地龍的采收加工、炮制和質(zhì)量標(biāo)準的研究進展

★ 熊頌強 鐘凌云 宋嬿 張玉蓮 陳風(fēng)晨

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌330004；2.上海上藥華宇藥業(yè)有限公司 上海 200002)

地龍(又名蚯蚓)為鉅蚓科動物參環(huán)毛蚓Pheretimaaspergilium(E.Perrier)、通俗環(huán)毛蚓PheretimavulgarisChen、威廉環(huán)毛蚓Pheretimaguillelmi(Michaelsen)或櫛盲環(huán)毛蚓PheretimapectiniferaMichalsen的干燥體。地龍性寒，味咸， 能清熱定驚，通絡(luò)，平喘，利尿； 具有降血壓、止咳、鎮(zhèn)靜解熱、抗癌、增強免疫功能等作用；臨床上用于高熱神昏、癲癇、皮膚病、肺熱喘咳、燒傷燙傷、支氣管哮喘、高血壓等癥[1]。目前，地龍在臨床上的應(yīng)用的得到了廣大研究者的認可，繼續(xù)對地龍作為藥品的開發(fā)和研究能夠獲取巨大的經(jīng)濟價值，并造福全人類。

地龍的采收加工及炮制直接影響地龍飲片的質(zhì)量，而地龍飲片質(zhì)量的好壞，直接影響到臨床中醫(yī)用藥的安全，所以為了臨床用藥安全建立地龍的采收加工和炮制的標(biāo)準研究是重要且必要的。目前，地龍飲片的具體含量測定標(biāo)準還未制定，導(dǎo)致地龍飲片市場相對混亂。建立地龍飲片的的質(zhì)量標(biāo)準能夠使地龍飲片市場規(guī)范化，能夠促進地龍藥物的研究，能夠提供一個安全臨床用藥環(huán)境。從地龍的采收季節(jié)、加工方法、最佳炮制工藝、炮制后活性成分的含量和藥效變化以及地龍質(zhì)量標(biāo)準等方面介紹地龍的研究進展，從源頭對地龍的質(zhì)量控制進行研究，以期能夠為建立較為全面的地龍質(zhì)量控制體系作為參考。

1 地龍采收加工的研究

有關(guān)地龍的采收加工的方法古籍中早有記載，如《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載的地龍應(yīng)“二月取，陰干”，而《本草綱目》收錄的地龍采收加工條件是“三月取，曝干”[2]。通過現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，地龍的采收時間與古籍中記載的有所不同。結(jié)合現(xiàn)代資源保護原則及實踐經(jīng)驗，應(yīng)集中在地龍的活動期對地龍進行采收，地龍的活動期是春、夏、秋三個季節(jié)。又根據(jù)研究和觀察，春季是地龍的繁殖期，這一時期對地龍進行采收不利于可持續(xù)發(fā)展，并且從蚯蚓形態(tài)上春季的蚯蚓要比夏秋的要小，而且與夏秋季的蚯蚓對比，夏秋季的蚯蚓肉更為厚實，而且根據(jù)相關(guān)研究，在夏季時蚯蚓體內(nèi)降血壓的活性成分血小板活化因子含量最高[3]，所以選擇夏季采收蚯蚓最為適合，所以每年的7～9月是地龍的最佳采收時間[2]。這時對地龍進行采收不僅可以使蚯蚓的繁殖得到保護，而且還能使得地龍藥材的品質(zhì)更佳。

蚯蚓加工成的藥材有兩種，一種是鮮地龍，另一種是干地龍。鮮地龍能夠在將地龍搗成泥后直接作為藥物服用，也可以將鮮活的地龍加入白糖進行攪拌，過濾后提取汁水服用或制成丸劑進行使用，內(nèi)服能夠治療消化道潰瘍等病癥，外敷可以治療腮腺炎等，見效明顯[2]。

干地龍的加工有兩種，一種是民間常用的方法：蚯蚓收獲后將其與草木灰攪拌使其嗆死，然后用溫水除去附著在蚯蚓表面的草木灰及雜質(zhì)，再逐條固定并從腹部剖開地龍，用溫水沖洗干凈，最后在太陽下曝干或用火烘干[4]；二是藥典規(guī)定方法：蚯蚓收獲后，及時剖開腹部，除去內(nèi)臟及泥沙，洗凈曬干或低溫干燥[5]。

這兩種方法各有優(yōu)缺點。有研究發(fā)現(xiàn)，蚯蚓在受到外界刺激時會釋放應(yīng)激分泌液，這種分泌液靜脈注射顯劇毒[6]，民間的方法加工時能夠去除這種分泌液，所以這種加工方式較為安全，但是由于運用草木灰，會引入大量的雜質(zhì)，如果沖洗不完全，會造成雜質(zhì)超標(biāo)；并且操作時間較長。藥典法優(yōu)點是操作時間短，但是對于應(yīng)激分泌液可能造成殘留，不利于藥材安全。

采用民間方法和藥典法剖開處理地龍時需要做到從頭至尾完全剖開，從而減少地龍產(chǎn)品的雜質(zhì)含量。徐向恩等[7]在甘肅省地龍藥材及飲片質(zhì)量現(xiàn)狀分析中發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在市面上的地龍產(chǎn)品很多加工方法都是從蟲體中部不同程度剖開，導(dǎo)致蚯蚓的頭、尾部及有些其他部分未被剖開，這些地方聚集著大量的泥土、沙石等雜質(zhì)，使得這些藥材中的雜質(zhì)含量遠遠超過藥典中規(guī)定的含量，使得中醫(yī)的臨床用藥安全得不到保障。

有研究表明，蚓激酶主要存在于蚯蚓消化道內(nèi)[8]，所以為了使地龍具有最大的藥效作用，地龍加工時應(yīng)保留內(nèi)臟。民間的加工方法和藥典法都不保留內(nèi)臟，所以都會造成有效成分流失。劉艷玲等[9]研究了蚯蚓新的加工方法：將收獲的蚯蚓使其自行吐凈內(nèi)臟中的泥土，經(jīng)過洗滌和日光下曝干獲得干地龍。這種加工方法的優(yōu)點是加工方便，由于保留了內(nèi)臟所以纖溶活性成分的提取更高。但是在這種方法中如何界定蚯蚓內(nèi)臟泥土吐凈沒有給出標(biāo)準，如果蚯蚓未吐凈泥土，會造成雜質(zhì)超標(biāo)。同時還研究了不同干燥方法對地龍加工的影響，發(fā)現(xiàn)地龍在日光下暴曬干,得到的干地龍在外觀、色澤、味道幾方面都比低溫干燥好。這與地龍中所含有的多種活性蛋白酶有關(guān)。地龍低溫干燥的干燥溫度大于70℃時，容易使地龍中的某些活性蛋白酶失活變性；如果干燥溫度太低，容易受到微生物侵蝕而引起變質(zhì)，并且由于溫度在35℃～55℃時地龍會出現(xiàn)自溶現(xiàn)象[8]。而日光下曬干，日光中的紫外線照射能夠殺死部分微生物，而且干燥時間較短，但曬干的方法易受天氣的影響。

2 地龍炮制的研究

地龍的炮制品有很多，有生地龍、炒地龍、地龍?zhí)?、酒地龍、鹽地龍、油地龍、蛤粉制地龍、甘草制地龍、花椒糯米制地龍等，炮制的主要目的是便于粉碎和去除地龍的不良氣味，但是有些輔料制法還能夠促進地龍的藥理作用，如酒制地龍中輔料酒除了能矯正地龍的腥味，還能增長地龍通經(jīng)活絡(luò)止痛作用；地龍經(jīng)醋制后，不但可以去掉不良氣味，還能增加活血通絡(luò)、祛瘀止痛等作用；地龍與蛤粉共制不僅能使地龍更為酥脆，改變藥物的滋膩性質(zhì)，還能增強藥物清熱化痰作用。

目前，地龍的炮制方法雖有很多，但關(guān)于地龍的最佳炮制工藝的研究很少，僅有對廣地龍飲片和酒地龍飲片最佳炮制工藝的研究。李鐘等[10]通過研究最終確定廣地龍最佳炮制工藝的為：取適量的干地龍，加水淘洗(藥材與水量1∶5)，淘洗3min，40℃烘干。別甜甜[11]以次黃嘌呤含量和水溶性浸出物的含量作為指標(biāo)，考察加酒量、悶潤時間以及炒制溫度對酒地龍炮制的影響，最終獲得酒地龍的最佳炮制工藝為：取適量凈地龍(每100 kg地龍，加入黃酒 12kg)，加入黃酒悶潤 30 min，加入到預(yù)熱好的鐵鍋內(nèi)，控制溫度在80℃溫度進行炒制，炒至藥材呈棕黃色時取出，攤開，放涼。

現(xiàn)代地龍炮制研究表明，不同的方法對地龍進行炮制得到的炮制品在主要成分和功效上具有差異。利紅宇等[12]進行了五種廣地龍飲片的不同炮制品化痰、止咳、平喘的藥效對比，在五種不同炮制品中化痰、止咳、平喘藥效最好的是蛤粉制廣地龍，黃酒制廣地龍次之，黃酒制藥效大于白酒制。其原因是與其他炮制品對比蛤粉制廣地龍中保留黃嘌呤和次黃嘌呤最多。張文斌等[13]對比了不同地龍炮制品中琥珀酸含量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)炮制的地龍中琥珀酸的含量都減少，其含量順序為生品>炒品>酒炙品>醋炙品。造成這種結(jié)果與琥珀酸的水溶性和熱不穩(wěn)定性有關(guān)。李鐘等[14]比較了五種不同的廣地龍炮制品中次黃嘌呤和肌苷的含量。五種不同炮制品中肌苷的含量都有所下降，而經(jīng)過蛤粉制、酒制、醋制后的炮制品中次黃嘌呤含量有明顯上升，黃酒制次黃嘌呤含量高于白酒制，并且蛤粉制廣地龍中次黃嘌呤含量最高而肌苷含量最低；凈制廣地龍中肌苷含量最高而次黃嘌呤含量最低，其原因從物質(zhì)化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)上進行分析，肌苷又可稱為次黃嘌呤核苷，它在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與次黃嘌呤極為相似，僅比次黃嘌呤多了一個呋喃糖。在炮制時，炮制溫度的升高，呋喃糖容易失去，轉(zhuǎn)化為次黃嘌呤，因此使炮制品中次黃嘌呤的含量會相應(yīng)增高，肌苷的含量會相應(yīng)降低。

3 地龍的質(zhì)量標(biāo)準研究

與其他中藥材一樣，地龍也是化學(xué)成分復(fù)雜，但是藥用范圍十分廣泛的藥物，而且根據(jù)活性成分的不同所呈現(xiàn)的藥理作用也不同。關(guān)于地龍的質(zhì)量標(biāo)準，中國藥典2015版地龍項下面收錄了地龍飲片的鑒別、雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、重金屬、黃曲霉毒素、浸出物八項具體指標(biāo)，還未制定相應(yīng)的含量測定的標(biāo)準。

地龍中的主要成分有脂類、氨基酸、蛋白質(zhì)、琥珀酸、嘌呤等[15]。目前，研究學(xué)者們多用次黃嘌呤以及肌苷的含量作為地龍藥材的質(zhì)量標(biāo)準。因為地龍中降壓平喘作用的主要活性物質(zhì)是次黃嘌呤及含氮化合物，并且這些物質(zhì)有抗組織胺、擴張支氣管和平喘作用[16]。吳文如[17]以次黃嘌呤和肌苷為對照品，采用高效液相色譜法測定地龍飲片中次黃嘌呤和肌苷的含量，結(jié)果顯示液相色譜有適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r間，良好的分離度和重現(xiàn)性，可以用于地龍飲片的含量測定，并且制定了地龍飲片的質(zhì)量標(biāo)準：按干燥品計算，含次黃嘌呤不得少于0.2mg·g-1含肌苷不得少于0.3mg·g-1。譚峻英等[18]利用以次黃嘌呤含量和肌苷含量作為指標(biāo)，采用HPLC經(jīng)測定，最終確立了甘草水制廣地龍的質(zhì)量標(biāo)準：以干燥品計算，次黃嘌呤含量應(yīng)不少于0. 006%，肌苷含量不少于0. 40%。

有研究者通過研究認為琥珀酸含量也可以作為地龍的質(zhì)量標(biāo)準。何琳[19]通過研究測定了廣地龍飲片中琥珀酸的含量，并且通過進行平喘止咳的藥效學(xué)實驗，證明琥珀酸也具有平喘止咳作用，進一步證明琥珀酸含量可以作為地龍的質(zhì)量標(biāo)準，但她們并未給出具體的含量標(biāo)準。所以以琥珀酸含量作為地龍質(zhì)量標(biāo)準值得進一步深入研究。

另外，研究學(xué)者通過建立適合地龍的ISSR擴增系統(tǒng)，進而應(yīng)用ISSR分析對地龍類藥用動物進行分子特征的刻畫，為地龍藥材的DNA分析及鑒別分類研究提供參考[20]。也有研究者通過建立地龍HPLC指紋圖譜的分析方法，用于鑒別不同種類及不同產(chǎn)地地龍樣品間的差異[21]。這些方法的建立能夠加強對地龍質(zhì)量的有效控制。

4 小結(jié)

地龍的采收最好在夏秋季節(jié)，每年的7～9月進行，這時采收不僅可以使蚯蚓的繁殖得到保護，而且還能使得地龍藥材的品質(zhì)更佳。地龍現(xiàn)有的加工方式都存在不同程度的缺陷，尋找在保證有效成分含量保留多而使雜質(zhì)含量少的加工方法，值得研究。

應(yīng)加強其他地龍最佳炮制工藝的研究。目前，僅有廣地龍飲片和酒地龍的最佳炮制工藝的研究，其余輔料炮制的研究還是空白，但是從廣地龍不同炮制品平喘化痰止咳藥效的比較可以看出，蛤粉制地龍的平喘止咳化痰功效相當(dāng)有效，擁有廣闊的研究價值，應(yīng)繼續(xù)深入研究。

地龍在炮制時盡量減少后砂炒法炮制地龍，因為地龍中平喘的主要成分次黃嘌呤、琥珀酸等都是水溶性和對熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，砂作固體輔料傳熱快，所以砂燙溫度一般較高，對地龍中的次黃嘌呤和琥珀酸會造成比較嚴重的損失，砂炒本身也不利于除去地龍的腥味，砂僅僅是中間傳熱

物質(zhì)，而沒有任何其他作用，所以在地龍在炒制時應(yīng)改用傳熱慢的其它固體輔料比較合理。

通過實驗可以發(fā)現(xiàn)地龍進行酒炙時應(yīng)選用黃酒作為輔料炮制，其炮制品的次黃嘌呤的含量高于以白酒炮制的含量。并且根據(jù)中醫(yī)理論，活血通絡(luò)用酒炙；散瘀止痛用醋炙；利尿用滑石粉炒；清肺化痰用蛤粉炒?；蛘甙从盟幮枨笥靡后w輔料如黃酒、醋、甘草水等拌勻后悶潤，再用固體輔料炒制。如用醋拌滑石粉炒地龍能夠治療小便不利、尿路不通等癥狀，醋不僅能起到止痛作用還能去除異味，滑石粉可以起到清熱利尿的作用；如酒拌蛤粉炒能夠治療咳嗽，酒既能起到通經(jīng)活絡(luò)的作用又能去除地龍的腥味，蛤粉能夠起到清熱化痰的作用。這樣配合使用能夠使兩種輔料和地龍形成協(xié)同作用[22]。

結(jié)合2015版中國藥典，建立以次黃嘌呤和肌苷的含量為指標(biāo)的地龍含量測定的質(zhì)量標(biāo)準，加強對琥珀酸含量為地龍質(zhì)量標(biāo)準的研究，并且借助適合地龍的ISSR擴增系統(tǒng)和地龍HPLC指紋圖譜技術(shù)，建立較為健全的地龍藥材的質(zhì)量控制體系。這樣不僅能夠規(guī)范地龍飲片市場，促進地龍藥材的標(biāo)準化養(yǎng)殖，也能夠全面提高地龍相關(guān)產(chǎn)品的研制水平和質(zhì)量控制。

[1]杜航，孫佳明，郭曉慶，等. 地龍的化學(xué)成分及藥理作用[J].吉林中醫(yī)藥， 2014， 34(7):707-709.

[2]李薇，吳文如，肖翔林.地龍規(guī)范化生產(chǎn)的研究概況[J].中草藥，2005，36(9):1 419-1 422.

[3]程能能，杉浦隆之.地龍(蚯蚓)體內(nèi)磷脂的組成和血小板活化因子的生物合成[J].藥學(xué)學(xué)報，1992，27(12):886-890.

[4]季倩，張漢明，陳維榮，等. 從地龍研究看如何破解中藥資源與品質(zhì)困局[J].世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014, 16(11):2 308-2 313.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:122-122.

[6]張祖珣，何俐明，于培蘭，等. 蚯蚓毒素及其去除方法的初步研究[J].中國生化藥物雜志，2001，22(3):112-113.

[7]徐向恩，石巖，張潔.甘肅省地龍藥材及飲片質(zhì)量現(xiàn)狀分析[J].中國藥事，2014， 28(1):15-17.

[8]路英華，金汝成.蚯蚓纖溶酶的提取、性質(zhì)鑒定和溶介血栓的研究[J].蘭州大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，1986，22(1):98-103.

[9]劉艷玲，李莉，鄭博.地龍藥材兩種采收加工方法的比較[J].中國藥學(xué)雜志，2002， 37(2):96-98.

[10]李鐘，李文姍，黃艷玲.廣地龍飲片炮制工藝研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，14(7):81-83.

[11]別甜甜. 酒地龍、酒牡丹皮的炮制工藝及飲片質(zhì)量標(biāo)準研究[D].廣州：廣東藥學(xué)院，2015.

[12]利紅宇，李鐘，黃艷玲，等.不同炮制的廣地龍平喘化痰止咳藥效比較[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21(6):1 464-1 465.

[13]張文斌，校合香.地龍不同炮制品中琥珀酸含量的比較[J].中國藥事，2001， 15(3):216-216.

[14]李鐘，黃艷玲，李文姍. 炮制對廣地龍次黃嘌呤和肌苷含量的影響[J].中藥材，2009， 32(1):31-33.

[15]王丹彤，王丹輝. 中藥地龍的化學(xué)成分及藥理作用研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘:連續(xù)型電子期刊，2015，15(68):254-255.

[16]汪珊，梁仁.中藥地龍藥理與哮喘氣道重建相關(guān)性研究[J].廣州：廣東藥學(xué)院學(xué)報，2004， 20(1):60-62.

[17]吳文如.地龍種質(zhì)資源與品質(zhì)評價研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2008.

[18]譚峻英，謝媛，柯曉燕，等.甘草水制廣地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報， 2010，26(1):26-29.

[20]吳文如，李薇. 地龍ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J].時珍國醫(yī)國藥，2009， 20(7):1 573-1 575.

[21]詹云麗，黃璐敏，黃丹瑩，等. 廣地龍藥材氨基酸類成分指紋圖譜研究[J].中藥材， 2009，32(9):1 350-1 353.

[22]王碧瓊，陸維承.地龍炮制工藝探討[J].海峽藥學(xué)，2012，24(4):34-36.