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    食品藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制分析

    2018-01-17 21:27:22馮晨韻馮春艷海南省食品藥品檢驗(yàn)所??诜炙?/span>
    食品安全導(dǎo)刊 2018年24期
    關(guān)鍵詞:菌種無(wú)菌菌株

    □ 馮晨韻 馮春艷 海南省食品藥品檢驗(yàn)所??诜炙?/p>

    隨著微生物檢測(cè)與控制技術(shù)迅猛發(fā)展,危害分析與關(guān)鍵控制點(diǎn)、微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等微生物控制技術(shù)為微生物檢驗(yàn)方法的科學(xué)性提供了更高的要求。而實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制是保證檢測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠的一個(gè)重要手段,是實(shí)驗(yàn)室自我控制質(zhì)量的常規(guī)程序,它能反映檢測(cè)質(zhì)量的穩(wěn)定性,及時(shí)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)分析中的異常情況,隨時(shí)采取相應(yīng)的校正措施,所以實(shí)驗(yàn)室必須具有嚴(yán)格的質(zhì)量控制管理以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果出具的每個(gè)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)都科學(xué)、公正、準(zhǔn)確。在實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制工作中,建立完善的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系,加強(qiáng)環(huán)境設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室關(guān)鍵消耗品、人員、檢驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)操作過程等的全面質(zhì)量管理,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

    檢測(cè)機(jī)構(gòu)由于業(yè)務(wù)本身的敏感性以及提供檢測(cè)報(bào)告這一服務(wù)性的特征,檢驗(yàn)結(jié)果往往作為衡量產(chǎn)品質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn),并為企業(yè)生產(chǎn)、貿(mào)易、政府政策的制定提供重要依據(jù),一旦出錯(cuò)往往對(duì)企業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失,還會(huì)危及人身安全,很容易造成社會(huì)事件,后果嚴(yán)重。為順應(yīng)新的形勢(shì),微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室必須提高自身的技術(shù)管理水平,建立行之有效的質(zhì)量管理體系。在日常工作中注意開展質(zhì)量控制是為了保障檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、公正性、準(zhǔn)確性,更好地服務(wù)于社會(huì)。

    實(shí)驗(yàn)室關(guān)鍵消耗品的管理

    標(biāo)準(zhǔn) 菌株的質(zhì)量控制

    由于實(shí)驗(yàn)室保存的菌種屬于微生物學(xué)檢驗(yàn)中的質(zhì)控品,是數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的決定因素,同時(shí)也是儀器校準(zhǔn)、檢測(cè)質(zhì)量的基礎(chǔ)工具。

    1.標(biāo)準(zhǔn)菌株的來(lái)源

    標(biāo)準(zhǔn)菌株必須來(lái)源于專業(yè)微生物菌種保藏機(jī)構(gòu),分類學(xué)地位明確,形態(tài)、染色、生理生化及血清學(xué)特性典型且穩(wěn)定,以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好,極少發(fā)生變異的菌株。實(shí)驗(yàn)室所用標(biāo)準(zhǔn)菌株主要來(lái)源于美國(guó)典型菌種保藏中心(ATCC)、工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)、農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心(ACCC)、中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏中心(CMCC)。

    2.標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇、復(fù)壯、傳代和保存方法

    標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后,即為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株應(yīng)進(jìn)行純度、特性確認(rèn)、指定其他性能等。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株保存時(shí),可采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍等方法保存,而同一菌株應(yīng)盡量選用兩種及以上方法進(jìn)行保藏,若只能采用一種保藏方法的菌株應(yīng)備份存放于兩個(gè)以上的保藏設(shè)備中。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍和再次使用。所有的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物從標(biāo)準(zhǔn)菌株(0代)傳代培養(yǎng)次數(shù)原則上不得超過5代,以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。菌株必須定期轉(zhuǎn)種傳代,并做確認(rèn)實(shí)驗(yàn),包括存活度、純度、血清型、實(shí)驗(yàn)室中所需要的關(guān)鍵診斷指標(biāo)。

    3.菌種的管理

    實(shí)驗(yàn)室必須指定菌種使用、保藏管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程,并實(shí)行雙人負(fù)責(zé)制管理,以確保溯源性和穩(wěn)定性。對(duì)菌種在使用和保藏過程中產(chǎn)生的廢棄物進(jìn)行消毒滅菌后方可處理,可使用121 ℃高壓滅菌至少30 min,或采用其他有效處理措施,保證其達(dá)到生物學(xué)安全。

    培養(yǎng) 基和試劑的質(zhì)量控制

    培養(yǎng)基和試劑是微生物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。

    1.培養(yǎng)基的購(gòu)買、驗(yàn)收和儲(chǔ)存

    根據(jù)需要制訂購(gòu)買計(jì)劃,選擇合適的供應(yīng)商進(jìn)行購(gòu)買,一般購(gòu)買的數(shù)量控制在一年內(nèi)能夠使用完畢。驗(yàn)收的人員在驗(yàn)貨時(shí),應(yīng)仔細(xì)核對(duì)培養(yǎng)基的各項(xiàng)信息,并做好登記入庫(kù)工作。培養(yǎng)基和試劑應(yīng)嚴(yán)格按照供應(yīng)商提供的貯存條件、有效期和使用方法進(jìn)行保存和使用。開封后的培養(yǎng)基通過觀察粉末的流動(dòng)性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等來(lái)判斷其質(zhì)量的變化,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性質(zhì)發(fā)生明顯改變則不應(yīng)再使用。

    2.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

    新購(gòu)買的培養(yǎng)基在使用之前要先進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn),只有達(dá)到質(zhì)量要求的培養(yǎng)基才能使用。使用具有代表的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基最佳性能的菌株和參考培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照,選擇定量方法、半定量方法或定性方法對(duì)每批培養(yǎng)基或試劑進(jìn)行生長(zhǎng)率、特異性、選擇性或生化特性進(jìn)行驗(yàn)證。選擇培養(yǎng)基上目標(biāo)菌落的外觀大小和形態(tài)都應(yīng)十分典型,非目標(biāo)菌應(yīng)部分或全部被抑制。

    3.培養(yǎng)基的配制、使用和培養(yǎng)

    實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制,并記錄相關(guān)信息。應(yīng)對(duì)經(jīng)濕熱滅菌或過濾除菌的培養(yǎng)基進(jìn)行pH、滅菌效果和均勻度等指標(biāo)進(jìn)行檢查。培養(yǎng)基融化可使用沸水浴或采用相同效果的方法,培養(yǎng)基添加劑應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至46 ℃時(shí)再加入,緩慢充分混勻后盡快分裝到待用的容器中。

    儲(chǔ)存前不要對(duì)瓊脂培養(yǎng)基表面進(jìn)行干燥處理。對(duì)于采用表面接種形式的固體培養(yǎng)基應(yīng)先對(duì)瓊脂表面進(jìn)行干燥,即將平板蓋揭開,將平板倒扣于烘箱或培養(yǎng)箱中,或放在有對(duì)流風(fēng)的無(wú)菌凈化臺(tái)中,直至培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用或存放于暗處或放在4~8 ℃冰箱的密封袋中。為保證平板之間要留有空隙進(jìn)行空氣流通,使培養(yǎng)物的溫度盡快與培養(yǎng)箱溫度達(dá)到一致,培養(yǎng)時(shí)每排最多堆放六個(gè)平板。

    一次 性無(wú)菌耗材的質(zhì)量控制

    現(xiàn)如今許多實(shí)驗(yàn)室為了提高微生物檢測(cè)的效率,選擇使用一次性無(wú)菌耗材,所以其質(zhì)量直決定了檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。實(shí)驗(yàn)室常用的一次性無(wú)菌耗材主要有無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌吸管、無(wú)菌涂布棒、一次性接種環(huán)等。每個(gè)批次的一次性無(wú)菌耗材,按照包裝物或產(chǎn)品說明書上的方法開啟和使用,檢查包裝完整性,是否存在異常情況,任何污染、受潮或物理性狀發(fā)生改變者不得通過檢查。每批次的一次性無(wú)菌耗材至少抽取一個(gè)最小單個(gè)包裝作為測(cè)試抽樣樣品,在無(wú)菌條件下開啟內(nèi)包裝物,按照產(chǎn)品分類分別取樣檢查,判定為無(wú)菌試驗(yàn)符合,方可投入使用。

    診斷 血清和生化鑒定盒的質(zhì)量控制

    驗(yàn)收時(shí)必須看清血清各項(xiàng)信息,并儲(chǔ)存在合適的條件下,若發(fā)生渾濁,出現(xiàn)絮狀,應(yīng)停止使用。使用前應(yīng)驗(yàn)證其有效性,使用客觀的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其品質(zhì)進(jìn)行評(píng)審。實(shí)驗(yàn)過程中避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,應(yīng)注意無(wú)菌操作,避免交叉污染,每套試劑開封后應(yīng)妥善保存并盡快用完。最好備有兩個(gè)產(chǎn)家生產(chǎn)的血清和鑒定盒,以便互相對(duì)照,檢查其可靠性。

    消毒 劑的質(zhì)量控制

    在微生物檢驗(yàn)技術(shù)中,經(jīng)常使用消毒劑殺滅環(huán)境中的微生物,它對(duì)保證檢測(cè)過程避免受或減少微生物污染起重要作用。購(gòu)置的消毒劑根據(jù)其品種、性能、規(guī)格、有效時(shí)間等性質(zhì)存放保存,還需對(duì)其進(jìn)行消毒劑效果驗(yàn)證。按產(chǎn)品說明書的要求操作,稀釋至說明書中規(guī)定的使用劑量,按原衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)中的定量殺菌試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn),其殺菌效果應(yīng)符合要求。

    環(huán)境和設(shè)施的質(zhì)量控制

    環(huán)境 的質(zhì)量控制

    對(duì)有不同要求的區(qū)域加以明確的標(biāo)識(shí)且進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)項(xiàng)目應(yīng)涵蓋到位,包括對(duì)空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數(shù)(溫度、相對(duì)濕度、換氣次數(shù)、氣流速度、壓差、噪聲等)的有效控制和監(jiān)測(cè)。另外,工作人員在進(jìn)入潔凈區(qū)之前要更換潔凈服;生物安全實(shí)驗(yàn)室除按有關(guān)規(guī)范要求進(jìn)行管理和使用之外,尤其要注重防止檢測(cè)人員的職業(yè)暴露。應(yīng)定期對(duì)潔凈實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒,所采用的化學(xué)消毒劑種類不得少于兩種,并定期進(jìn)行更換。常用的消毒方法有紫外線消毒、臭氧消毒、熱力學(xué)滅菌、液體消毒劑消毒等。尤其注意的是,在必要時(shí)可采用熏蒸的方法降低潔凈區(qū)的衛(wèi)生死角的微生物污染,消毒完后需進(jìn)行合理通風(fēng)以保證實(shí)驗(yàn)人員的自身安全。

    設(shè)備 的質(zhì)量控制

    對(duì)新購(gòu)入的儀器要進(jìn)行安裝調(diào)試、儀器培訓(xùn)和驗(yàn)收,對(duì)微生物檢驗(yàn)、檢查、校準(zhǔn)、采樣結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性有重要影響的所有設(shè)備在投入使用前應(yīng)進(jìn)行計(jì)量溯源。但在實(shí)際工作中可能出現(xiàn)計(jì)量部門無(wú)法進(jìn)行計(jì)量的儀器。對(duì)未列入國(guó)家《強(qiáng)制檢定工作計(jì)量器具明細(xì)目錄》的或計(jì)量部門當(dāng)前無(wú)法計(jì)量的儀器,應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室建立內(nèi)部核查規(guī)程進(jìn)行核查。例如全自動(dòng)微生物生化鑒定分析儀、酶聯(lián)免疫分析儀等可以采用標(biāo)準(zhǔn)菌種或質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測(cè)分析判定其準(zhǔn)確性。使用較頻繁的儀器、性能不夠穩(wěn)定且漂移率大的設(shè)備、剛維修或改裝后的儀器、移動(dòng)位置的儀器檢和運(yùn)行中發(fā)現(xiàn)有可疑現(xiàn)象或?qū)С鰯?shù)據(jù)異常的儀器還要進(jìn)行期間核查,期間核查可進(jìn)行簡(jiǎn)化的檢定或校準(zhǔn),其目的在于對(duì)設(shè)備的狀態(tài)是否正常和維持進(jìn)行驗(yàn)證。

    技術(shù)人員的要求

    實(shí)驗(yàn)室應(yīng)由具有一定資質(zhì)的微生物學(xué)或相近專業(yè)的人員來(lái)操作或指導(dǎo)微生物檢測(cè)。技術(shù)人員必須經(jīng)過嚴(yán)格的考核后才能正式上崗,還應(yīng)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的培訓(xùn),以保證檢測(cè)人員的自身安全和防止微生物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部污染而危及環(huán)境。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗(yàn)證或使用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等方式客觀評(píng)估檢測(cè)人員的能力和確認(rèn)其資格。例如:操作實(shí)驗(yàn)室使用的高壓蒸汽滅菌器時(shí),操作人員需持有特種作業(yè)人員證書。

    檢驗(yàn)方法的要求

    實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用國(guó)家、地方或行業(yè)規(guī)定且實(shí)驗(yàn)室具有資質(zhì)的檢驗(yàn)方法。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)非標(biāo)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的方法進(jìn)行確認(rèn),可代替方法的確認(rèn)可參考ISO 16140進(jìn)行。當(dāng)進(jìn)行藥品檢驗(yàn)時(shí),藥典方法或標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法是經(jīng)過驗(yàn)證的,但還應(yīng)進(jìn)行方法適用性確認(rèn)。

    樣品采集、制備及處置的質(zhì)量控制

    樣品的采集和制備是微生物檢驗(yàn)的第一個(gè)步驟,也是保障檢驗(yàn)結(jié)果正確和準(zhǔn)確的必要因素。微生物檢測(cè)樣品的采集應(yīng)遵循隨機(jī)性、代表性的原則,采樣過程不應(yīng)改變產(chǎn)品中原有微生物的狀況,并選取合適的采樣方案,例如二級(jí)采樣方案或者三級(jí)采樣方案,使用的工具和材料應(yīng)是清潔的,有需要時(shí)應(yīng)先做滅菌處理。樣品采集后應(yīng)立即放入適宜的容器并維持適當(dāng)?shù)臏囟冗M(jìn)行運(yùn)輸和儲(chǔ)藏。

    樣品制備應(yīng)在符合潔凈度要求及生物安全要求的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌操作,維持樣品的代表性、隨機(jī)性和穩(wěn)定性,并去除可能干擾目標(biāo)微生物檢測(cè)的因素。冷凍飲品應(yīng)在45 ℃以下不超過15 min,或2~5 ℃不超過18 h解凍后進(jìn)行檢驗(yàn)。特定的微生物檢測(cè)要求從制備樣品勻液至樣品接種完畢,有特殊要求,例如大腸菌群的檢測(cè)中要求全過程不得超過15 min。

    六、檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量控制

    確保實(shí)驗(yàn)室出具的檢驗(yàn)檢測(cè)報(bào)告具有高度的可靠性,通常會(huì)通過內(nèi)部質(zhì)量控制和外部控制評(píng)估檢驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)控。內(nèi)部質(zhì)量控制包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行核查、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部比對(duì)(人員比對(duì)、方法比對(duì)、儀器比對(duì)等);外部質(zhì)量控制可由第三方機(jī)構(gòu)采取一系列的方式連續(xù)地、客觀地評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果,包括定量項(xiàng)目的外控和定性項(xiàng)目的外控。實(shí)驗(yàn)室每年應(yīng)根據(jù)實(shí)際工作的需要制訂質(zhì)量保證計(jì)劃,計(jì)劃盡可能覆蓋所開展的微生物項(xiàng)目和全體檢測(cè)人員。

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