紅樹莓多酚的組分分析及體外抗脂質過氧化活性

曠 慧，馮建文，范 倩，王 萍，王金玲*

紅樹莓（Rubus ideaus L.）為薔薇科漿果，因其富含各種基本營養(yǎng)成分和功能活性成分，在世界上享有“黃金水果”的聲譽[1-2]。大量研究表明，紅樹莓中的多酚類化合物如黃酮、酚酸、花色苷、鞣花酸等物質與其抗氧化、抗腫瘤、降血脂、預防心血管疾病等生物學功能密切相關[3-5]。

目前，國內外對紅樹莓酚類物質中花色苷的結構研究比較多。Patras等[3]研究結果表明，樹莓中花色苷主要是由花青素-3-葡萄糖苷、花葵素-3-葡萄糖苷和花葵素-3-蕓香糖苷組成。Kula等[6]研究結果表明矢車菊素-3-槐糖苷是紅樹莓花色苷中的主要組成成分。李蕊等[7]在野生紅樹莓花色苷中鑒定出了9 種花色苷，包括矢車菊-3,5-雙葡萄糖苷、矢車菊-3-雙半乳糖苷、矢車菊-3-葡萄糖苷、矢車菊-3-蕓香糖苷、矢車菊-3-阿拉伯糖苷等。但對于其酚類物質的組成研究較少。

脂質過氧化反應是生物體內多不飽和脂肪酸常見的氧化反應，過量的氧化產(chǎn)物會攻擊生物大分子如蛋白質、脂類、核酸等，造成分子、細胞和器官的損傷，從而誘發(fā)心血管病、心臟病、癌癥等疾病[8]。由于天然多酚化合物分子結構中含有多個具有生物活性的基團如羥基，使其具有預防心血管疾病、調節(jié)脂類代謝、降血脂等生理功能[9-10]。目前對紅樹莓中活性成分的功能性研究主要集中在清除自由基、抗增殖、抑菌等功能上，而對其抗脂質過氧化功能的研究報道較少。

本研究主要通過采用紫外分光光度法、紅外光譜法和高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法，分析了‘菲爾杜德’紅樹莓多酚粗提液和純化液的組成成分，同時采用3 個體外抗脂質過氧化指標研究了其抗脂質過氧化活性，為開發(fā)、應用紅樹莓中的活性物質提供重要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

清潔級Wistar雄性大鼠2 只，周齡8 周，體質量分別為162.5 g和167.5 g，購自黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心，動物合格證號：SCXK-（黑）2015-003，動物使用許可證號：黑動字第P00700619。

‘菲爾杜德’紅樹莓采自黑龍江省尚志市，速凍處理后運回東北林業(yè)大學食品科學與工程實驗室凍藏。

標準品沒食子酸、原花青素B2、蘆丁、水楊酸、鞣花酸、茶多酚、沒食子酸、阿魏酸、表兒茶素、綠原酸、樹莓酮、兒茶素、槲皮素（色譜級，純度≥98%）上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純） 美國Thermo Fisher公司；溴化鉀、過氧化氫、硫代巴比妥酸、三氯乙酸、抗壞血酸等 天津市天力化學試劑有限公司；三氯化鐵、硫酸亞鐵 天津市東麗區(qū)天大化學試劑廠。

1.2 儀器與設備

SHZ-C型水浴恒溫振蕩器 上海博遠實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；ALC-1104電子天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；TU-1810紫外-可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責任公司；FW-4粉末壓片機 天津市拓普儀器有限公司；Nicolet iS5傅里葉變換紅外光譜儀（Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR）美國Thermo Fisher公司；1260 HPLC儀 安捷倫科技有限公司；722S可見分光光度計 上海精密科學儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 紅樹莓多酚粗提液的制備

按照參考文獻[11]中的最佳工藝參數(shù)提取紅樹莓多酚。提取條件為：乙醇體積分數(shù)70%（pH 6）、提取溫度45 ℃、料液比1∶6（m/V）、提取時間3.5 h、提取2 次，在此條件下多酚提取量為（373.78±4.08）mg/100 g。得到的多酚提取液減壓濃縮（0.1 MPa，45 ℃），冷藏備用，多酚純度為（3.94±0.28）%。

1.3.2 紅樹莓多酚純化液的制備

[12]方法，先用無水乙醇將1.3.1節(jié)中得到紅樹莓多酚粗提液進行除雜實驗（無水乙醇-多酚粗提液體積比1∶1，4 ℃條件下靜置24 h，離心，上清液于45 ℃、0.1 MPa減壓濃縮，冷藏后備用），再通過實驗確定較佳的優(yōu)化工藝為：選擇X-5大孔樹脂用來純化紅樹莓多酚粗提液；采用徑高比1∶14、上樣質量濃度1.4 mg/mL、上樣量100 mL、樣液pH 3、流速0.5 BV/h的條件進行動態(tài)吸附24 h；吸附飽和平衡后，先用500 mL蒸餾水洗雜，再用200 mL pH 6的70%乙醇溶液以1.0 BV/h的流速進行動態(tài)洗脫。收集第30～50 mL的多酚洗脫液，45 ℃、0.1 MPa減壓濃縮，冷藏備用，多酚純度為（35.79±2.17）%。

1.3.3 多酚含量的測定

參考Pantelidis等[13]方法，采用福林-酚法，以沒食子酸標準溶液質量濃度為橫坐標，溶液吸光度為縱坐標，得到標準曲線為y＝9.917 7x＋0.036 0（R2＝0.998 7）。

1.3.4 紅樹莓多酚的紫外光譜分析

分別將紅樹莓多酚的粗提液、純化液用甲醇稀釋成多酚質量濃度為0.4 mg/mL（以沒食子酸計）溶液，在190～700 nm波長范圍內進行紫外-可見光掃描，得到紅樹莓多酚的紫外光譜圖。

1.3.5 紅樹莓多酚的FT-IR分析

分別將紅樹莓多酚的粗提液、純化液放入烘箱中干燥8 h（65 ℃）。取1～2 mg多酚樣品與200 mg烘干后的溴化鉀混合均勻，研磨至粒度小于2 μm的混合粉末。將粉末放入壓片機內壓制成均勻透明的薄片，再將壓片放入樣品槽中，用紅外光譜儀于波長400 0～400 cm-1范圍內掃描，得到FT-IR圖[14]。

1.3.6 紅樹莓多酚的HPLC分析

將紅樹莓多酚粗提液和純化液分別用甲醇稀釋成多酚質量濃度為0.4 mg/mL（以沒食子酸計）溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾后用于HPLC分析[15]。將原花青素B2、蘆丁、鞣花酸、水楊酸標準品用甲醇稀釋成0.1 mg/mL溶液。

色譜條件[15]：5TC-C18柱：250 mm×4.6 mm；流動相采用甲醇（A）-純水（B）進行梯度洗脫：0～10 min：26% A、74% B；10.1～25.0 min：50% A、50% B；流速為1 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：280 nm；每次進樣量：10 μL。

1.3.7 紅樹莓多酚的抗脂質過氧化活性分析

1.3.7.1 對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制作用

以Fe2＋誘發(fā)卵黃磷脂C2位上的極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein，VLDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、過不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA）的過氧化模型，參考文獻[16]方法并略作改進，用硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）比色法測定樣品中丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量（代表脂質過氧化反應程度）。卵黃懸液：新鮮雞蛋去除蛋清，卵黃用等體積pH 7.45，0.l mol/L磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）配成1∶1（m/m）懸液，磁力攪拌10 min，再用PBS稀釋成1∶25（m/m）的懸液，冷藏備用。

測定方法：在離心管中依次加入0.4 mL卵黃懸液，0.1 mL不同質量濃度樣品溶液，0.4 mL 25 mmol/L FeSO4，3.1 mL PBS（0.1 mol/L，pH 7.45），混勻于37 ℃恒溫振蕩15 min，取出后加入l mL質量分數(shù)為20%的三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）溶液和l mL質量分數(shù)為0.8%的TBA溶液，沸水浴15 min，冷卻后，3 500 r/min離心10 min，吸取上清液，于532 nm波長處測定MDA-TBA復合物吸光度，按照式（1）計算抑制率。

式中：A1為0.1 mL PBS緩沖液的吸光度；A樣為樣品的吸光度。以VC和茶多酚做陽性對照。

1.3.7.2 對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的影響

H2O2會引起紅細胞膜發(fā)生脂質過氧化作用而導致溶血。參考文獻[17]方法并略作改進，測定MDA含量來研究其脂質過氧化反應程度。紅細胞懸浮液：大鼠禁食（自由飲水）12 h后眼眶取血，肝素抗凝，4 ℃、3 000 r/min離心得到紅細胞，冷生理鹽水洗3 次，用生理鹽水制成質量分數(shù)為0.5%的紅細胞懸浮液。

測定方法：在試管中依次加入0.5%紅細胞懸浮液1 mL，不同質量濃度樣品溶液0.2 mL，100 mmol/L的H2O20.1 mL混勻啟動反應，37 ℃水浴中反應l h后，用生理鹽水稀釋6 倍，3 000 r/min離心5 min，取上清液于415 nm波長處測定吸光度，按照式（2）計算抑制率。

式中：A2為生理鹽水的吸光度；A樣為樣品的吸光度。以VC和茶多酚為陽性對照。

1.3.7.3 對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用

通過測定MDA含量高低直接反映肝細胞受自由基攻擊的程度，參考文獻[18]方法并略作改進。大鼠肝臟勻漿：大鼠禁食（自由飲水）12 h后頸椎脫臼法處死，迅速取出肝臟，置于4 ℃生理鹽水中反復漂洗去除血液，剔除脂肪及結締組織，用濾紙吸干水分，稱質量。然后剪碎，在冰浴條件下將已剝離處理好的臟器定量置于勻漿器中，用生理鹽水制成質量分數(shù)為10%的組織勻漿。以3 000 r/min在4 ℃離心5 min，取上清液備用（用時以生理鹽水稀釋）。

測定方法：分別取1 mL 5%新鮮肝組織勻漿液，加入1 mL不同質量濃度的樣品溶液，置于37 ℃水浴1 h，取出后加入1 mL 質量分數(shù)為20%的TCA終止反應，再加入 l mL 0.5% TBA，搖勻。加塞放入沸水浴中煮沸30 min，迅速冷卻后，3 500 r/min離心10 min，吸取上清液于532 nm波長處測定MDA-TBA復合物的吸光度，按照式（3）計算抑制率。

式中：A3為以生理鹽水代替樣品的吸光度；A樣為樣品的吸光度。以VC和茶多酚為陽性對照。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

2 結果與分析

2.1 紅樹莓多酚的紫外-可見光譜

由圖1可知，紅樹莓多酚粗提液和純化液的紫外-可見光譜圖均有2 個吸收峰：一個在200～300 nm波長區(qū)域內（分別為244、242 nm），為黃酮、花色苷物質的特征吸收峰；另一個在500～600 nm波長區(qū)域內的吸收峰，為花色苷的特征吸收峰[19]，但在此處的吸收峰較弱。初步判斷紅樹莓多酚提取液中含有黃酮、花色苷物質。在多酚濃度相同時，紅樹莓多酚粗提液比純化液在200～300 nm波長區(qū)域內的吸收峰更強，而在500～600 nm波長區(qū)域內吸收峰相對較弱，說明在相同濃度下，粗提液中含有較多的黃酮類物質，而純化液中含有更多的花色苷物質。

2.2 紅樹莓多酚的FT-IR譜圖

圖2 紅樹莓多酚粗提液和純化液的FT-IR譜圖Fig. 2 FT-IR spectra of crude and puriベed polyphenols from red raspberry

由圖2可知，紅樹莓多酚粗提液在1 720 cm-1處有明顯的吸收峰，為羰基C═O伸縮振動吸收峰，其吸收峰可能歸屬于黃酮類物質[20]；粗提物和純化液分別在1 622、1 620 cm-1處有吸收峰，可能同時包含共軛羰基C═O的伸縮振動、C-H的彎曲振動、C-N的伸縮振動吸收峰以及芳香族環(huán)的骨架振動吸收，其吸收峰可能主要歸屬于黃酮類[21]。多酚粗提物和純化液在1 450～1 400 cm-1附近都有明顯的吸收峰，可能主要歸屬于糖苷類物質，且經(jīng)過X-5大孔樹脂純化后，能除去部分糖苷類物質；而在900～650 cm-1附近的多個吸收峰表明其可能含有苯環(huán)，且苯環(huán)上可能含有多個取代結構[21]。

2.3 紅樹莓多酚的HPLC分析

圖3 多酚標準品（A）、紅樹莓多酚粗提液（B）和紅樹莓多酚純化液（C）的HPLC色譜圖Fig. 3 HPLC proベles of four phenolic standards (A), crude polyphenols (B)and puriベed polyphenols (C) from red raspberry

如圖3所示，通過與標準品的HPLC色譜圖對比，紅樹莓多酚粗提物和純化物中主要含有原花青素B2（峰1）、蘆丁（峰2）、水楊酸（峰3）和鞣花酸（峰4），其中蘆丁和鞣花酸的含量相對較高，水楊酸的含量相對較少（圖3B和圖3C）。與粗提物相比，紅樹莓多酚純化液中原花青素B2的吸收峰明顯增大，其他3 種物質的吸收峰變化不大。在紅樹莓多酚粗提液HPLC圖中，當保留時間為5.045 min時，出現(xiàn)一個峰面積為188.779 mAU?s的未知峰；經(jīng)過大孔樹脂純化后，其保留時間為5.051 min，峰面積下降至7.663 mAU?s。在紅樹莓多酚粗提液的HPLC圖中，當保留時間分別為22.499 min和23.503 min時，均有一個未知物質，吸收峰明顯；且經(jīng)過純化后，該2 處吸收峰的保留時間略提前，峰面積均變小。通過與其他標準品（沒食子酸、阿魏酸、表兒茶素、綠原酸、樹莓酮、兒茶素和槲皮素）在此條件下的出峰時間對比，均未與這3 個未知物質峰匹配成功，仍需改變梯度洗脫條件、優(yōu)化提取和純化方法、采用靈敏度更高的方法進一步鑒定分析紅樹莓多酚的未知組成成分。紅樹莓多酚的HPLC分析結果表明紅樹莓多酚的液相色譜圖出峰較多，說明其組成成分復雜。

2.4 紅樹莓多酚的抗脂質過氧化活性

2.4.1 對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制作用

圖4 紅樹莓多酚對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制作用Fig. 4 Inhibitory effects of red raspberry polyphenols on Fe2+-induced lipid peroxidation in yolk lipoprotein

由圖4可知，紅樹莓多酚對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制率與多酚質量濃度在一定范圍內成正比，超過一定質量濃度后，成反比關系。在相同條件下，紅樹莓多酚粗提液對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制率大于純化液，當多酚質量濃度為25 μg/mL時，粗提液對其抑制率已達到（54.87±1.95）%；當質量濃度增大到300 μg/mL時，抑制率達到最大值（78.83±1.35）%，顯著高于其他實驗組。當紅樹莓多酚純化液質量濃度為400 μg/mL時，其對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制率也達到最大值，為（53.33±1.17）%。VC對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化的抑制作用與純化液相似，當質量濃度為300 μg/mL時，抑制率最大值為（52.48±1.58）%，超過此質量濃度時，抑制率隨著質量濃度的增大而下降。而茶多酚對其抑制作用相對較弱，當質量濃度高達400 μg/mL時，其抑制率達到最大值，僅為（39.10±1.40）%。

2.4.2 對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的抑制作用

圖5 紅樹莓多酚對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的抑制作用Fig. 5 Inhibitory effects of red raspberry polyphenols on H2O2-induced hemolysis of rat red blood cells

由圖5可知，紅樹莓多酚粗提液對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的抑制作用最顯著，當多酚質量濃度為25 μg/mL時，其抑制率已達到（44.98±2.24）%，當多酚質量濃度繼續(xù)增大時，其抑制率隨著質量濃度的增大而增大，但當質量濃度達到75 μg/mL時，其抑制率保持平穩(wěn)，高達（61.49±1.13）%。多酚純化液對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的抑制作用較弱，當質量濃度為7 5 μg/m L時，其抑制率達到最大值，僅為（28.32±1.68）%，而后隨著質量濃度繼續(xù)增大，其抑制率反而下降。VC對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的抑制作用在高質量濃度時較明顯，當VC質量濃度在150～500 μg/mL時，其抑制率隨著質量濃度的增大而平緩增大；當質量濃度為500 μg/mL時，其抑制率達到最大值（35.22±1.46）%。而茶多酚對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血的抑制作用相對最弱。

2.4.3 對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用

由圖6可知，紅樹莓多酚對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制率與多酚質量濃度在一定范圍內成正比；超過一定質量濃度后，成反比關系。在所有實驗組中，茶多酚對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用最為明顯，當質量濃度達到300 μg/mL時，其抑制率達到最大值（83.63±0.66）%，明顯高于其他實驗組。紅樹莓多酚粗提液對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用略強于純化液，當質量濃度達到100 μg/mL時，其抑制率都達到最大值，分別為（65.48±1.46）%、（59.68±0.22）%。VC對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用相對較弱，當質量濃度高達1 500 μg/mL時，其抑制率最高，僅為（48.67±1.09）%（相關數(shù)據(jù)未在圖中體現(xiàn)）。當紅樹莓多酚粗提液和純化液質量濃度從50 μg/mL升高到100 μg/mL時，兩者對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制率均隨著質量濃度的增大而增大；紅樹莓多酚對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用在低質量濃度時（＜100 μg/mL）效果明顯，且呈現(xiàn)一定劑量依賴關系，國內有類似的報道。孫靜[22]研究表明木犀草素具有較強的抗脂質過氧化能力，當質量濃度在10～30 μg/mL時，其對H2O2誘導的小鼠紅細胞溶血的抑制作用與質量濃度成正比；同時，當質量濃度在10～45 μg/mL時，其對腦勻漿脂質過氧化反應的抑制作用與質量濃度也成正比。尹學哲等[23]研究發(fā)現(xiàn)大豆皂醇在低質量濃度時（0.17～1.00 mg/L）與H2O2誘導的小鼠肝組織脂質過氧化抑制作用成正比，并呈現(xiàn)良好的量效關系。

圖6 紅樹莓多酚對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用Fig. 6 Inhibitory effects of red raspberry polyphenols on spontaneous lipid peroxidation in hepatic tissue homogenate of rats

3 討 論

本實驗通過采用紫外-可見光譜、FT-IR光譜、HPLC法分析紅樹莓多酚的組成，目前只鑒定出紅樹莓多酚中含有原花青素B2、蘆丁、水楊酸和鞣花酸這4 種酚類物質，國內外有類似的報道，但本研究中鑒定出來的多酚組分相對較少。孟實等[24]以遼寧沈陽產(chǎn)地的紅樹莓果實凍干粉和河南封丘縣產(chǎn)地的黑樹莓凍干粉為研究對象，采用95 %乙醇超聲波方法提取其多酚物質，采用HPLC法（用Kromasil C18色譜柱分析，流動相采用色譜純乙腈（A）-含0.1%磷酸水溶液（B）梯度洗脫，檢測波長為280 nm）分析其多酚物質并對紅樹莓和黑樹莓中的活性成分進行了鑒定，結果發(fā)現(xiàn)在紅樹莓中檢測到了沒食子酸、原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、原花青素B2、矢車菊素、鞣花酸、樹莓酮、白藜蘆醇及水楊酸，其中兒茶素高達4.81 μg/g（以干質量計，下同）、原花青素B2為1.94 μg/g，但白藜蘆醇和水楊酸含量很少，僅分別為0.02 μg/g、0.07 μg/g；而黑樹莓中除了不含有白藜蘆醇和水楊酸外，其余8 種酚類物質均存在，且兒茶素高達11.76 μg/g、沒食子酸1.02 μg/g，但表兒茶素含量僅為0.05 μg/g。張成濤等[1]以遼寧新大地種植的紅樹莓果實為研究對象，紅樹莓中樹莓酮采用氯仿加熱回流提取3 次，采用HPLC法（用CAPCELL PAK C18色譜柱分析，流動相采用甲醇-水（體積比30∶70）洗脫，檢測波長為271 nm）檢測其樹莓酮含量，結果發(fā)現(xiàn)其樹莓酮平均含量分別為3.32 μg/g（以鮮質量計）。Kula等[6]以波蘭Brzezna地區(qū)產(chǎn)地的11 種紅樹莓凍干粉為研究對象，采用甲醇為溶劑，超聲波法提取其多酚物質，采用HPLC-二極管陣列檢測器連用電噴霧電離質譜檢測法（用Discovery HS C18色譜柱分析，流動相乙腈（A）（0.1%三氟乙酸水溶液-乙腈為50∶50，V∶V）-含0.1% TFA水溶液（B）梯度洗脫，檢測波長為280 nm）測定其多酚物質，結果發(fā)現(xiàn)不同品種紅樹莓中花色苷含量存在顯著差異，且矢車菊素-3-槐糖苷是其花色苷的主要組成成分；黑樹莓中花色苷含量是紅樹莓的4～11 倍，且主要由矢車菊素-3-蕓香糖苷和矢車菊素-3-O-木糖鼠李糖苷組成；且兩者中鞣花酸主要由單寧Sanguiin H-6組成，同時首次在黑樹莓中檢測到了原花青素B1和原花青素B2。在這些研究中可能由于所采用的紅樹莓品種、檢測方法、洗脫條件、樣品處理方法、儀器設備等條件的差異而導致實驗結果存在差異。通過改變檢測設備和洗脫條件、優(yōu)化提取純化條件、提高樣品純度等方法可能會在本研究中鑒定出更多的多酚物質組成成分。

在研究紅樹莓多酚的抗脂質過氧化活性中發(fā)現(xiàn)紅樹莓多酚抑制脂質過氧化的能力與多酚質量濃度在一定范圍內成正比；超過一定質量濃度后，其抑制率呈反比例關系，國內外也有類似的報道。孫靜[22]研究發(fā)現(xiàn)金合歡苷對紅細胞溶血的抑制作用在一定濃度范圍內呈現(xiàn)良好的劑量效應關系，當其濃度為0.67 mmol/L時抑制率為38.31%，但繼續(xù)加大濃度抑制率反而下降。代斌[25]研究表明五倍子提取物能抑制線粒體脂質過氧化反應，對大鼠肝線粒體膜有較好的保護作用；在0.01～0.10 mg/mL范圍內，其對脂質過氧化的抑制率為在（56.62±2.4）%～（71.37±3.7）%之間，呈現(xiàn)一定的劑量依賴關系；當質量濃度繼續(xù)增大時，抑制作用基本無變化，同時在更高質量濃度（＞1 mg/mL）和更低質量濃度（＜0.005 mg/mL）時無法測定出結果。Costa等[26]研究了薰衣草提取物抗脂質過氧化作用，結果表明其對Fe2＋誘導的白鼠大腦勻漿脂質氧化具有抑制作用，在提取物質量濃度為0.0～1.0 mg/mL范圍內時，抑制率與質量濃度呈現(xiàn)良好的劑量關系；但當質量濃度繼續(xù)增大時，其抑制率隨著質量濃度的增大而保持平緩。天然活性成分提取物的抗脂質過氧化能力在一定濃度范圍內呈現(xiàn)劑量依賴關系，出現(xiàn)此現(xiàn)象的原因可能與樣液質量濃度過高時引起反應體系不穩(wěn)定、副反應增多、雜質干擾、底物濃度有限等因素有關[27]，但具體原因仍需進一步研究。

酚類成分與紅樹莓果實的生物活性密切相關，主要是通過調節(jié)氧化作用的機制體現(xiàn)[28]。前期體內和體外實驗研究證明，紅樹莓提取物中的活性成分，如酚酸、黃酮類化合物、花色苷、鞣花酸等酚類物質具有良好的抗氧化活性、抗脂質過氧化活性[29-30]。本研究表明，紅樹莓多酚提取物對氧化活性基團誘導的脂質過氧化和自發(fā)脂質過氧化均有抑制作用，這可能與其含有的多酚物質密切相關，但其作用機制和途徑仍需進一步研究。

4 結 論

組分分析結果表明紅樹莓多酚中可能含有黃酮類、花色苷、糖苷類物質，HPLC法初步鑒定出紅樹莓多酚中含有原花青素B2、蘆丁、水楊酸和鞣花酸4 種酚類物質，且紅樹莓多酚粗提液和純化液中多酚組成具有差異性，但其他多酚組成如沒食子酸、阿魏酸、表兒茶素、綠原酸、樹莓酮、兒茶素和槲皮素等仍需進一步定性、定量分析。抗脂質過氧化活性結果表明在一定質量濃度范圍內，紅樹莓多酚具有抗脂質過氧化活性。紅樹莓多酚對Fe2＋誘導卵黃脂蛋白脂質過氧化具有抑制作用，當多酚粗提液質量濃度為300 μg/mL時，抑制率達到最大值（78.83±1.35）%；VC對其抑制作用與多酚純化液接近。紅樹莓多酚粗提液對H2O2誘導大鼠紅細胞氧化溶血作用強于VC和茶多酚，當多酚質量濃度達到75 μg/mL時，抑制率最大（61.49±1.13）%，在此質量濃度條件下多酚純化液對其抑制率也達到最大值，但僅為（28.32±1.68）%。茶多酚對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化的抑制作用最為明顯，其抑制率最高可達（83.63±0.66）%（質量濃度為300 μg/mL）；紅樹莓多酚粗提液和純化液對大鼠肝組織勻漿自發(fā)脂質過氧化具有抑制作用，且強于VC，當質量濃度達到1 0 0 μg/m L時，其抑制率均最高，分別為（65.48±1.46）%、（59.68±0.22）%。結果表明紅樹莓多酚粗提液的抗脂質過氧化活性強于純化液，但紅樹莓多酚的抗脂質過氧化作用機制和途徑仍需進一步研究。

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