3.分析條件

液相色譜條件：

AtlantisdC18柱；柱溫：30℃；流速：0.2mL/min；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相A為0.1%乙酸銨水溶液，流動(dòng)相B為0.1%乙酸銨水溶液 和甲醇 。在10min內(nèi)，流動(dòng)相A的比例從15%升至85%，于5min內(nèi)降至10%，保持5min。

質(zhì)譜條件：

離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正離子掃描；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測模式；電噴霧電壓：5500V；離子源溫度：500℃；碰撞氣：40kPa；氣簾氣：124kPa；霧化氣：324kPa；輔助氣：324kPa；采集時(shí)間：25s。

三、結(jié)果與討論

1.流動(dòng)相的選擇

液相色譜中常用的流動(dòng)相是甲醇和水，本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇-水（含0.1%乙酸銨 ）體系做流動(dòng)相。采用正離子模式檢測，在流動(dòng)相中加入乙酸銨有助于有機(jī)磷農(nóng)藥的離子化，提高分析的靈敏度，保持良好的峰形。實(shí)驗(yàn)顯示，甲醇-水（含0.1%乙酸銨）洗脫效果最佳。

2.質(zhì)譜條件選擇

用液相色譜法定量分析固體基質(zhì)中農(nóng)藥殘留時(shí)，基質(zhì)成分復(fù)雜，為消除干擾，實(shí)驗(yàn)采用串聯(lián)質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)分析了甲胺磷、乙酰甲胺磷、樂果、敵百蟲、毒死蜱等5種有機(jī)磷化合物的標(biāo)準(zhǔn)品，比較了各分析物的單標(biāo)和混標(biāo)的信號(hào)強(qiáng)度及峰面積，單標(biāo)和混標(biāo)的響應(yīng)值基本一致，表明這5種有機(jī)磷農(nóng)藥離子間的抑制作用很弱，在實(shí)驗(yàn)過程中可以采用多反應(yīng)監(jiān)測方法共同檢測。

采用流動(dòng)往射分析，以不同的錐孔電壓進(jìn)行正負(fù)離子掃描，發(fā)現(xiàn)在正離子模式下有較高的靈敏度，而且能得到豐度較高的準(zhǔn)分子離子峰和子離子峰。選擇子離子時(shí)，以豐度最大的碎片離子作為各化合物的子離子，發(fā)現(xiàn)去簇電壓和碰撞電壓對(duì)子離子峰的信號(hào)及豐度有顯著影響。調(diào)節(jié)各有機(jī)磷化合物及內(nèi)標(biāo)物的去簇電壓和碰撞電壓，以子離子的信號(hào)最強(qiáng)時(shí)所得的去簇電壓和碰撞電壓值作為最佳實(shí)驗(yàn)條件。5種有機(jī)磷農(nóng)藥的分子離子峰及選定的子離子峰見表1，5種化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)品見圖1。

3.線性范圍和檢出限

以甲醇為溶劑，用不含這幾種農(nóng)藥的煙草提取液配制質(zhì)量濃度為5、10、15、30、50、100、200ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，均含20ng/mL d4 -NNK（ （內(nèi)標(biāo)）。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，獲得校準(zhǔn)曲線。以信噪比的3倍計(jì)算檢出限。結(jié)果表明在 5～200g/mL范圍內(nèi)該方法線性關(guān)系良好，方法靈敏度高，相關(guān)系數(shù)（R）值均大于0.9984，具有較低檢測限，可滿足實(shí)際工作的需要。

4.方法的精確度和精密度

在空白煙樣中添加3個(gè)水平的5種農(nóng)藥混合標(biāo)樣，分別進(jìn)行6次平行測定，計(jì)算其加標(biāo)回收率和重復(fù)性，結(jié)果表明，回收率在88.4-106.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.9-6.9%之間，可以滿足定量需要。

5.實(shí)際樣品測定

測定了20種不同產(chǎn)地的煙葉樣品中5種有機(jī)磷農(nóng)藥的含量，結(jié)果表明樂果、甲胺磷以及乙酰甲胺磷未檢出，僅一種煙葉樣品中含有毒死蜱，含量為1.84ug/kg；在20種煙草樣品中均含有敵百蟲，平均含量為8.26ug/kg。

四、結(jié)論

本文建立了煙葉中五種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的分析方法，方法線性范圍在5～200ng/mL之間，線性關(guān)系好（R≥0.9984），回收率在88.4-106.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.9-6.9%之間，該方法快速、簡單、靈敏度高。

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