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    白及與川烏配伍對大鼠卡拉膠模型血流速度和鎮(zhèn)痛效果的影響*

    2018-03-02 07:44:31李小錦莊朋偉
    關(guān)鍵詞:模型

    龐 坦,李小錦,莊朋偉

    (天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300193)

    川烏和白及是中藥“十八反”理論的一對相反藥對[1-3],傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為其是配伍禁忌用藥。然而近年來的一些毒理或藥效學(xué)研究表明,白及與川烏配伍,在某些情況下,并不產(chǎn)生劇烈的不良反應(yīng)[4-6]。筆者認(rèn)為“十八反”配伍禁忌是臨床長期用藥經(jīng)驗(yàn)的總結(jié),白及與川烏配伍可能是在某些疾病方面具有特定的療效,然而在長期臨床應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)了明顯的不良反應(yīng)?;诖吮狙芯炕诖跖c白及的傳統(tǒng)功效與臨床應(yīng)用,擬考察該反藥組合的毒效表征。

    白及具有收斂止血,清熱利濕,消腫生肌之效[7-14],在臨床上應(yīng)用廣泛,治療外傷出血,瘡瘍腫毒,咳血吐血效果顯著。川烏祛風(fēng)除濕,溫經(jīng)止痛,用于治療風(fēng)寒濕痹、關(guān)節(jié)疼痛、寒疝作痛等[15-18]。兩者合用可在跌打損傷、關(guān)節(jié)炎等相關(guān)疾病中有所應(yīng)用。

    1 材料與方法

    1.1動物 實(shí)驗(yàn)動物:34只SPF級雄性SD大鼠,體質(zhì)量140~160 g,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

    1.2主要試劑 卡拉膠(sigma,C-3889)。

    1.3實(shí)驗(yàn)藥物

    1.3.1川烏 藥材名稱烏頭(Aconitum carmichaelii/Radix Aconiti),購于北京華邈中藥工程技術(shù)開發(fā)中心,鑒定結(jié)果毛茛科植物烏頭(AconitumcarmichaeliDebx.)的母根的炮制加工品。該藥材由天津中醫(yī)藥大學(xué)龐坦鑒定,所有的藥材標(biāo)本均取樣保存于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)樓藥理實(shí)驗(yàn)室。

    川烏提取液:500 g川烏藥材,加適量蒸餾水清洗2次后,用10倍量蒸餾水浸泡0.5 h,加熱煮沸后微沸1 h,紗布過濾后,所得藥渣再加8倍量蒸餾水加熱煮沸后微沸1 h,紗布過濾,合并藥液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮,調(diào)整藥物質(zhì)量濃度至0.45 g/mL,4℃保存。

    1.3.2白及 蘭科植物白及[Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f]的干燥塊莖。該藥材由天津中醫(yī)藥大學(xué)龐坦鑒定,所有的藥材標(biāo)本均取樣保存于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)樓藥理實(shí)驗(yàn)室。

    白及提取液:500 g白及藥材,加適量蒸餾水清洗2次后,用10倍量蒸餾水浸泡0.5 h,加熱煮沸后微沸1 h,紗布過濾后,所得藥渣再加8倍量蒸餾水加熱煮沸后微沸1 h,紗布過濾,合并藥液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮,調(diào)整藥物質(zhì)量濃度至0.45 g/mL,4℃保存。

    川烏白及提取液配伍:同質(zhì)量濃度川烏提取液和白及提取液等量混合,調(diào)整藥物質(zhì)量濃度,使其含有的川烏和白及生藥材質(zhì)量濃度均為0.45 g/mL。

    1.4實(shí)驗(yàn)儀器 激光多普勒血流儀[Perimed百靈威醫(yī)療儀器(中國)產(chǎn)品,瑞典],小動物異氟烷麻醉機(jī)(EMKA,德國)。壓痛測量儀,Ugo Basile,意大利。

    1.5方法

    1.5.1動物模型制備 3%卡拉膠溶液配制:稱量600 mg的卡拉膠,放入50 mL的錐形瓶中。將20 mL消毒的0.9%生理鹽水沿著磁力攪拌棒倒入錐形瓶中;用封口膜蓋上錐形瓶頂部,在室溫下攪拌6 h得到3%卡拉膠溶液。溶液貯存于4℃,使用前在室溫下攪拌1 h。

    34只SD大鼠常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水。除正常對照組外,將各組大鼠建立卡拉膠炎癥模型。將大鼠用3%異氟烷麻醉,使用連有25 g無菌針頭的1 mL注射器將100 μL 3%的卡拉膠注入到足底下部??ɡz的溶液黏性較大,在針管中要注意不要有空氣。正常對照組注射同等劑量的生理鹽水。注射完成后大鼠自然蘇醒。造模后1 h,實(shí)驗(yàn)各組分別灌胃給藥。

    1.5.2實(shí)驗(yàn)分組及處理 實(shí)驗(yàn)當(dāng)天隨機(jī)分為正常對照組、模型組、白及提取液組、川烏提取液組和白及川烏提取液配伍組。正常對照組4只和模型組6只大鼠,其余各組8只。正常對照組和模型組口服給予大鼠蒸餾水5 mL/kg,白及組給予白及提取液2.25 g/kg,川烏組川烏提取液2.25 g/kg,配伍組白及川烏提取液配伍(2.25+2.25)g/kg。

    1.5.3測量指標(biāo) 大鼠機(jī)械性疼痛測量:分別于造模后1 h和3 h測量大鼠后足壓痛值(analgesimeter,Ugo Basile,Italy)。測試時將大鼠腫脹足放置于壓痛儀上,啟動儀器后大鼠感覺后痛覺會將腫脹足縮回,儀器自動記錄大鼠縮回腫脹足時承受的壓力,單位為g。

    大鼠足血流速度測量:分別于給藥后1 h和3 h,將大鼠使用3%異氟烷麻醉,在大鼠腫脹足和對側(cè)足底放置激光多普勒血流儀探頭,檢測大鼠雙側(cè)足的血流速度,計算其差值(左足值減去右足值),以PU作為相對血流量單位。檢測完成后大鼠自然蘇醒。

    1.3統(tǒng)計方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,各組數(shù)值以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,檢驗(yàn)水平α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1白及、川烏及其配伍對大鼠足壓痛值的影響,見表 1,圖 1。

    表1 白及、川烏及其配伍對大鼠足壓痛值的影響(±s)

    表1 白及、川烏及其配伍對大鼠足壓痛值的影響(±s)

    注:與正常對照組比較,#P<0.05;與模型組比較,*P<0.05。

    給藥前及給藥后壓痛值(g)0 h 1 h 3 h正常對照組 4 - 104.3±5.3 99.0±7.8 95.8±8.1模型組 6 - 108.5±6.6 50.5±22.3# 51.5±22.8#川烏組 8 2.25 106.5±6.5 83.9±10.1* 84.6±12.0*白及組 8 2.25 109.7±5.4 65.5±16.1 51.3±23.5配伍組 8 2.25+2.25 111.0±7.0 97.3±10.9* 98.7±9.4*組別 n 劑量(g/kg)

    圖1 各組藥物對大鼠卡拉膠模型壓痛值的影響(,散點(diǎn)圖)

    給藥后1 h及3 h,與模型組相比,川烏提取液和白及川烏提取液配伍均能顯著提高大鼠卡拉膠炎癥足的壓痛值,與正常對照組相近。白及提取液則對大鼠卡拉膠壓痛值無明顯影響。

    2.2白及、川烏及其配伍對大鼠足血流速度的影響見表 2,圖 2。

    給藥后1 h及3 h,與模型組相比,白及提取液和白及川烏提取液配伍均能降低大鼠卡拉膠炎癥足的血流速度,但是沒有統(tǒng)計學(xué)差異。川烏提取液則對大鼠血流速度無明顯影響。

    表2 白及、川烏及其配伍對大鼠足血流速度的影響(±s)

    表2 白及、川烏及其配伍對大鼠足血流速度的影響(±s)

    注:與正常對照組比較,#P<0.05,與模型組比較,*P<0.05。

    給藥后左右足血流速度差值(L-R,PU)1 h 3 h正常對照組 4 - 5.00±13.39 13.50±19.33模型組 6 - 72.33±25.6## 97.83±55.91##川烏組 8 2.25 67.00±58.38 79.62±58.38白及組 8 2.25 18.42±20.26* 32.50±25.07配伍組 8 2.25+2.25 27.12±19.28 52.25±22.56組別 n 劑量(g/kg)

    圖2 各組藥物對大鼠卡拉膠模型炎癥足血流速度的影響(,散點(diǎn)圖)

    3 討論

    白及與川烏配伍同用,是“十八反”配伍禁忌之一。關(guān)于白及與川烏配伍,是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)和藥理作用降低或毒性化學(xué)成分的含量是否增加的現(xiàn)象,是中藥研究中的熱點(diǎn)課題[19-21]。既然古代醫(yī)家明確總結(jié)出兩藥組合為配伍禁忌,那么也就從另一方面說明,兩藥在臨床治療特定疾病時可能存在配伍應(yīng)用的情況。基于此,本研究基于兩藥的傳統(tǒng)功效與臨床應(yīng)用特點(diǎn),選擇了卡拉膠模型,考察白及川烏配伍對該模型大鼠的足趾疼痛程度和微循環(huán)血流速度[22-24]是否具有一定影響。

    卡拉膠模型是一種急性炎癥模型[25-27],它模擬人體發(fā)生急性炎癥的癥狀,大鼠足底注射卡拉膠后,會在短時間內(nèi)發(fā)生紅腫、疼痛癥狀。本文以大鼠卡拉膠模型為動物模型,觀察白及和川烏提取液在降低血流速度和鎮(zhèn)痛方面的效果是否互相影響。

    結(jié)果顯示大鼠在造模后2 h(給藥后1 h)和4 h(給藥后3 h)足趾血流速度對比正常對照組均明顯加快,其機(jī)械性疼痛值對比正常對照組明顯降低。給藥后1 h和3 h川烏提取液均可顯著提高卡拉膠大鼠的疼痛值(P<0.05),說明其有明顯的鎮(zhèn)痛作用,與白及提取液配伍應(yīng)用后,鎮(zhèn)痛作用未受影響。白及提取液在給藥后1 h可顯著降低卡拉膠大鼠的血流速度(P<0.05)。白及川烏提取液配伍組血流速度值有降低,雖未有統(tǒng)計學(xué)差異,但是可將血流速度絕對值降低1/2左右,且給藥后1 h,兩者的對血流速度的降低程度數(shù)值接近。白及降低血流速度可能與其止血功效有關(guān)。從文章可以看出,川烏鎮(zhèn)痛,白及止血,兩者配伍應(yīng)用時,其鎮(zhèn)痛作用與止血作用較之單獨(dú)應(yīng)用時,未受影響,亦未見“相反”作用出現(xiàn)。

    本研究結(jié)果提示,白及與川烏配伍在改善炎性疼痛方面具有一定協(xié)同增效作用,但“十八反”配伍禁忌是臨床長期用藥經(jīng)驗(yàn)的總結(jié),目前研究在模型的選擇、給藥時間、生物效應(yīng)的關(guān)注點(diǎn)等方面均具有一定的局限。

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