MicroRNA-31在上皮性 卵巢癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系*

徐志宏，吳小華，姚鐵柱，梁秀琴

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科，河北 石家莊 050011；2.白求恩國際和平醫(yī)院 婦產(chǎn)科，河北 石家莊 050000；3.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 心內(nèi)科，河北 石家莊 050011；4.河北省保定第七醫(yī)院 婦產(chǎn)科，河北 保定 071000）

卵巢惡性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)常見的3大惡性腫瘤之一，其中上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）占卵巢惡性腫瘤的86%～91%，好發(fā)于55～65歲婦女，其具有早期癥狀隱匿、易發(fā)生多臟器種植、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，5年生存率徘徊在30%左右，病死率居惡性婦科腫瘤之首[1]。因此，盡量早期明確診斷、尋找新的治療靶點(diǎn)以及判斷其預(yù)后的意義重大。臨床急需高敏感性和特異性的卵巢癌早期診斷及預(yù)后標(biāo)志物以降低疾病死亡率，尋找新的治療靶點(diǎn)改善卵巢癌的預(yù)后迫在眉睫。

人們首先在海拉細(xì)胞（Hela cell）中發(fā)現(xiàn)了micorRNA-31（miR-31），并確定其定位在染色體9p21.3上[2]。有研究發(fā)現(xiàn)miR-31在肺癌、結(jié)直腸癌中呈高表達(dá)狀態(tài)，而在乳腺癌、胃癌及卵巢癌中則呈低表達(dá)[3-4]，miR-31不但能使結(jié)腸癌細(xì)胞的生長速度增快，并且與結(jié)腸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理學(xué)分期以及預(yù)后等因素相關(guān)[5]。然而，miR-31在上皮性卵巢癌的臨床意義及預(yù)后的價值尚未研究。本實(shí)驗采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerassee chain reactiioonn， qRT-PCR） 檢 測 研 究 了miR-31在EOC中的表達(dá)變化，并分析其和臨床病理指標(biāo)及其與卵巢癌預(yù)后之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取病理學(xué)證實(shí)的EOC患者共150例，均來自2010年1月-2015年1月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院手術(shù)后標(biāo)本。其中，年齡≥60歲86例，＜60歲64例。病理分化程度：低分化（G3）51例，中高分化（G1、G2）99例。組織學(xué)類型：漿液性卵巢癌占88例，非漿液性卵巢癌占62例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移70例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移80例。腹膜轉(zhuǎn)移情況：存在腹膜轉(zhuǎn)移84例，無腹膜轉(zhuǎn)移66例。FIGO分期：Ⅰ、Ⅱ期60例，Ⅲ、Ⅳ期90例。用隨訪至死亡日期來計算生存時間即總生存時間（OS）。

1.2 qRT-PCR檢測miR-31的表達(dá)

取 1μg總 RNA 使 用 PrimeScript? miRNA cDNA合成試劑盒進(jìn)行cDNA的合成，具體操作參照使用說明。qRT-PCR的PCR擴(kuò)增使用ABI 7500PCR儀器，采用20μl的反應(yīng)體系。所有的反應(yīng)運(yùn)行3遍。U6 siRNA 1 min作為內(nèi)對照，反應(yīng)均在95℃條件下1 min完成，然后95℃、15 s，60℃、1 min，40個循環(huán)。對照U6通過2-ΔΔCT方法計算miR-31的表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。多因素分析采用Cox回歸模型。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-31在卵巢癌組織和癌旁正常卵巢組織中的表達(dá)

為了研究miR-31在卵巢癌變中起到的作用，本研究對150例卵巢癌組織和正常卵巢組織miR-31的表達(dá)情況進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果提示，miR-31在卵巢癌組織和癌旁正常卵巢組織中表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），卵巢癌組織中的表達(dá)低于正常卵巢組織中的表達(dá)。見附圖。

附圖 人卵巢癌組織和癌旁正常組織miR-31的表達(dá)

2.2 miR-31在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)水平與臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系

在150例上皮性卵巢癌組織中，miR-31在74例患者中呈低水平表達(dá)，在76例患者中呈高水平表達(dá)。由表1可見，miR-31的低表達(dá)與較差的組織學(xué)分級、較多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、更廣泛的腹膜轉(zhuǎn)移、更晚期的病理分期有關(guān)（P＜0.05），而與其他臨床病理學(xué)因素（年齡、組織學(xué)類型無關(guān)）（P＞0.05）。

2.3 miR-31在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

生存分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移、分化、FIGO分期和miR-31表達(dá)是預(yù)后的危險因素，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表 2。

表1 miR-31的表達(dá)和臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系 例

表2 Cox回歸分析EOC患者總生存預(yù)測因子

3 討論

MiRNA在卵巢癌領(lǐng)域的研究備受人們關(guān)注，它是最近幾年來新發(fā)現(xiàn)的長為21～26個核苷酸的RNA，它在人體內(nèi)發(fā)揮著很多生物學(xué)作用，通過與其靶點(diǎn)非編碼區(qū)域配對，使mRNA受到翻譯水平調(diào)節(jié)[6-7]，并且其具有預(yù)后評價、早期診斷的指導(dǎo)價值，可能成為卵巢癌新的治療靶點(diǎn)，是非常有應(yīng)用價值的生物標(biāo)志物。

MiRNA參與包括細(xì)胞的增殖、分化、遷移以及凋亡在內(nèi)的多種生物學(xué)過程。以往的相關(guān)研究證實(shí)了miRNA的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[8]?，F(xiàn)在，研究的miRNAs中有65%在基因組學(xué)上定位于脆性位置，其起到的作用為癌基因或抑癌基因，通過調(diào)節(jié)腫瘤基因及腫瘤不同的通路在癌癥的發(fā)病過程起關(guān)鍵作用[9-10]。對某些腫瘤的miRNA分子的特定檢測可能對疾病的早診早治及預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。如miR-200c已成為Ⅰ期上皮性卵巢癌患者預(yù)測生存和復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物。

更多的試驗表明miRNAs與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究報道[11-13]，在卵巢癌組織miR-16、miR-15a和miR-200表達(dá)上調(diào)，相反miRNA-34a/b/c、miRNA-100，miR-31和mir-99a表達(dá)下調(diào)。

已發(fā)現(xiàn)的miRNAs中，miR-31是調(diào)節(jié)惡性腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)鍵基因。最近研究報道[5]，在結(jié)腸癌細(xì)胞系LS174T中，miR-31可以通過MTI等靶基因增加惡性腫瘤細(xì)胞的遷移，通過抑制miR-31可以增強(qiáng)SW480細(xì)胞對奧沙利鉑的敏感性。miR-31在不同的腫瘤中表達(dá)水平不同。LEIDNER等[14]研究證實(shí)miR-31能促使乳腺癌肺轉(zhuǎn)移病灶縮小，其表達(dá)增強(qiáng)能抑制乳腺癌細(xì)胞的活動及侵襲能力，因此研究人員認(rèn)為在乳腺癌中miR-31是一種抑癌基因，相反在結(jié)腸癌中miR-31的表達(dá)增強(qiáng)促進(jìn)腫瘤發(fā)展，因此認(rèn)為miR-31同時是一種癌基因。miR-31在不同腫瘤中截然不同的表達(dá)現(xiàn)象在很多實(shí)驗得到印證。有研究證實(shí)miR-31在結(jié)腸癌Ⅳ期患者中表達(dá)要強(qiáng)于Ⅱ期患者，MENG等[15]研究發(fā)現(xiàn)miR-31在肺癌中高表達(dá)與TNM分期及浸潤深度有關(guān)，miR-31增強(qiáng)表達(dá)與患者預(yù)后較差即總生存期較短相關(guān)。然而，miR-31在上皮性卵巢癌中的臨床意義及預(yù)后的價值尚未研究。

本課題為研究miR-31在卵巢癌變中的作用，采用qRT-PCR檢測分析miR-31在150例卵巢癌組織和癌旁正常卵巢組織的表達(dá)，結(jié)果提示，在EOC組織miR-31的表達(dá)較癌旁正常卵巢組織降低。實(shí)驗同時發(fā)現(xiàn)miR-31的低表達(dá)與更晚期的病理分期、更廣泛的腹膜轉(zhuǎn)移、較多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和較差的組織學(xué)分級有關(guān)，而與其他臨床病理學(xué)因素?zé)o關(guān)。此外，本研究進(jìn)一步探討了miR-31在卵巢癌患者預(yù)后的價值，并分析miR-31表達(dá)與卵巢癌患者總生存的關(guān)系，結(jié)果表明，miR-31低水平表達(dá)與卵巢癌患者生存期較差有關(guān)，在多變量分析中，miR-31的表達(dá)是卵巢癌患者總生存的獨(dú)立預(yù)后因素。因此，miR-31可能是卵巢癌一個新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物。

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