海棠果提取液對亞硝酸鹽清除作用的體外試驗研究

陶銀華+石娜娜+高清山

摘要 本文研究了海棠果提取液對亞硝酸鹽的清除作用，通過正交試驗研究了反應溫度、反應時間、添加量對亞硝酸鹽清除率的影響。結果表明，當反應溫度為60 ℃、反應時間為60 min、海棠果待測液添加量為10%時，亞硝酸鹽的清除率可達96.53%。

關鍵詞 海棠果；亞硝酸鹽；清除作用

中圖分類號 TS201.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）02-0253-02

Study on Scavenging Effect of Malus prunifolia Extract on Nitrite in vitro

TAO Yin-hua SHI Na-na GAO Qing-shan

（Weifang Engineering Vocational College，Qingzhou Shandong 262500）

Abstract This paper studied the scavenging effect of Malus prunifolia extract on nitrite.The effect of reaction temperature，reaction time and amount on nitrite scavenging rate was studied by orthogonal experiment.The results showed that when the reaction temperature was 60 ℃，the reaction time was 60 min，Malus prunifolia liquid dosage was 10%，the nitrite scavenging rate could up to 96.53%.

Key words Malus prunifolia；nitrite；scavenging effect

海堂果（Malus prunifolia），原名紅厚殼，又名海棠木、瓊州海棠、君子樹等，為薔薇科喬木，分布于我國河北、山東、山西等省區(qū)。海棠果實中含有香豆素類、口山酮類、黃酮類、萜類等化合物[1]，具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌消炎、保護毛細血管等功能[2-6]。眾多學者對海棠果有效成分的含量[7]、活性物質提取[8-9]、抗氧化活性[10]等方面進行了深入的研究，但關于海棠果清除亞硝酸鹽的研究鮮見報道。本文研究了海棠果乙醇提取液清除亞硝酸鹽的能力，以期為海棠果的開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗材料：八棱海棠果（2016年10月采自濰坊工程職業(yè)學院校區(qū)）；蘆?。ㄔ噭┯邢薰荆兌?9.9%）；抗壞血酸（AR）；亞硝酸鈉（AR），對氨基苯磺酸（AR），鹽酸萘己二胺（AR），檸檬酸（AR），鹽酸（AR）。試驗儀器：UV-1600型紫外可見分光光度計（北京瑞利分析公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 海棠果提取液的制備。新鮮海棠果去核，切塊，800 W、50 s微波滅酶，打漿，準確稱取5 g，加入80%乙醇25 mL，浸提30 min，4 000 r/min離心10 min，取上清液，重復2次，合并濾液。

1.2.2 體外亞硝酸鹽清除率的測定。準確移取pH值為3.0的檸檬酸-檸檬酸二鈉緩沖液10.00 mL置于50 mL容量瓶中，分別加入100 μg/mL NaNO2溶液2.00 mL，一份加入一定量的海棠果待測液，搖勻，恒溫水浴反應一定時間，另一份作空白試驗。精密吸取上述反應液2.00 mL，分別加入0.4%對氨基苯磺酸2 mL，搖勻，靜置5 min；再加入0.2%鹽酸萘乙二胺1 mL，搖勻，靜置15 min，于538 nm處測定吸光度，分別為A1、A0[11]。試驗重復3 次。按下式計算海棠果液對亞硝酸鹽的清除率。

亞硝酸鹽清除率（%）=[（A0-A1）/A0]×100

式中：A0為未加海棠果待測液的標準管吸光值；A1為加入海棠果待測液的吸光值。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗

2.1.1 反應溫度對亞硝酸鹽清除率的影響。設定反應時間60 min，待測液用量10 mL，考察反應溫度對亞硝酸鹽清除率的影響，結果見圖1。由圖1可以看出，亞硝酸鹽的清除率隨著反應溫度的增加而增加，當反應溫度>50 ℃時，清除率增加較為明顯，當反應溫度<40 ℃和>60 ℃時，亞硝酸鹽清除率變化不明顯。因此，最佳反應溫度為60 ℃。

2.1.2 反應時間對亞硝酸鹽清除率的影響。由圖2可以看出，隨著反應時間的增加，亞硝酸鹽的清除率增加較快，當反應時間>60 min時，亞硝酸鹽清除率的增加變慢。因此，最佳反應時間為60 min。

2.1.3 海棠果待測液用量對亞硝酸鹽清除率的影響。由圖3可以看出，亞硝酸鹽的清除率隨著海棠果待測液添加量的增加而增加，但當待測液的添加量>8 mL時，亞硝酸鹽清除率的斜率明顯降低，亞硝酸鹽清除率提高幅度變緩。考慮到溶劑回收及體系穩(wěn)定等因素，確定最佳待測液添加量為8 mL。

2.2 正交試驗

在單因素試驗的基礎之上，設計3因素3水平的L9（33）正交試驗，因素水平見表1，正交試驗結果見表2，方差分析見表3。

由表2、3可以看出，各因素對亞硝酸鹽清除率的影響大小依次為反應量>反應時間>反應溫度，清除亞硝酸鹽的最佳條件為反應溫度60 ℃、反應時間60 min、海棠果提取液添加量10%。經(jīng)驗證，該條件下亞硝酸鹽的清除率可達96.53%。

3 結論

通過單因素試驗，考察了反應時間、反應溫度、海棠果提取液對亞硝酸鹽清除率的影響，并在單因素確定的范圍內，通過正交試驗考察了各因素對亞硝酸鹽清除率的影響大小，各因素對亞硝酸鹽清除率的影響大小為反應量>反應時間>反應溫度，確定了最佳清除條件為反應溫度60 ℃、反應時間60 min、海棠果待測液添加量10%。endprint

4 參考文獻

[1] 湯秋雁.觀果花卉：海棠[J].中國果菜，2013（8）：29.

[2] MATTHEE G，WRIGHT A D，KONIG G M.HIV reverse transcriptase inhibitors of natural origin[J].Planta Med，1999，65：493-506.

[3] MCKEE T C，COVINGTON C D，F(xiàn)ULLER R W，et al.Pyranocoumarins from tropical species of the genus Calophyllum：a chemotaxonomic study of extracts in the National Cancer Institute collection[J].Journal of Natu-ral Products，1998，61（10）：1252-1256.

[4] KHAN U D，PARVEEN N，SINGH M P，et al.Two isomeric benzodi-pyranone derivatives from Calophyllum inophyllum[J].Phytochemistry，1996，42（4）：1181-1183.

[5] PUSHPALATHA E，MUTHUKRISHNAN J.Efficacy of two tropical plant extracts for the control of mosquitoes[J].Journal of Applied Entomology，1999，123（6）：369-373.

[6] 韓長日，宋小平，陳光英.紅厚殼屬植物化學成份及藥理活性研究進展[J].有機化學，2003，23（2）：212-219.

[7] ZHAO B，HALL C A.Antioxidant Activity of Raisin Extracts in Bulk Oil，Oil in Water Emulsion，and Sunflower Butter Model Systems[J].Journal of the American Oil Chemists Society，2007，84（12）：1137-1142.

[8] 夏秋瑜，李瑞，陳衛(wèi)軍，等.海棠果油的提取及其理化性質和脂肪酸組成分析[J].中國糧油學報，2010，25（11）：78-82.

[9] 蘇貽娟，賀利民.海棠果種子油脂肪酸成分研究[J].分析試驗室，2007（6）：62-64.

[10] 陳芳甜.觀賞海棠果抗氧化活性的研究[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2012.

[11] 中華人民共和國國家衛(wèi)生計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定：GB/T 5009.33-2016[S].北京：中國標準出版社，2016.endprint