MMT法檢測消瘤湯對胃癌細胞凋亡的影響

文亦磊 黃克強 黃羽

（廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院病理科 廣西 南寧 530023）

消瘤湯是由黨參、半枝蓮、白英等中藥配伍組成的有效抗腫瘤復方制劑，通過其固本培元、解毒利濕、健脾益氣等功效發(fā)揮多層次、多方位的調(diào)整作用，對腫瘤有較好的治療及輔助治療效果[1]。張莉、逄艷等人的研究顯示[2-3]，消瘤湯能夠通過天然抗腫瘤成分或免疫調(diào)節(jié)作用直接或間接抑制乳腺癌及肺癌細胞的增殖。本研究使用MTT法觀察消瘤湯促進胃癌細胞株SGC7901凋亡的情況，為后續(xù)深入研究其抗腫瘤分子機制和信號通路打下基礎。

1.材料與方法

1.1 藥物

按照1995年國家藥典標準采用黨參、半枝蓮、白花蛇舌草、白英、龍葵等制備消瘤湯（濃度3.5g/ml），實驗前再根據(jù)需要將其稀釋調(diào)整為10μg/ml（低劑量）、50μg/ml（中劑量）、100μg/ml（高劑量），5℃環(huán)境下保存。

1.2 細胞與細胞培養(yǎng)

SGC7901胃癌細胞株購自上海生命科學研究院細胞資源中心。細胞常規(guī)培養(yǎng)（1640培養(yǎng)基+37℃+5% CO2），實驗細胞均處于對數(shù)生長期。

1.3 主要試劑及設備

MTT（北京華越洋）；胰蛋白酶（北京華越洋）；無錫華衛(wèi)酶標儀；湘智低溫離心機；無錫一凈超凈工作臺；上海躍進恒溫培養(yǎng)箱。

1.4 實驗方法

取出處于對數(shù)期生長的SGC7901細胞，使用胰蛋白酶收集細胞。將收集到的細胞進行濃度調(diào)整，調(diào)整為1×105個/ml，在3塊96孔板上進行細胞接種，每塊96孔板上都分4組（低劑量組、中劑量組、高劑量組、對照組），每組接種8個孔，每孔接種細胞約1×104個。待細胞貼壁生長后，棄去上清液，其中3個組加入不同濃度的含培養(yǎng)基的消瘤湯：10μg/ml（低劑量組）、50μg/ml（中劑量組）、100μg/ml（高劑量組），第4組對照組只加入培養(yǎng)基。3塊96孔板在相同環(huán)境下分別培養(yǎng)24、48、72 h，然后加入20μl MTT溶液(5mg/ml)，再孵育4h，在實驗過程中，通過二甲基亞砜和振蕩器的處理，最后在酶標儀上進行測試570nm的吸光值。胃癌細胞生長抑制率=（對照組平均吸光值-不同濃度組平均吸光值）/對照組平均吸光值×100%。

1.5 統(tǒng)計學分析

本次研究中，針對數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理，應用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

實驗中可以發(fā)現(xiàn)消瘤湯的確具備抑制胃癌細胞增殖、促進其凋亡的作用，這主要是在3個不同濃度的消瘤湯藥物組中，在3個不同的時間段內(nèi)，消瘤湯都對胃癌細胞產(chǎn)生了一定的抑制作用。其中，消瘤湯在高劑量（100μg/ml）條件下作用72h，對胃癌細胞抑制效果最明顯，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義，詳細內(nèi)容如下分析：

研究中消瘤湯高劑量組、消瘤湯中劑量組、消瘤湯低劑量組以及對照組的培養(yǎng)時間分別為24h，48h，72h，且都是8例數(shù)據(jù)，通過研究可知：

首先，培養(yǎng)24小時后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.491±0.176，抑制率為5.75%，t值△為0.899，P值△＞0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.513±0.234，抑制率為4.36%，t值△為0.600，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.518±0.196，抑制率為4.04%，t值△為0.605，P值△＞0.05；

對照組吸光度為1.582±0.226；

其次，培養(yǎng)48小時后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.452±0.189，抑制率為9.31%，t值△為1.544，P值△＞0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.471±0.221，抑制率為8.12%，t值△為1.242，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.499±0.236，抑制率為6.34%，t值△為0.939，P值△＞0.05；

對照組吸光度為1.601±0.197；

第三，培養(yǎng)72小時后，消瘤湯高劑量組吸光度為1.423±0.196，抑制率為11.72%，t值△為2.040，P值△＜0.05；

消瘤湯中劑量組吸光度為1.459±0.187，抑制率為9.49%，t值△為1.694，P值△＞0.05；

消瘤湯低劑量組吸光度為1.482±0.213 ，抑制率為8.06%，t值△為1.337，P值△＞0.05；

對照組吸光度為1.612±0.174。

△與對照組比較，72h中的消瘤湯高劑量組的吸光度存在差異性，具備研究意義。

3.討論

消瘤湯由黨參、半枝蓮、白花蛇舌草、白英、龍葵等藥物配伍而成，具有補氣養(yǎng)陰、去毒利濕等功效，之前的一些研究顯示，消瘤湯在乳腺癌、肺癌等腫瘤中能發(fā)揮抑制腫瘤細胞增殖、促進凋亡的作用。本研究提示消瘤湯亦能通過其復方藥物中的天然抗腫瘤成分對胃癌SGC7901細胞發(fā)揮抑制作用。其中消瘤湯高劑量組在作用72h后，對胃癌細胞的抑制效果最明顯，但消瘤湯是通過何種信號通路和哪些關鍵基因蛋白發(fā)揮其促進胃癌細胞凋亡的作用，尚待進一步研究。

[1]丁艷蕊，張喆，劉建國，孫勇，朱銳.消瘤湯對實驗性肝癌大鼠肝臟血管內(nèi)皮生長因子表達的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合研究，2009，1(3):133-136.

[2]張莉，張仲海，徐勤，楊趕梅，張子理，甘潔文.扶正消瘤湯對乳腺癌患者生存質(zhì)量及免疫功能影響臨床研究[J].實用中醫(yī)藥雜志，2008，24(8)：482-483.

[3]逄艷，趙美蓉，李學軍.消瘤湯降低中晚期非小細胞肺癌化療不良反應的臨床觀察[J].山東中醫(yī)雜志，2011，30(6)：383-384.