五味降壓散鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用的實驗研究*

李雪麗，王 偉，王佩佩，弓 銘，鄧 冬，李韶菁，任瑩璐，馬雪玲，趙慧輝

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700）

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“不通則痛，不榮則痛”，以平肝熄風(fēng)、清腦開竅、活血化瘀、通絡(luò)止痛為主要治療原則[1-2]?！端貑枴ぶ琳嬉笳摗分^“驚者平之”，所以中醫(yī)主要以安神藥來達(dá)到重鎮(zhèn)安神、養(yǎng)心安神的目的，而近年來平肝熄風(fēng)藥、補(bǔ)虛藥、活血化瘀藥、滲濕利尿藥、清熱藥、解表藥、開竅藥等的鎮(zhèn)靜作用逐漸被人們發(fā)現(xiàn)且證實，相關(guān)研究報道也越來越多[3]。五味降壓散由地骨皮、葛根、丹參、山楂、牛蒡根5味藥組成，為民間降壓驗方。方中地骨皮涼血除蒸，清肺降火；葛根辛散發(fā)表以退熱，長于緩解外邪郁阻、經(jīng)氣不利、筋脈失養(yǎng)所致的項背強(qiáng)痛；丹參活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，除煩安神；山楂行氣散結(jié)止痛，通氣活血止痛；牛蒡根疏風(fēng)散熱，解毒消腫。前期在五味降壓散的降壓實驗中，發(fā)現(xiàn)該方對自發(fā)性高血壓大鼠的狂躁狀態(tài)有一定的改善[4-5]。因此，本實驗對五味降壓散鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用進(jìn)行進(jìn)一步研究。

1 實驗材料與方法

1.1實驗動物 SPF級ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，實驗動物均購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2012-0001。

1.2實驗藥物與試劑 五味降壓散藥物組成為地骨皮3 g，葛根 3 g，丹參 3 g，生山楂3 g，牛蒡根3 g。中藥飲片均購自北京同仁堂藥店。其他藥物及試劑包括：阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，生產(chǎn)批號為BJ28179）；氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司，生產(chǎn)批號為1601091909）；地西泮注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號為1503141）；冰醋酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號為20131114）。

1.3實驗儀器 智能熱板儀（RB-200，成都泰盟軟件有限公司）；熱刺痛儀（PL-200，成都泰盟軟件有限公司）；懸尾儀（TST-100，成都泰盟軟件有限公司）；電子天平（JY6001，上海精科公司天平廠）。

1.4實驗方法 按照動物與人體表面積換算公式計算小鼠五味降壓散試用劑量為原生藥2.75 g/kg，本實驗設(shè)置小鼠五味降壓散用藥低、中、高劑量均為試用劑量的 1、2、4 倍，即 2.75、5.5、11.0 g/kg。小鼠阿司匹林給藥劑量為55 mg/kg，小鼠地西泮注射液給藥劑量為1.8 mg/kg。

1.4.1醋酸扭體法實驗 ICR小鼠，雄性，按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，分為生理鹽水對照組（9只）、阿司匹林陽性藥組（9只）、五味低劑量組（9只）、五味中劑量組（9只）、五味高劑量組（10只）。各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥5 d，于末次給藥后將0.6%醋酸注入小鼠腹腔內(nèi)，沉積在臟層和壁層腹膜，引起深部較大面積較長時間的炎性疼痛，致使小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹，軀干與后肢伸張，臀部高起的行為反應(yīng)。觀察注射醋酸后15 min內(nèi)扭體次數(shù)，計算抑制率作為比較指標(biāo)。抑制率（%）=（陰性對照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/陰性對照組扭體次數(shù)×100%。

1.4.2熱刺激法實驗 ICR雌性小鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，分為生理鹽水對照組（11只）、阿司匹林陽性藥組（10只）、五味低劑量組（10只）、五味中劑量組（10只）、五味高劑量組（10只）。各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥3 d。分別于給藥前及給藥后30、90 min，將小鼠置于熱刺痛儀上部容器中，待小鼠平靜之后，將紅外燈對準(zhǔn)小鼠足底，記錄小鼠因刺痛而移開的時間。

1.4.3懸尾法實驗 ICR小鼠，雄性，按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，分為生理鹽水對照組（10只）、地西泮陽性藥組（10只）、五味低劑量組（9只）、五味子中劑量組（10只）、五味高劑量組（10只）。各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥3 d。分別于給藥前與給藥后30、60、90 min，固定小鼠尾部使其頭向下懸掛，兩端用擋板隔開小鼠視線，利用圖像跟蹤系統(tǒng)記錄5 min內(nèi)小鼠懸尾狀態(tài)過程中的一系列參數(shù)。

1.5統(tǒng)計分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對所有實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較進(jìn)行單因素方差分析，組間比較若方差齊可用LSD法檢驗，若方差不齊可用Dunnett’s T3 法檢驗，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠醋酸扭體實驗扭體次數(shù)、抑制率 阿司匹林及五味降壓散中劑量能夠顯著減少小鼠的扭體次數(shù)（P＜0.05）。見表 1。

表1 各組小鼠醋酸扭體實驗情況比較（±s）

表1 各組小鼠醋酸扭體實驗情況比較（±s）

注：與生理鹽水對照組比較，*P＜0.05。

組別 n 15 min扭體次數(shù)（次） 抑制率（%）生理鹽水對照組 9 40.9±10.6 -阿司匹林陽性藥組 9 30.8±9.4* 31.0五味低劑量組 9 33.0±11.8 23.9五味中劑量組 9 30.9±8.6* 28.6五味高劑量組 10 32.9±10.2 25.9

2.2小鼠熱刺激法鎮(zhèn)痛作用比較 生理鹽水對照組小鼠的痛閾值給藥前后無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；五味降壓散低劑量在給藥時間達(dá)到90 min時，小鼠的痛閾值明顯高于給藥前小鼠的痛閾值；五味降壓散高劑量給藥30、90 min時小鼠痛閾值均明顯高于給藥前小鼠痛閾值（P＜0.05）。見表2。

表2 各組小鼠熱刺激實驗情況比較±s） 分

表2 各組小鼠熱刺激實驗情況比較±s） 分

注：與給藥前比較，*P＜0.05。

組別 n 痛閾給藥前 給藥30 min 給藥90 min生理鹽水對照組 11 5.7±1.4 5.8±1.1 5.9±1.5阿司匹林組 10 3.7±1.6 4.4±0.7 5.6±1.7*五味低劑量組 10 4.7±1.3 5.9±2.2 7.1±1.2*五味中劑量組 10 5.3±2.1 6.9±1.5 7.2±2.1五味高劑量組 10 4.0±1.4 5.7±1.1* 5.8±1.1*

2.3小鼠懸尾實驗鎮(zhèn)靜作用 對照組給藥前后無統(tǒng)計學(xué)差異，地西泮給藥30、60、120min時小鼠5min內(nèi)懸尾活動時間與給藥前和對照組比較，均具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；五味降壓散高劑量給藥120 min時小鼠5 min內(nèi)懸尾活動時間和給藥前相比較，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），表明一定劑量的五味降壓散可以減少5 min懸尾實驗中小鼠的活動時間。見表3。

表3 各組小鼠5 min內(nèi)懸尾實驗情況比較（±s）s

表3 各組小鼠5 min內(nèi)懸尾實驗情況比較（±s）s

注：與給藥前比較，*P＜0.05。

組別 n 給藥前 給藥30 min給藥60 min給藥120 min生理鹽水對照組 10 227.2±54.7 233.2±53.4 215.4±63.8 215.6±67.4地西泮陽性藥組 10 245.2±50.9 111.0±74.4*129.7±57.7*167.9±53.2*五味子低劑量組 9 250.2±69.8 257.0±32.8 243.8±43.9 239.0±49.2五味子中劑量組 10 280.3±20.0 296.8± 4.5*291.0±13.1 291.9± 7.6五味子高劑量組 10 263.5±23.0 267.5±22.7 265.1±26.1 200.6±63.1*

3 討論

疼痛是許多疾病的癥狀，是機(jī)體受到傷害性刺激時的一種保護(hù)性反應(yīng)，并伴有不愉快的情緒反應(yīng)。疼痛由體感和情感兩種成分組成。西醫(yī)學(xué)上，嗎啡及其類似物對疼痛的兩種成分，特別是情感成分具有獨特的抑制作用；解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥對疼痛的情感成分幾乎無效。鎮(zhèn)靜藥一般能引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)輕度抑制，使患者由興奮、激動和躁動轉(zhuǎn)為安靜的藥物?，F(xiàn)代藥理學(xué)實驗研究表明，地骨皮能明顯抑制小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，提高鼠痛閾值，具有鎮(zhèn)痛作用[6]。一定劑量的葛根素對神經(jīng)病理性痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用；葛根素與嗎啡或曲馬多小劑量聯(lián)合應(yīng)用可用于慢性神經(jīng)病理性痛的臨床治療[7-8]。丹參酮ⅡA不但可通過抑制NF－κB信號通路提高神經(jīng)病理性痛大鼠痛閾值，而且具備安神鎮(zhèn)靜的作用[9-11]。牛蒡提取物有明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用[12]。

本次研究，通過小鼠醋酸扭體實驗發(fā)現(xiàn)，五味降壓散中劑量能夠顯著減少小鼠的扭體次數(shù)，表示五味降壓散中劑量具有一定的外周鎮(zhèn)痛作用。通過小鼠熱刺激實驗發(fā)現(xiàn)，五味降壓散的低劑量給藥90 min時、高劑量給藥30 min和90 min時均能顯著延長小鼠的痛閾值，表明五味降壓散在一定劑量下、給藥一定時間后具有中樞鎮(zhèn)痛作用。通過懸尾實驗說明五味降壓散高劑量在給藥120 min時具有一定的鎮(zhèn)靜作用。

綜上所述，五味降壓散在一定劑量下、給藥達(dá)到一定時間后具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用。不同劑量，表現(xiàn)出不同強(qiáng)度的外周鎮(zhèn)痛、中樞鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用。作為降壓驗方，五味降壓散的降壓作用可能與鎮(zhèn)靜作用有一定的相關(guān)性，該鎮(zhèn)靜作用可能會有助于其降壓作用的發(fā)揮。臨床上也有部分高血壓患者通過調(diào)整睡眠質(zhì)量而引起血壓下降的現(xiàn)象[13]。因此推測鎮(zhèn)靜作用可能是引起血壓下降的原因之一，當(dāng)然這一假設(shè)還需在以后的實驗中深入進(jìn)行驗證。

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