真菌DWL-C010的鑒定及其可溶性紅色素?zé)岱€(wěn)定性分析

馬博 張婷婷 吳寶祥

（百色學(xué)院農(nóng)業(yè)與食品工程學(xué)院，百色 533000）

色素能夠賦予食品不同顏色、影響消費(fèi)者選擇、激發(fā)消費(fèi)者食欲，是食品的加工生產(chǎn)和銷售過程中一個(gè)重要因素［1］。近年來，隨著消費(fèi)者逐漸認(rèn)識(shí)到合成色素存在潛在的致癌、致畸等副作用，而天然色素具有的抑菌、消炎、抗癌、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)等生物活性，使天然色素備受青睞［2-4］。據(jù)估計(jì)，國(guó)際食品色素市場(chǎng)值每年以10%-15%的速度增加，到2019年將達(dá)23.1億美元，而天然色素在2017年將達(dá)13.2億美元，超過合成色素市場(chǎng)份額［1，4］。可見，開發(fā)利用天然色素是當(dāng)前食品色素市場(chǎng)發(fā)展的必然趨勢(shì)。天然色素主要來源于動(dòng)物、植物及微生物，動(dòng)植物源天然色素依賴于原材料供給，品質(zhì)不易控制，而微生物源色素色譜范圍廣、生產(chǎn)不受季節(jié)氣候限制、原料廉價(jià)，且可以通過控制發(fā)酵參數(shù)來保證色素品質(zhì)［2，5-6］。絲狀真菌能夠合成包括類胡蘿卜素、醌類、聚酮類及其衍生物等多種不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的色素，如紅曲色素、Arpink redTM、β-類胡蘿卜素及核黃素等［7-9］。當(dāng)前，微生物發(fā)酵生產(chǎn)天然色素尚不成熟，其大規(guī)模生產(chǎn)仍是目前工業(yè)上面臨的最大挑戰(zhàn)，選育安全、高產(chǎn)及能夠利用廉價(jià)生產(chǎn)原料新型產(chǎn)色素菌種是今后研究的重點(diǎn)之一［4］。本研究從形態(tài)特征和多位點(diǎn)核酸序列兩個(gè)方面對(duì)來自廣西大王嶺自然保護(hù)區(qū)原始森林腐殖質(zhì)中的一株產(chǎn)可溶性色素真菌DWL-C010進(jìn)行鑒定，考察了其色素在不同溫度下的熱降解情況，并測(cè)定了該菌纖維素半纖維酶和淀粉糖化酶的酶活，以期為該菌的后續(xù)開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 由作者從百色大王嶺原始深林土壤中分離得到，編號(hào)為DWL-C010，保存于百色學(xué)院農(nóng)業(yè)與食品工程學(xué)院-80℃超低溫冰箱中。

1.1.2 培養(yǎng)基 查氏培養(yǎng)基（Czapek’s agar，CZ）、查氏酵母提取物培養(yǎng)基（CYA）、查氏酵母鹽培養(yǎng)基（YAS）、酵母提取物蔗糖培養(yǎng)基（YES）、PDA和PDB液體培養(yǎng)基；產(chǎn)酶培養(yǎng)基（g/L）：麥麩（過80 目 ）40，Avicel 10，KH2PO44，（NH4）SO44，MgSO4·7H2O 0.6，CaCl20.6，Tween-80 2，pH 6.5。

1.2 方法

1.2.1 形態(tài)觀察 分別在PDA、CYA、YES及CZ等4種培養(yǎng)基上3點(diǎn)接種，每點(diǎn)約2×106個(gè)孢子，于25℃恒溫培養(yǎng)7 d，測(cè)量菌落直徑并觀察菌落形態(tài)宏觀特征；采用插片培養(yǎng)，觀察顯微結(jié)構(gòu)和孢子特征。

1.2.2 分子鑒定

1.2.2.1 基因組DNA提取、PCR擴(kuò)增與測(cè)序 采用EP管液氮研磨法微量提取基因組DNA；濃度稀釋至50-100 ng/μL后，分別擴(kuò)增ITS序列、β-微管蛋白基因（BenA）、鈣調(diào)蛋白基因（CaM）、RNA聚合酶Ⅱ第二大亞基基因（RPB2）及RNA聚合酶Ⅱ大亞基基因（RPB1），引物如表1所示［10］。擴(kuò)增體系為25 μL，其中DNA模板、上游引物及下游引物各1.0 μL，PrimeSTAR Max DNA 聚合酶 12.5 μL，ddH2O 9.5 μL。PCR擴(kuò)增條件為94℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，退火30 s，72℃延伸30 s，30個(gè)循環(huán)后，72℃再延伸10 min；ITS、BenA及CaM退火溫度分別為60℃、55℃和50℃。RPB2和RPB1基因擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，48℃退火30 s，72℃延伸1 min，反應(yīng)5輪；后50℃退火，反應(yīng)5輪；再52℃退火，反應(yīng)25輪；最后72℃延伸10 min；擴(kuò)增結(jié)束后，取2.0 μL產(chǎn)物在0.8%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳檢測(cè)，后將PCR產(chǎn)物送華大基因有限公司進(jìn)行測(cè)序［11］。

表1 PCR擴(kuò)增和測(cè)序引物

1.2.2.2 測(cè)序數(shù)據(jù)分析 原始序列用DNAStar中的Seqman拼接，人工校對(duì)后遞交到GenBank獲取序列號(hào)。利用MEGA7.0.14對(duì)編輯好的相關(guān)序列進(jìn)行比對(duì)分析，分別用鄰接法（neighbor-joiningmethod，NJ）中的Kimura2-參數(shù)模型分別構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，空缺完全刪除，并進(jìn)行1 000次自舉分析（Bootstrap）置信度。

1.2.3 菌株DWL-C010色素?zé)岱€(wěn)定性分析

1.2.3.1 色素樣品制備 PDB液體培養(yǎng)基100 mL，接種量約1.0×108個(gè)孢子，160 r/min，28℃培養(yǎng)7 d后，培養(yǎng)基過濾除菌體，濾液10 000 r/min、4℃離心10 min。取上清液，按照1∶4（V/V）加入無水乙醇，4℃過夜醇沉，離心棄底部沉淀。醇沉后上清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，濃縮液即為色素樣品。

1.2.3.2 DWL-C010紅色素最大吸收波長(zhǎng)確定 色素原液用適當(dāng)稀釋后，在400-600 nm范圍內(nèi)掃描，記錄數(shù)據(jù)，繪制波普曲線，確定最大吸收波長(zhǎng)。

1.2.3.3 色素穩(wěn)定性分析 將色素濃縮液用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液適當(dāng)稀釋后，分別置于40、50、60、70和80℃水浴鍋中，連續(xù)熱處理6 h，每隔1 h測(cè)定OD，記作A，第0 h測(cè)得的OD記作A0。

1.2.3.4 DWL-C010色素?zé)峤鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)求解 研究表明，聚酮類色素?zé)峤到庾裱患?jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)規(guī)律［12-13］。DWL-C010色素?zé)峤馑俾食?shù)（Dc）可以通過方程（1）表示，通過邊界條件（即t=0時(shí)，A=A0；t=t時(shí)，A=A）可將方程（1）轉(zhuǎn)化為方程（2）：其Dc可通過做色素保留率對(duì)數(shù)與熱作用時(shí)間之間的函數(shù)求得。

其中，A為最大波長(zhǎng)下的吸光度，t為時(shí)間（h），Dc為熱降解速率常數(shù)（h-1）。

半衰期t1/2利用方程（3）計(jì)算，指數(shù)遞減時(shí)間（D）利用方程（4）計(jì)算，即：

色素降解溫度依賴性可以通過Arrhenius方程（5）表示，方程（5）可以線性化成方程（6）。根據(jù)不同溫度的Dc，以ln（Dc）對(duì)1/T作線性回歸，求出活化能Ea。

其中，D0為前指因子，Ea為活化能，R為氣體常數(shù)（8.314 J·mol-1·k-1），T為絕對(duì)溫度。1.2.4 菌株DWL-C010酶活測(cè)定

1.2.4.1 粗酶液制備 100 mL產(chǎn)酶培養(yǎng)基接種量同1.2.3.1，28℃、180 r/min培養(yǎng)至第3天開始取樣，至第8天結(jié)束，發(fā)酵液10 000 r/min、4℃離心10 min，取上清液作為粗酶液。

1.2.4.2 酶活測(cè)定 采用DNS比色法［14-15］。纖維素內(nèi)切酶和木聚糖酶活力定義為1 mL粗酶液在50℃，pH 5.0條件下，每分鐘催化底物產(chǎn)生1 μmoL還原糖量為1個(gè)活力單位（U/mL）；糖化酶活力定義為1 mL粗酶液在40℃，pH 4.6條件下，每分鐘催化可溶性淀粉產(chǎn)生1 μmoL葡萄糖為1個(gè)活力單位（U/mL）。

2 結(jié)果

2.1 菌株DWL-C010形態(tài)學(xué)特征

不同培養(yǎng)基上菌株DWL-C010的菌落大小和形態(tài)不同（圖1）。25℃培養(yǎng)7 d，PDA平板上菌落直徑32-34 mm；黃色邊緣，整齊，絨毛狀；中心餅狀凸起、絨狀；分泌橘紅色液體，呈同心圓狀；反面呈鮮紅色，具有可溶性紅色素。

YES培養(yǎng)基上菌落直徑23-24 mm；黃色邊緣，輻射狀凸起，中央呈火山口狀，菌絲絨毛狀，白色間有橘紅色；反面菌落暗紅色，輻射狀開裂；少量紅色素分泌至培養(yǎng)基中。

CYA培養(yǎng)基上菌落直徑22-24 mm；黃色邊緣1-3 mm，整齊；表面輻射狀褶皺；中心呈火山口狀，菌絲絨毛狀，黃色；反面菌落紅色；部分紅色素分泌到培養(yǎng)基中。

CZ培養(yǎng)基上菌落直徑9-13 mm；黃色邊緣1-2 mm，整齊；中心饅頭狀凸起，毯狀；有液體滲出；反面鮮紅色；大量紅色素分泌至培養(yǎng)基中。37℃培養(yǎng)時(shí)，CYA上不生長(zhǎng)。分生孢子梗有隔，壁平滑；帚狀枝二輪生；梗基3-8個(gè)；瓶梗針狀，每個(gè)梗基3-8個(gè)；分生孢子球狀或近球狀，2.3-3.6×1.8-2.5 μm?；谏鲜鲂螒B(tài)特征，結(jié)合Yilmaz等報(bào)道［16］，初步將菌株DWL-C010歸屬為藍(lán)狀菌。

圖1 菌株DWL-C010形態(tài)特征

2.2 菌株DWL-C010系統(tǒng)發(fā)育分析

ITS、RBP2、RBP1、BenA和CaM基 因 經(jīng) 過PCR擴(kuò)增、測(cè)序，得到序列長(zhǎng)度分別為521、852、826、327 和556 bp；在NCBI中的核酸數(shù)據(jù)庫中Blast發(fā)現(xiàn)，菌株DWL-C010的CaM基因序列與白二輪籃狀菌CBS133440的對(duì)應(yīng)核酸序列一致性為96%，而ITS序列、RBP2、RBP1和BenA基因序列一致性均高達(dá)99%。利用MEGA7.0中的ClustalW，將ITS、RBP2、RBP1、BenA和CaM序列分別與相關(guān)典型菌株對(duì)應(yīng)序列進(jìn)行多重比對(duì)，修剪后依次得到用于系統(tǒng)發(fā)育分析的序列長(zhǎng)度為407、651、493、327和388 bp。與白二輪藍(lán)狀菌典型菌株133440相比，比對(duì)堿基序列中ITS共發(fā)生4個(gè)點(diǎn)突變，轉(zhuǎn)換和顛換各占一半，均發(fā)生在轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)；RBP2共發(fā)生9個(gè)點(diǎn)突變，其中2個(gè)轉(zhuǎn)換，7個(gè)顛換，均為同義突變；RBP1共發(fā)生6個(gè)點(diǎn)突變，其中轉(zhuǎn)化5個(gè)，顛換1個(gè)，也均為同義突變；BenA共發(fā)生4個(gè)點(diǎn)突變，其中2個(gè)顛換位點(diǎn)和1個(gè)插入位點(diǎn)位于內(nèi)含子區(qū)，1個(gè)轉(zhuǎn)換位于外顯子區(qū)；CaM共發(fā)生20個(gè)點(diǎn)突變，13個(gè)轉(zhuǎn)化、5個(gè)顛倒及1個(gè)缺失突變位點(diǎn)在內(nèi)含子中，2個(gè)轉(zhuǎn)化和1個(gè)顛倒突變位點(diǎn)在外顯子中。5個(gè)基因位點(diǎn)的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果（圖2）表明，菌株DWL-C010均與白二輪籃狀菌CBS133440聚在一起，并且置信度均達(dá)到了100%，故將菌株DWL-C010鑒定為白二輪籃狀菌（T. albobiverticillius）。

2.3 菌株DWL-C010色素?zé)峤鈩?dòng)力學(xué)分析

2.3.1 菌株DWL-C010紅色素最大吸收峰的確定 稀釋后的紅色素溶液在400 nm到600 nm掃描，其波普如圖3-A所示。菌株DWL-C010紅色素吸光度先降低，在450 nm處開始升高，在495 nm處又開始降低，約在600 nm處開始趨于穩(wěn)定?？梢姡?95 nm是菌株DWL-C010紅色素的特征吸收峰。

2.3.2 菌株DWL-C010紅色素降解動(dòng)力學(xué)分析 分別在40、50、60、70和80℃5個(gè)溫度梯度下，每隔1 h測(cè)定其色素OD495，其色素保留率如圖3-B所示。從圖3-B可知，在40和50℃時(shí)，其紅色素降解緩慢；60℃開始，其色素保留率開始顯著降低，尤其在80℃時(shí)，其色素保留率急劇下降。通過做ln（A/A0）與時(shí)間的函數(shù)，進(jìn)行線性擬合，發(fā)現(xiàn)各溫度的回歸曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.95，符合一級(jí)動(dòng)力模型（圖3-C）。通過線性方程，可知各溫度下紅色素的熱降解速率常數(shù)Dc在每小時(shí)0.009 8-0.081 2之間（表2）；通過方程（3）和（4），可知其半衰期t1/2和指數(shù)遞減時(shí)間D分別在70.73 h-8.54 h和234.96 h-28.36 h。通過作ln（Dc）與時(shí)間倒數(shù)的函數(shù)，進(jìn)行曲線擬合，發(fā)現(xiàn)其線性良好（圖3-D），R2為0.970，求得菌株DWL-C010紅色素的活化能Ea為51.82 kJ·mol-1，前指因子自然對(duì)數(shù)為15.21。

2.4 白二輪藍(lán)狀菌DWL-C010產(chǎn)酶特性

白二輪藍(lán)狀菌DWL-C010具有一定的產(chǎn)糖化酶（Glucoamylase）、纖維素內(nèi)切酶（CMCase）和半纖維素酶的能力。其中，木聚糖酶（Xylanase）活最高，CMCase酶活次之，糖化酶酶活最低（圖4）。木聚糖酶酶活前5 d提升明顯，第6天達(dá)到最大酶33.098 U/mL；CMCase酶活除第3天外，其酶活均顯著高于糖化酶酶活（P＜0.05），但二者也在第6天酶活達(dá)到最大，分別為1.880 U/mL和0.976 U/mL；第6天以后，3種酶酶活均略有下降，這可能培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分耗盡和菌體自身裂解有關(guān)。

圖2 菌株DWL-C010的ITS序列（A）、RBP2（B）、RBP1（C）、BenA（D）和CaM（E）基因系統(tǒng)發(fā)育樹

3 討論

圖3 菌株DWL-C010紅色素?zé)峤鈩?dòng)力學(xué)分析

表2 白二輪藍(lán)狀菌DWL-C010紅色素?zé)峤到鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)

絲狀真菌色素是重要的天然色素來源之一。目前，報(bào)道的產(chǎn)色素絲狀真菌主要有青霉、擬青霉、曲霉、德氏霉、鐮刀菌、脈孢菌和藍(lán)狀菌等［8，17］。藍(lán)狀菌最初由Benjamin用于描述青霉菌屬的有性階段，后Yilmaz等［16］將藍(lán)狀菌和青霉雙輪亞屬合并單列一新屬。藍(lán)狀菌中，T. amestolkiae，T. ruber和T. stolii因產(chǎn)素色不能分泌到胞外而不利于下游分離純化，T. purpurogenus因產(chǎn)真菌毒素而不能用于工業(yè)生產(chǎn)，馬尼菲藍(lán)狀菌（T. marneffei）雖不產(chǎn)真菌毒素，但是機(jī)會(huì)致病菌，也不能用于生產(chǎn)食品添加劑［5，9，11］。然而，深玫色藍(lán)狀菌（T.atroroseus）和白二輪藍(lán)狀菌不僅能夠?qū)⑺a(chǎn)色素有效分泌胞外，且未見有產(chǎn)真菌毒素的報(bào)道，是潛在的紅色素工業(yè)化生產(chǎn)菌種［18］。Venkatachalam等［19］對(duì)來自海洋的一株白二輪藍(lán)狀菌色素成分進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)的12種化合物中4種為紅曲類色素，并首次報(bào)道了1種新化合物。本實(shí)驗(yàn)通過5個(gè)基因位點(diǎn)序列分析，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征，將菌株DWL-C010鑒定為白二輪藍(lán)狀菌。

圖4 白二輪藍(lán)狀菌DWL-C010不同發(fā)酵時(shí)間的酶活

穩(wěn)定性是色素性能的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。在食品加工過程中，熱處理是常用保鮮手段之一。為了考察菌株DWL-C010紅色素的熱穩(wěn)定性，利用一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型分析了其色素在40-80℃的降解情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在40℃時(shí)，其半衰期和指數(shù)遞減時(shí)間可分別長(zhǎng)達(dá)近3 d和10 d；在50℃時(shí)，其半衰期和指數(shù)遞減時(shí)間可分別長(zhǎng)達(dá)2 d和7 d之多；在高溫80℃時(shí)，其半衰期和指數(shù)遞減時(shí)間還可分別長(zhǎng)達(dá)8.54 h和28.36 h。同時(shí)，其紅色素活化能為51.82 kJ·mol-1，高于產(chǎn)紫青霉（P. purpurogenum）的42.4 kJ·mol-1［13］、 紅 曲 霉（Monascus ruber） 的 11.49 kcal·mol-1［12］和紫紅曲霉（M. purpureus）的 40.81 kJ·mol-1［20］?？梢?，菌株 DWL-C010 紅色素具有較好的熱穩(wěn)定性。

此外，微生物煉制色素以工農(nóng)業(yè)廢棄物、植物源淀粉及木質(zhì)纖維素等為底物，既能夠降低生產(chǎn)成本，又能處理廢棄物，防止環(huán)境污染。藍(lán)狀菌作為一類重要的工業(yè)用子囊菌，除了應(yīng)用于食品工業(yè)和生物防治外，還能夠分泌多種生物質(zhì)降解酶。如嗜松藍(lán)狀菌、T. funiculosus和T. cellulolyticus能夠纖維素酶，且嗜松藍(lán)狀菌還能產(chǎn)內(nèi)切葡糖苷酶和淀粉酶，T. leycettanus能產(chǎn)熱穩(wěn)定的木聚糖酶，T. lanuginosus能產(chǎn)糖化酶［16，21-23］。本實(shí)驗(yàn)以Avice為碳源，添加麥麩，對(duì)菌株DWL-C010進(jìn)行液體搖瓶培養(yǎng)，測(cè)得在第6天其糖化酶、纖維素內(nèi)切酶和半纖維素酶酶活最大，分別為0.976、1.880和33.098 U/mL，表明其具有一定的利用廉價(jià)生產(chǎn)原料潛力。

4 結(jié)論

從廣西大王嶺原始森林腐殖質(zhì)土壤中分離得到的一株產(chǎn)可溶性紅色素真菌DWL-C010，通過多基因位點(diǎn)序列分析，結(jié)合其形態(tài)學(xué)特征，將其鑒定為白二輪藍(lán)狀菌。其可溶性紅色素的特征吸收峰位于495 nm處，具有較好的熱穩(wěn)定性。在40-80℃時(shí)，其紅色素降解復(fù)合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型，其Ea為51.82 kJ·mol-1。另外，菌DWL-C010具有一定的產(chǎn)糖化酶、纖維素內(nèi)切酶和半纖維素酶能力?？梢?，菌株DWL-C010具有潛在的工業(yè)化生產(chǎn)價(jià)值，其紅色素在食品工業(yè)具有一定的應(yīng)用前景。

［1］ Martins N, Roriz CL, Morales P, et al. Food colorants：Challenges,opportunities and current desires of agro-industries to ensure consumer expectations and regulatory practices［J］. Trends in Food Science & Technology, 2016, 52：1-15.

［2］ Mapari SA, Thrane U, Meyer AS. Fungal polyketide azaphilone pigments as future natural food colorants？［J］. Trends Biotechnol, 2010, 28（6）：300-307.

［3］ Tuli HS, Chaudhary P, Beniwal V, et al. Microbial pigments as natural color sources：current trends and future perspectives［J］.J Food Sci Technol, 2015, 52（8）：4669-4678.

［4］ Nigam PS, Luke JS. Food additives：production of microbial pigments and their antioxidant properties［J］. Current Opinion in Food Science, 2016, 7：93-100.

［5］ Mapari SA, Nielsen KF, Larsen TO, et al. Exploring fungal biodiversity for the production of water-soluble pigments as potential natural food colorants［J］. Curr Opin Biotechnol, 2005, 16（2）：231-238.

［6］ Lopes FC, Tichota DM, Pereira JQ, et al. Pigment production by filamentous fungi on agro-industrial byproducts：an eco-friendly alternative［J］. Appl Biochem Biotechnol, 2013, 171（3）：616-625.

［7］ Dufosse L, Fouillaud M, Caro Y, et al. Filamentous fungi are largescale producers of pigments and colorants for the food industry［J］.Curr Opin Biotechnol, 2014, 26：56-61.

［8］ Lebeau J, Venkatachalam M, Fouillaud M, et al. Production and new extraction method of polyketide red pigments produced by ascomycetous fungi from terrestrial and marine habitats［J］.Journal of Fungi, 2017, 3（3）：34.

［9］ Rodriguez-Amaya DB. Natural food pigments and colorants［J］.Current Opinion in Food Science, 2016, 7：20-26.

［10］ Visagie CM, Houbraken J, Frisvad JC, et al. Identification and nomenclature of the genusPenicillium［J］. Stud Mycol, 2014,78：343-371.

［11］ Mapari SA, Meyer AS, Thrane U, et al. Identification of potentially safe promising fungal cell factories for the production of polyketide natural food colorants using chemotaxonomic rationale［J］.Microb Cell Fact, 2009, 8：24.

［12］ Vendruscolo F, Luise Müller B, Esteves Moritz D, et al. Thermal stability of natural pigments produced byMonascus ruberin submerged fermentation［J］. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2013, 2（3）：278-284.

［13］ Morales-Oyervides L, Oliveira JC, Sousa-Gallagher MJ, et al.Effect of heat exposure on the colour intensity of red pigments produced byPenicillium purpurogenumGH2［J］. Journal of Food Engineering, 2015, 164：21-29.

［14］ Jing L, Zhao S, Xue JL, et al. Isolation and characterization of a novelPenicillium oxalicumstrain Z1-3 with enhanced cellobiohydrolase production using cellulase-hydrolyzed sugarcane bagasse as carbon source［J］. Industrial Crops and Products,2015, 77：666-675.

［15］ GB1886. 174-2016, 食品工業(yè)用酶制劑［S］.

［16］ Yilmaz N, Visagie CM, Houbraken J, et al. Polyphasic taxonomy of the genus Talaromyces［J］. Studies in Mycology, 2014, 78 ：175-341.

［17］ Gmoser R, Ferreira JA, Lennartsson PR, et al. Filamentous ascomycetes fungi as a source of natural pigments［J］. Fungal Biology and Biotechnology, 2017, 4（1）：4.

［18］ Frisvad JC, Yilmaz N, Thrane U, et al.Talaromyces atroroseus,a new species efficiently producing industrially relevant red pigments［J］. PLoS One, 2013, 8（12）：e84102.

［19］ Venkatachalam M, Zelena M, Cacciola F, et al. Partial characterization of the pigments produced by the marine-derived fungusTalaromyces albobiverticillius30548. Towards a new fungal red colorant for the food industry［J］. Journal of Food Composition and Analysis, 2018, 67：38-47.

［20］ Silveira ST, Daroit DJ, Sant’anna V, et al. Stability modeling of red pigments produced byMonascus purpureusin submerged cultivations with sugarcane bagasse［J］. Food and Bioprocess Technology, 2011, 6（4）：1007-1014.

［21］ Wang X, Huang H, Xie X, et al. Improvement of the catalytic performance of a hyperthermostable GH10 xylanase fromTalaromyces leycettanusJCM12802［J］. Bioresource Technology,2016, 222：277-284.

［22］ Thorsen TS, Johnsen AH, Josefsen K, et al. Identification and characterization of glucoamylase from the fungusThermomyces lanuginosus［J］. Biochimica et Biophysica Acta（BBA）-Proteins and Proteomics, 2006, 1764（4）：671-676.

［23］ Xian L, Wang F, Luo X, et al. Purification and Characterization of a Highly Efficient Calcium-Independent α-Amylase fromTalaromyces pinophilus1-95［J］. PLoS One, 2015, 10（3）：e0121531.