超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定動(dòng)物源性食品中氯丙嗪殘留量

□ 李景娜 中檢集團(tuán)中原農(nóng)食產(chǎn)品檢測(cè)（河南）有限公司

近幾年國(guó)家食品安全抽檢從未放松對(duì)豬肉中氯丙嗪的監(jiān)測(cè)，目前比較成熟的氯丙嗪類殘留檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣質(zhì)聯(lián)用法和液質(zhì)聯(lián)用法，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜以其高特異性、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，已成為獸藥殘留檢測(cè)的首選[1]。本研究采用脂肪提取率高的堿性乙酸乙酯提取，正己烷凈化、氘代氯丙嗪為內(nèi)標(biāo)，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)動(dòng)物源性食品中氯丙嗪進(jìn)行測(cè)定，處理簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，抗干擾能力強(qiáng)。

1 材料和方法

1.1 儀器

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀1290-6470、C18色譜柱 （4.6×100 mm，3.5μm）、渦旋振蕩器、超聲波清洗機(jī)、高速離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、分析天平。

1.2 藥品與試劑

鹽酸氯丙嗪，純度≥99.2% ，鹽酸氯丙嗪-D6，純度≥99.0% ；甲醇、乙腈、乙醚、乙酸乙酯、叔丁基甲醚、乙酸銨，色譜純；甲酸、乙酸、氨水，色譜純，科密歐公司；超純水由Milli Q 系統(tǒng)制得。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 液相色譜和質(zhì)譜條件

Eclipse Plus C18（4.6 mm×100 mm，3.5μm）柱溫 40 ℃ ；進(jìn)樣量 2 μL 。流動(dòng)相為乙腈：5 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液（35∶65，V/V），流速0.3 mL/min，等度洗脫；帶鞘氣電噴霧離子源，正離子掃描（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；毛細(xì)管電壓4.0 kV；霧化氣壓力35 psi；霧化氣溫度340 ℃；霧化氣流速10 L/min；鞘氣溫度360 ℃；鞘氣流速11 L/min；分析中以保留時(shí)間和定性離子相對(duì)豐度定性；以氯丙嗪-D6為內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取和凈化條件的優(yōu)化

為有效提取脂溶性藥物氯丙嗪，實(shí)驗(yàn)比較了常用的提取試劑乙腈、甲酸乙腈、乙酸乙腈、堿性叔丁基甲醚、堿性乙醚、堿性乙酸乙酯的提取效果，外標(biāo)法定量。

經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，乙腈及酸化乙腈作為提取劑時(shí)，由于提取出來(lái)的脂肪量較乙酸乙酯少，而氯丙嗪屬于脂溶性藥物，回收率不理想；乙酸乙酯作為提取劑時(shí)，加入1%氨水調(diào)節(jié)pH值呈弱堿性，用正己烷凈化除油，內(nèi)標(biāo)校正，回收率達(dá)90%，效果最好。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件的優(yōu)化

氯丙嗪類藥物是極性較大的弱堿性藥物，實(shí)驗(yàn)分別以乙腈-水、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-乙酸銨+甲酸水溶液為流動(dòng)相。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-水作流動(dòng)相時(shí)峰形拖尾；乙腈-甲酸水溶液為流動(dòng)相時(shí)，峰形好，但分離度稍差；在流動(dòng)相中加入一定比例的銨鹽，可以競(jìng)爭(zhēng)或抑制固定相表面的游離硅醇基活性，使堿性物質(zhì)易于出峰，改善峰形，乙酸銨是較理想的流動(dòng)相，可增強(qiáng)電離作用，因此最終選擇乙腈：5 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液（35∶65，V/V）作為流動(dòng)相。

2.3 線性關(guān)系和檢出限

取一系列氯丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)工作液，在最優(yōu)的色譜和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以定量離子色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氯丙嗪在0.5～100 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，內(nèi)標(biāo)氯丙嗪-D6濃度為固定值2 μg/L。線性方程為：y=1.08923x+0.014722，線性相關(guān)系數(shù)0.998 8。在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照信噪比（S/N）等于3計(jì)算檢出限，信噪比等于10計(jì)算定量限，本方法的檢出限為0.5 μg/kg，定量限為 1.5 μg/kg。

2.4 線性關(guān)系和檢出限

取一系列氯丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)工作液，在最優(yōu)的色譜和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以定量離子色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氯丙嗪在0.5～100 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，內(nèi)標(biāo)氯丙嗪-D6濃度為固定值2 μg/L。線性方程為：y=1.08923x+0.014722，線性相關(guān)系數(shù)0.998 8。在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照信噪比（S/N）等于3計(jì)算檢出限，信噪比等于10計(jì)算定量限，本方法的檢出限為0.5 μg/kg，定量限為 1.5 μg/kg。

2.5 實(shí)際樣品的分析

應(yīng)用本法測(cè)定了當(dāng)?shù)丶爸苓叺貐^(qū)市場(chǎng)常見(jiàn)的豬肉、豬腎、豬肝等40個(gè)樣品，均未檢出氯丙嗪藥物。

3 結(jié)論

本研究建立了一種高效液相色譜-電噴霧電離串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜、等度洗脫的方式測(cè)定動(dòng)物源性食品中氯丙嗪的殘留。方法檢出限0.5 μg/kg，在0.5、1.5、10 μg/kg添加水平下，回收率為72.2%～101.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于10%（n=6）。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，能滿足目前大多數(shù)日常監(jiān)測(cè)和檢測(cè)的要求。