霜后桑葉總酚、黃酮和總糖含量變化研究

俞燕芳 黃金枝 王軍文 杜賢明

(江西省蠶桑茶葉研究所 330202)

桑葉是一種傳統(tǒng)中藥，古代眾多醫(yī)藥典籍中的桑葉多為經(jīng)霜后采收，歷版《中國(guó)藥典》中收錄的桑葉藥材也為“霜桑葉”。桑葉為何經(jīng)霜后采收？國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)不同品種、不同季節(jié)桑葉的黃酮、DNJ等含量進(jìn)行了測(cè)定分析與比較。許多研究發(fā)現(xiàn)桑葉黃酮類成分在10～11月經(jīng)霜后達(dá)最大值，之后桑葉黃酮類物質(zhì)含量顯著降低[1～3]。劉利[4]等比較了不同季節(jié)、不同品種桑葉總黃酮含量的差異，結(jié)果表明，育71-1秋季葉片總黃酮含量顯著高于春夏季，并且霜前含量略高于霜后，而實(shí)鈷11-6春、秋葉片總黃酮含量差異不明顯。沈維治等[5]也發(fā)現(xiàn)在4～10月中同一品種桑葉中不同酚類物質(zhì)變化不一樣，不同品種桑葉相同酚類物質(zhì)變化也不一樣。

我國(guó)各個(gè)地區(qū)氣候環(huán)境不同，而且經(jīng)霜前后同一月份氣溫變化差異也很大，現(xiàn)有研究結(jié)果大都是對(duì)不同月份的桑葉中的活性物質(zhì)含量進(jìn)行比較，難以全面地反映霜后桑葉活性成分的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律和霜后采收桑葉的合理性。筆者對(duì)江西省“霜降”后桑葉的酚類、黃酮類及可溶性總糖等成分含量變化進(jìn)行了分析，為進(jìn)一步明確桑葉采收時(shí)間提供一定的科學(xué)依據(jù)，以更為科學(xué)有效地利用桑葉資源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

沒食子酸、蘆丁和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自阿拉丁(≥98%)，無水乙醇、福林酚(2N)、無水碳酸鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、苯酚、濃硫酸等試劑均為分析純。

1.1.2 儀器

UV-2600紫外分光光度計(jì)(日本島津)，SK3310HP超聲清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.1.3 桑葉樣品

桑葉采自江西省蠶桑茶葉研究所桑樹品種園，供試桑葉品種為強(qiáng)桑1號(hào)、大10、梨葉大、甜桑、黑油桑和尖頭荷葉，取其枝條中上部位桑葉。采集時(shí)間為2015年10月26日、11月2日、11月9日和11月16日，采后桑葉60℃烘干，粉碎，過60目篩，備用。

1.2 方法

1.2.1 桑葉黃酮、酚類物質(zhì)的提取與測(cè)定

采用超聲輔助法提取桑葉多酚和黃酮。稱取桑葉粉 0.5 g，置50 mL離心管中，加 70% 乙醇30 mL，超聲(300W)提取2次，每次30 min，合并提取液，以70%乙醇定容至100 mL，得到桑葉酚類(黃酮)提取液。

桑葉總酚含量采用福林酚比色法測(cè)定[6]：取不同濃度沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0mg/mL, 0.04 mg/mL，0.08 mg/mL，0.12 mg/mL，0.16 mg/mL，0.20 mg/mL)1mL，置于25mL 試管中，分別加入福林酚溶液(0.1N)5 mL，反應(yīng)5min后，加入7.5% 碳酸鈉溶液 4 mL，搖勻，定容，避光放置 30 min后，在 765nm處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。桑葉提取液按相同條件測(cè)定吸光總黃酮含量采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法測(cè)定[7]：取不同濃度(0 mg/mL, 0.1 mg/mL，0.2 mg/mL，0.3 mg/mL，0.4 mg/mL，0.5 mg/mL，0.6 mg/mL)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL，置于10mL 試管中，加 5% 亞硝酸鈉0.4mL，放置 6 min 后，加 10% 硝酸鋁 0.4 mL，放置 6 min，加入 1 mol/L 氫氧化鈉 4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，靜置15min后在 510 nm 處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。桑葉提取液按相同條件測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到提取液總酚質(zhì)量濃度，桑葉中總黃酮含量以干物質(zhì)計(jì)，以蘆丁當(dāng)量表示(mg/g干重)。

度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到提取液總酚質(zhì)量濃度，桑葉中總酚含量以干物質(zhì)計(jì)，以沒食子酸當(dāng)量表示(mg/g干重)。

1.2.2 可溶性總糖含量測(cè)定

利用水浸提法從桑葉中提取桑葉可溶性總糖。稱取 1 g桑葉粉，加50mL蒸餾水，沸水浴浸提 1 h，10 000 r / min離心5min，沉淀加50mL蒸餾水重復(fù)提取1次，合并2 次濾液，定容至100 mL，得桑葉可溶性總糖提取液。

總糖含量采用苯酚硫酸法測(cè)定[8]：取不同濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0 mg/mL, 0.02 mg/mL，0.04 mg/mL，0.06 mg/mL，0.08 mg/mL，0.10 mg/mL)1mL，置于25mL 試管中，分別加入5% 苯酚溶液 1 mL，混勻，迅速加入濃硫酸5 mL，沸水浴中反應(yīng) 15 min，冷卻后室溫放置30min，在 490nm 處測(cè)定吸光度，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。桑葉提取液稀釋后按相同條件測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到提取液總酚質(zhì)量濃度，桑葉中總糖含量以干物質(zhì)計(jì)，以葡萄糖當(dāng)量表示(mg/g干重)。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同時(shí)期桑葉總酚含量變化

不同品種桑葉在霜后不同時(shí)期的總酚含量變化趨勢(shì)相似(具體見表1和圖1)，10月26日含量最高，在10月26日至11月2日期間總酚含量下降非常顯著，大10、黑油桑、尖頭荷葉、梨葉大、強(qiáng)桑1號(hào)和甜桑桑葉分別下降了16.46%、36.23%、41.91%、30.29%、38.51%和18.84%。11月2日至11月26日期間不同品種桑葉總酚含量均有小幅波動(dòng)。

表1 不同品種桑樹經(jīng)霜前后桑葉成分變化

圖1 霜后不同時(shí)期桑葉總酚含量變化

2.2 不同時(shí)期桑葉黃酮含量變化

由表1和圖2可以看出，霜后不同品種桑葉黃酮含量變化趨勢(shì)與總酚含量變化趨勢(shì)(圖1)相同，即10月26日最高，而后含量下降并有小幅波動(dòng)。這與楊貴明等提出的霜后黃酮類物質(zhì)含量顯著降低一致[9]。

圖2 霜后不同時(shí)期桑葉總黃酮含量變化

結(jié)合11月份南昌縣的天氣情況(圖3)，10月28至11月2日期間有明顯的降溫而且是連續(xù)的陰雨天，桑樹在這期間次生代謝可能停止；11月3日后天氣轉(zhuǎn)晴氣溫回升(平均氣溫20～24℃)，桑葉總酚和黃酮含量有小幅上升；11月8日后桑葉總酚和黃酮含量隨著氣溫下降(下雨)而下降。總之，桑葉總酚、黃酮等物質(zhì)含量可能與光照時(shí)間的長(zhǎng)短、氣溫的變化有關(guān)。

圖3 采樣地點(diǎn)不同日期平均氣溫變化圖

2.3 不同時(shí)期桑葉可溶性總糖含量變化

不同品種桑葉在霜后不同時(shí)期的可溶性總糖含量變化趨勢(shì)與總酚(黃酮)明顯不同，不同品種的變化趨勢(shì)也不一樣(表1和圖4)?？傮w上看，同一品種桑葉在10月26日和11月2日含量接近，顯著高于11月9日和11月16日含量。大10、黑油桑、尖頭荷葉、梨葉大、強(qiáng)桑1號(hào)和甜桑，桑葉可溶性總糖的最低值與最高值相比，分別減少了44.00%、60.88%、30.87%、54.27%、41.27%和60.63%。

圖4 霜后不同時(shí)期桑葉可溶性總糖含量變化

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究了霜后不同時(shí)間不同品種桑葉中內(nèi)含成分動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果表明，不同時(shí)期的桑葉中總酚、黃酮和可溶性總糖含量均有一定差異，且不同成分的變化趨勢(shì)不同?？偡印ⅫS酮的含量變化，隨著霜降后時(shí)間推移，呈逐漸降低趨勢(shì)；桑葉可溶性總糖，經(jīng)霜降后表現(xiàn)為前期較高，后期降低的趨勢(shì)。但總酚、黃酮及可溶性糖的變化均與所處區(qū)域溫度及光照時(shí)間有關(guān)，其變化機(jī)制有待進(jìn)一步研究。因此認(rèn)為同樣是霜后桑葉，采摘時(shí)間對(duì)桑葉有效成分的含量仍然有很大影響，應(yīng)根據(jù)氣候變化和桑葉不同成分的功效，合理選擇采收時(shí)間。

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