川陳皮素對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)大鼠的降脂減肥及預(yù)防脂肪肝形成作用

馮孔龍，朱曉艾，陳 彤，彭 勃，張立群，戴偉杰，劉 欣，曹 庸,*，陳運(yùn)嬌,*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東 廣州 510642；2.廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006）

川陳皮素對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)大鼠的降脂減肥及預(yù)防脂肪肝形成作用

馮孔龍1,2，朱曉艾1,2，陳 彤1,2，彭 勃1,2，張立群3，戴偉杰1,2，劉 欣1,2，曹 庸1,2,*，陳運(yùn)嬌1,2,*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東 廣州 510642；2.廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006）

目的：研究川陳皮素對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)的大鼠體質(zhì)量、血脂和肝臟的影響。方法：將56 只雄性SD大鼠隨機(jī)分為7 組，即正常組、高脂對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（奧利司他和力平之）和川陳皮素低、中、高劑量組（高脂飼料+0.02%、0.04%、0.08%川陳皮素），對(duì)正常組飼喂普通飼料，其余各組分別飼喂相應(yīng)的高脂飼料，連續(xù)喂養(yǎng)6 周后，考察不同時(shí)期大鼠血清血脂水平變化，檢測(cè)大鼠體質(zhì)量、體內(nèi)脂肪質(zhì)量、臟器變化及肝臟組織形態(tài)變化。結(jié)果：川陳皮素可以有效抑制高脂膳食大鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)，降低Lee’s指數(shù)、食物利用率和脂肪系數(shù)；降低血清中總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）和低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平，其中降低TG作用顯效較快，降低血清TC和LDL-C作用需要較長(zhǎng)時(shí)間；同時(shí)可降低肝臟指數(shù)、血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平，改善肝臟脂肪變性情況。結(jié)論：川陳皮素具有預(yù)防肥胖、輔助降血脂及預(yù)防肝臟脂肪變性的作用。

川陳皮素；高脂膳食；大鼠；預(yù)防肥胖；降血脂；預(yù)防脂肪肝

近年來，肥胖、高脂血癥、心血管疾病、脂肪肝和代謝綜合征已經(jīng)成為社會(huì)公眾健康的巨大威脅。目前患者大都服用減肥藥和調(diào)脂藥來控制肥胖和改善血脂異常，然而這些藥物的副作用明顯，如奧利司他會(huì)引起油性便、脂溶性維生素缺乏和肝損害[1]，他汀類藥物會(huì)引起肌肉損害和肝臟損害等不良反應(yīng)[2]，不能滿足人類對(duì)健康的要求，因此開發(fā)安全、綠色的天然活性產(chǎn)品來代替減肥降脂藥物成為當(dāng)下研究的熱點(diǎn)。

多甲氧基黃酮（polymethoxy flavones，PMFs）是一類以2-苯基色原酮為母核具有兩個(gè)或兩個(gè)以上甲氧基的天然黃酮類化合物，具有低極性和較高的口服生物利用度，存在于柑橘屬植物中，特別是甜橙和柑橘的果皮[3]。PMFs具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化以及抗動(dòng)脈粥樣硬化等多種生物活性[4-10]，自21世紀(jì)以來受到廣泛研究和關(guān)注。目前已有研究證明柑橘黃酮提取物和柑橘PMFs具有調(diào)控脂質(zhì)代謝、降血脂和預(yù)防肥胖的作用[9-12]。膳食中添加羥基化PMFs可以抑制高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠模型的脂肪生成和體質(zhì)量增加[13]。Guo Jingjing等[14]研究發(fā)現(xiàn)，富含PMFs的陳皮提取物能夠預(yù)防肥胖、改善肝臟脂肪變性和預(yù)防2型糖尿病。

圖1 川陳皮素結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Structural formula of nobiletin

川陳皮素，又稱蜜橘黃酮，結(jié)構(gòu)式如圖1。它是柑橘屬植物果皮中含量十分豐富的PMFs之一，具有高滲透性和較高的生物利用度[15]。大量研究已經(jīng)證實(shí)川陳皮素具有抗癌[16-17]、抗炎[7,18]、抗動(dòng)脈粥樣硬化活性[9,19]、抗氧化[18,20]等多種生物活性。目前國(guó)內(nèi)外多以柑橘皮提取物或PMFs混合物為對(duì)象進(jìn)行研究，但是由于生物活性物質(zhì)在體內(nèi)作用的復(fù)雜性，其發(fā)揮作用的具體成分尚不明確，并且研究關(guān)于川陳皮素單體預(yù)防肥胖、降低甘油三酯（triglyceride，TG）和預(yù)防脂肪肝形成等方面的作用在國(guó)內(nèi)外還鮮有報(bào)道。本研究以高脂膳食誘導(dǎo)的SD大鼠為動(dòng)物模型，通過膳食干預(yù)途徑，考察川陳皮素在不同時(shí)期對(duì)大鼠血脂水平變化的影響，以目前常用的減肥藥奧利司他和調(diào)脂藥力平之作為陽(yáng)性對(duì)照，研究陳皮中川陳皮素對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)的大鼠體質(zhì)量、血脂和肝臟的影響，探究川陳皮素在實(shí)際應(yīng)用中的適宜劑量和產(chǎn)生效果的周期，為開發(fā)天然預(yù)防肥胖、降脂保肝保健品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級(jí)雄性SD大鼠，56 只，體質(zhì)量180～200 g，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證明編號(hào)：44007200024596，使用許可證號(hào)：SYXK（粵）2014-0136。

普通飼料購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；高脂飼料購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，配方為：豬油15%、蔗糖20%、酪蛋白10%、膽固醇1.2%、膽鹽0.2%、磷酸氫鈣1%、石粉0.5%、鹽0.2%、基礎(chǔ)飼料51.9%。

川陳皮素（純度98%）由廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心自制。

奧利司他膠囊 重慶植恩藥業(yè)有限公司；力平之膠囊 法國(guó)利博福尼制藥公司；福爾馬林 天津富宇精細(xì)化工；蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染液南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

AL104電子天平 瑞士梅特勒-托利多公司；7600-020全自動(dòng)生化分析儀 日本日立公司；D3024R高速冷凍型微型離心機(jī) 美國(guó)賽洛捷克公司；RM2235石蠟切片機(jī) 德國(guó)徠卡公司；Motic BA400光學(xué)顯微鏡 日本奧林巴斯公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組及飼養(yǎng)條件

根據(jù)《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的規(guī)定，在給予高熱量、高脂食物誘發(fā)大鼠肥胖和脂代謝紊亂的同時(shí)給予受試樣品，考察受試樣品預(yù)防大鼠肥胖和降脂的效果。

選擇健康的成年雄性SD大鼠56 只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分配為7 組，每組8 只，分別為：正常組（飼喂普通飼料）、高脂對(duì)照組（飼喂高脂飼料）、奧利司他組（飼喂高脂飼料+0.06%奧利司他（粉末））、力平之組（飼喂高脂飼料+0.035%力平之（粉末））；川陳皮素低、中、高劑量組（飼喂高脂飼料+0.02%、0.04%、0.08%川陳皮素）。動(dòng)物飼養(yǎng)于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，4 只/籠，群養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度23～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，采用10 h∶14 h晝夜間斷照明。實(shí)驗(yàn)周期為6 周，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水。

1.3.2 樣品采集

在飼喂過程中，第0、4周末對(duì)各組大鼠進(jìn)行眼眶靜脈叢取血，采血前禁食12 h后，并使用無水乙醚麻醉。喂養(yǎng)6 周末，各組大鼠禁食12 h，處死前稱體質(zhì)量，測(cè)量體長(zhǎng)，麻醉后快速摘眼球取血，頸椎脫臼致死，快速分離肝臟、心臟、脾臟、腎臟、腎周脂肪墊和睪丸周脂肪墊，用生理鹽水漂洗臟器，濾紙吸干，并稱臟器和組織質(zhì)量。

1.3.3 指標(biāo)的測(cè)定

1.3.3.1 大鼠體質(zhì)量及攝食量的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)期間每天記錄大鼠生長(zhǎng)狀況（大鼠的毛色、進(jìn)食、排便及活動(dòng)等情況），每周稱量1 次體質(zhì)量并記錄飼料消耗情況。按照公式（1）計(jì)算食物利用率。

式中：Δm為同期內(nèi)體質(zhì)量的增量/g；m為同期內(nèi)的攝食量/g。

1.3.3.2 Lee’s指數(shù)的測(cè)定

Lee’s指數(shù)（肥胖指數(shù)）大鼠斷頸椎處死，稱量體質(zhì)量，將大鼠平攤仰臥，用卷尺準(zhǔn)確測(cè)量大鼠鼻尖至肛門的長(zhǎng)度作為體長(zhǎng)，按照公式（2）計(jì)算Lee’s指數(shù)。

式中：m為大鼠處死前體質(zhì)量/g；L為體長(zhǎng)/cm。

1.3.3.3 臟器指數(shù)的測(cè)定

分離大鼠肝臟、腎臟、脾臟、心臟，稱質(zhì)量，按照公式（3）計(jì)算各臟器指數(shù)。

式中：m為大鼠處死前體質(zhì)量/g；m1為各臟器質(zhì)量/g。

1.3.3.4 脂肪系數(shù)的測(cè)定

剖腹取大鼠體內(nèi)脂肪（包括雙腎周脂肪組織和睪丸周脂肪組織）稱質(zhì)量，按照公式（4）計(jì)算脂肪系數(shù)。

式中：m為大鼠處死前體質(zhì)量/g；m1為大鼠體內(nèi)各脂肪組織質(zhì)量/g。

1.3.3.5 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

將第0、4、6周末采集的血液樣本，25 ℃放置2 h后，3 000 r/min離心10 min，離心取上層血清，-80 ℃冰箱中保存，備用。取血清200 μL用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、TG、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）濃度，谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic oxalacetic transaminase，AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）活力。并按照公式（5）計(jì)算動(dòng)脈硬化指數(shù)（atherosclerosis index，AI）。

式中：cTC為血清TC濃度/（mmol/L）；cHDL-C為血清HDL-C濃度/（mmol/L）。

1.3.3.6 肝臟切片染色觀察

采用HE染色法，取肝臟同一部位的組織經(jīng)10%福爾馬林固定液固定、脫水、石蠟包埋、常規(guī)切片、HE染色，染色切片在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察和圖像分析，觀察病理組織學(xué)變化。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以 ±s表示，采用單因素方差分析，方差齊時(shí)多組間比較采用Duncan’s新復(fù)極差法，方差不齊時(shí)多組間比較采用Dunnett’s T3法。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠一般生長(zhǎng)狀況

實(shí)驗(yàn)期間環(huán)境控制良好，溫、濕度均處于正常的范圍。各組大鼠未見明顯異常，體毛色澤均無變化，飲食、活動(dòng)狀況良好；奧利司他組大鼠出現(xiàn)油性便，并且排便量明顯增多，有腹瀉現(xiàn)象，糞便呈黃褐色長(zhǎng)顆粒狀；其余各組大鼠糞便呈黑褐色長(zhǎng)顆粒狀，尿液正常，有少量撒食現(xiàn)象。

2.2 川陳皮素對(duì)高脂膳食大鼠體質(zhì)量、Lee’s指數(shù)、攝食量和食物利用率的影響

由表1可知，各組大鼠初始體質(zhì)量無顯著差異（P＞0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，高脂對(duì)照組大鼠體質(zhì)量和Lee’s指數(shù)顯著高于正常組（P＜0.05）。與高脂對(duì)照組相比，川陳皮素高劑量組和奧利司他組大鼠的體質(zhì)量和Lee’s指數(shù)顯著降低（P＜0.05）。奧利司他組和川陳皮素低、中、高劑量組的大鼠體質(zhì)量增加量分別比高脂對(duì)照組低18.57%、11.04%、10.91%、13.66%（P＜0.05）。其中川陳皮素高劑量組大鼠最終體質(zhì)量、體質(zhì)量增加量和Lee’s指數(shù)與奧利司他組相比無顯著差異（P＞0.05），說明川陳皮素高劑量的減肥效果與減肥藥奧利司他相當(dāng)。

表1 川陳皮素對(duì)大鼠體質(zhì)量、Lee’s指數(shù)、攝食量和食物利用率的影響Table 1 Effect of nobiletin on body weight, Lee’s index, food intake and food utilization rate in rats

平均攝食量和食物利用率也是影響大鼠體質(zhì)量變化的關(guān)鍵因素，由表1可知，高脂對(duì)照組、力平之組和各劑量組的平均攝食量都顯著少于正常組（P＜0.05），這可能是由于富含膽固醇、高熱量的飼料容易使大鼠產(chǎn)生飽腹感，在一定程度上抑制了大鼠的食欲，減少了攝食量，但高脂對(duì)照組大鼠的食物利用率明顯提高（P＜0.05），導(dǎo)致大鼠體質(zhì)量增加量明顯增加（P＜0.05）。川陳皮素低、中、高劑量組的攝食量與高脂對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），但是它們體質(zhì)量增加量顯著降低，故食物利用率顯著降低（P＜0.05），表明川陳皮素能夠有效抑制大鼠對(duì)高脂飼料的轉(zhuǎn)化和吸收，從而表現(xiàn)出預(yù)防肥胖的作用；同時(shí)可以說明川陳皮素不是通過減少食物攝取量來抑制大鼠體質(zhì)量的增長(zhǎng)。

2.3 川陳皮素對(duì)高脂膳食大鼠體內(nèi)脂肪的影響

表2 川陳皮素對(duì)大鼠脂肪濕質(zhì)量和脂肪系數(shù)的影響Table 2 Effect of nobiletin on fat wet weight and fat to body weight ratio in rats

由表2可知，高脂對(duì)照組大鼠腎周脂肪墊和睪丸周脂肪墊質(zhì)量均顯著高于正常組（P＜0.05），體內(nèi)總脂肪質(zhì)量和脂肪系數(shù)比正常組分別增加了60.09%、40.51%（P＜0.05），表明高脂飲食容易造成體內(nèi)脂肪的堆積。與高脂對(duì)照組相比，奧利司他組、力平之組和川陳皮素低、高劑量組大鼠的體內(nèi)脂總肪質(zhì)量分別降低了26.26%、36.09%、17.75%、20.48%（P＜0.05）。脂肪系數(shù)可以直觀地表示出動(dòng)物個(gè)體的肥胖程度，與高脂對(duì)照組相比，川陳皮素低劑量和高劑量大鼠的脂肪系數(shù)顯著降低（P＜0.05），分別降低11.44%、22.42%，其中高劑量川陳皮素減少體內(nèi)脂肪堆積的效果與減肥藥奧利司他相比無顯著差異（P＞0.05），說明川陳皮素能夠有效抑制大鼠體內(nèi)的脂肪堆積，從而起到控制體質(zhì)量增長(zhǎng)的作用。

2.4 川陳皮素對(duì)高脂膳食大鼠臟器指數(shù)的影響

表3 川陳皮素對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響Table 3 Effect of nobiletin on organ coeff i cients of rats

由表3可知，川陳皮素低、中、高劑量干預(yù)后，高脂膳食大鼠的心臟指數(shù)、脾臟指數(shù)和腎臟指數(shù)與喂食普通飼料的正常組大鼠相比，均無顯著性差異（P＞0.05），說明川陳皮素對(duì)大鼠的心臟、脾臟和腎臟沒有毒副作用。肝臟指數(shù)是動(dòng)物的一項(xiàng)重要生理指標(biāo)。當(dāng)肝臟指數(shù)出現(xiàn)補(bǔ)償性增生時(shí)，肝臟的解毒負(fù)荷也相應(yīng)增加[21]。高脂對(duì)照組大鼠肝臟臟器指數(shù)比正常組大鼠顯著增加了62.80%（P＜0.05），出現(xiàn)了肝臟腫大現(xiàn)象。奧利司他組、川陳皮素低、中、高劑量組比高脂對(duì)照組分別顯著下降了22.22%、7.55%、10.27%、17.40%（P＜0.05），表明奧利司他和川陳皮素能防止大鼠肝臟增大，維持正常肝臟臟器指數(shù)，減小脂肪肝等疾病的發(fā)生概率。然而力平之組大鼠肝臟指數(shù)高于高脂對(duì)照組，但無顯著差異（P＞0.05），出現(xiàn)肝臟腫大現(xiàn)象，這與文獻(xiàn)[22-23]報(bào)道相符。

2.5 川陳皮素對(duì)高脂膳食大鼠血清血脂水平的影響

2.5.1 血清TC水平

圖2 各組大鼠血清TC水平Fig. 2 Serum TC levels of rats

由圖2可知，第0周末，各實(shí)驗(yàn)組的大鼠TC水平無明顯的差異（P＞0.05），高脂對(duì)照組的血清TC水平在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間保持上升趨勢(shì)，第4周末和第6周末比正常組分別增加了31.24%、72.61%（P＜0.05）。低、高劑量川陳皮素和力平之都能顯著抑制血清TC水平的增加，有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，從第4周末開始增勢(shì)逐漸減緩，并在隨后2 周持續(xù)緩慢下降。第6周末，與高脂對(duì)照組相比，川陳皮素低、高劑量組大鼠的血清TC水平顯著降低了26.93%、29.99%（P＜0.05），說明川陳皮素能顯著降低SD大鼠血清TC水平。

2.5.2 血清TG水平

圖3 各組大鼠血清TG水平Fig. 3 Serum TG levels of rats

由圖3可知，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，正常組、力平之組和高劑量組的大鼠血清TG水平一直持續(xù)下降，然而高脂對(duì)照組和川陳皮素低、中劑量組大鼠TG水平從實(shí)驗(yàn)開始持續(xù)上升，到第4周末開始逐漸下降。長(zhǎng)期喂食高脂飼料的高脂對(duì)照組大鼠血脂TG水平并非持續(xù)增加，到達(dá)一定程度時(shí)大鼠機(jī)體會(huì)進(jìn)行自我調(diào)節(jié)[24]。第4周末，相對(duì)于高脂對(duì)照組，奧利司他組、力平之組和川陳皮素低、中、高劑量組的大鼠血清TG水平分別降低45.96%、51.94%、46.03%、31.98%、51.02%（P＜0.05）。隨后2 周時(shí)間內(nèi)，力平之組和低、高劑量組大鼠TG水平顯著下降54.97%、23.18%、40.13%（P＜0.05），其中力平之組和川陳皮素高劑量組與正常組之間無顯著差異（P＞0.05），說明川陳皮素能顯著降低SD大鼠血清TG水平。

2.5.3 血清HDL-C水平

圖4 各組大鼠血清HDL-C水平Fig. 4 Serum HDL-C levels of rats

由圖4可知，在第4、6周末，各組血清HDL-C水平均有持續(xù)下降的趨勢(shì)。相對(duì)于正常組，喂食高脂飼料的高脂對(duì)照組大鼠血清HDL-C水平顯著下降（P＜0.05），說明高脂飲食能夠引起HDL-C水平的降低。川陳皮素低、中、高劑量組的HDL-C水平與高脂對(duì)照組相比均無顯著性差異（P＞0.05），說明川陳皮素對(duì)大鼠血清HDL-C水平的影響較小。

2.5.4 血清LDL-C水平

圖5 各組大鼠血清LDL-C水平Fig. 5 Serum LDL-C levels of rats

如圖5所示，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)各組大鼠血清LDL-C水平無明顯差別，在川陳皮素干預(yù)6 周后，低、中、高劑量組也能夠顯著地抑制LDL-C水平增加（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)與高脂對(duì)照組相比分別降低了47.93%、27.46%、54.98%（P＜0.05）。其中川高劑量陳皮素對(duì)LDL-C水平降低效果最好，優(yōu)于力平之組，最終接近于正常組水平，并且已經(jīng)恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)初期的水平，說明川陳皮素能有效降低SD大鼠血清LDL-C水平。

2.5.5 血清AI

圖6 各組大鼠血清AIFig. 6 Serum AI levels of rats

由圖6可知，在第4、6周末，高脂對(duì)照組大鼠的AI顯著高于正常組（P＜0.05），說明動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的可能性極高。與高脂對(duì)照組相比，川陳皮素高劑量組和力平之組大鼠的AI顯著降低（P＜0.05），雖然與正常組相比存在較明顯的差異，但已經(jīng)較好地抑制大鼠AI的進(jìn)一步增加，在一定程度上預(yù)防心血管疾病的發(fā)生。

以上結(jié)果表明，與高脂對(duì)照組相比，川陳皮素能夠有效降低血清TC、TG和LDL-C水平，降低AI，并且降低TG作用顯效較快，降低血清TC和LDL-C作用需要較長(zhǎng)時(shí)間，具有降血脂功效，從而降低動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病發(fā)生和發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)。

2.6 川陳皮素對(duì)高脂膳食大鼠肝臟的保護(hù)作用

2.6.1 川陳皮素對(duì)高脂膳食大鼠肝功能的影響

圖7 各組大鼠血清ALT（A）和AST（B）水平Fig. 7 Serum ALT (A) and AST (B) levels of rats

如圖7所示，與正常組相比，高脂對(duì)照組大鼠血清中的ALT和AST活力顯著升高（P＜0.05），說明高脂飲食會(huì)引起肝功能的損害。第4周末，與高脂對(duì)照組相比，奧利司他組、川陳皮素低和中、高劑量組血清ALT和AST水平顯著降低（P＜0.05）。隨著飼喂時(shí)間延長(zhǎng)，各組血清ALT和AST活力均有所增加，力平之組、低劑量組和中劑量組低于高脂對(duì)照組，但均無顯著性差異（P＞0.05），表明其6 周后不再表現(xiàn)出降低的作用。而奧利司他和高劑量均能持續(xù)顯著降低血清ALT和AST活力（P＜0.05），其中高劑量的抑制效果更為顯著，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)分別降低了46.01%、24.56%，并且與正常組水平相當(dāng)，表明川陳皮素具有預(yù)防或緩解由高脂膳食誘導(dǎo)的肝損傷，保護(hù)肝臟的作用。

2.6.2 肝臟組織形態(tài)學(xué)分析

圖8 肝臟病理HE染色觀察（×100）Fig. 8 Histopathological examination of liver tissues from rats (× 100)

如圖8所示，正常組大鼠肝臟中肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列致密整齊、形態(tài)清晰，細(xì)胞質(zhì)豐富均勻，未見脂肪變性現(xiàn)象。高脂對(duì)照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)不清晰，肝索解離，肝血竇消失，肝細(xì)胞腫脹且排列松散，胞質(zhì)內(nèi)充滿了大小、數(shù)量不等的脂滴小空泡以及大空泡，肝臟脂肪變性嚴(yán)重，屬于重度脂肪肝。奧利司他組大鼠肝細(xì)胞形態(tài)比較正常，有少數(shù)脂滴空泡，與正常組較接近。力平之組大鼠肝組織脂肪中度變性，其肝小葉結(jié)構(gòu)仍難以辨認(rèn)，肝細(xì)胞胞漿中可見存在較多的脂滴小空泡和大空泡，部分細(xì)胞核邊緣化。然而與高脂對(duì)照組相比，川陳皮素低、中、高劑量組大鼠肝臟脂肪變性得到明顯的改善，肝小葉結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)，且脂滴空泡數(shù)量明顯減少。尤其是川陳皮素高劑量組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)大部分得到改善，肝索排列整齊，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞漿出現(xiàn)零星脂滴，這一結(jié)果與肝臟臟器指數(shù)和血清ALT、AST活力的結(jié)果對(duì)應(yīng)，表明川陳皮素可以改善肝細(xì)胞脂肪變性，具有預(yù)防脂肪肝作用。

3 討 論

本研究結(jié)果表明，川陳皮素同時(shí)具有預(yù)防肥胖、降血脂和保護(hù)肝臟的效果，其中川陳皮素高劑量組的減肥效果優(yōu)于力平之，接近于奧利司他；改善血脂異常的效果與力平之接近，優(yōu)于奧利司他。在改善肝細(xì)胞脂肪變性方面，川陳皮素和奧利司他效果較好，而力平之效果相對(duì)較差。因此川陳皮素能夠改善高脂膳食引起的肥胖，同時(shí)對(duì)肝臟具有保護(hù)作用，也適用于預(yù)防血脂異常和預(yù)防脂肪肝等相關(guān)疾病。

體質(zhì)量、脂肪系數(shù)與Lee’s指數(shù)是反映大鼠肥胖程度的重要指標(biāo)。Lee等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在切除卵巢的C57BL/6J小鼠模型中，口服50、100 mg/（kg·d）的川陳皮素可降低小鼠體質(zhì)量，減少體內(nèi)白色脂肪組織，降低血漿TG和脂聯(lián)素水平，改善肥胖和血脂異常等癥狀。本研究發(fā)現(xiàn)川陳皮素可以有效抑制雄性SD大鼠體質(zhì)量增加，降低食物利用率、Lee’s指數(shù)和脂肪指數(shù)，其中川陳皮素高劑量組與高脂對(duì)照組差異性最明顯，并且該組大鼠攝入樣品量與奧利司他組樣品攝入量幾乎相等，分別為19.56、19.39 mg/（d·只），說明兩者抑制體質(zhì)量增長(zhǎng)效果相當(dāng)。以上結(jié)果表明川陳皮素能夠有效抑制大鼠對(duì)高脂飼料的轉(zhuǎn)化與吸收和大鼠體內(nèi)的脂肪堆積，控制體質(zhì)量增長(zhǎng)，從而預(yù)防肥胖。

目前有關(guān)柑橘黃酮調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝研究甚多，柑橘黃酮可以減少巨噬細(xì)胞對(duì)氧化低密度脂蛋白的攝取和巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的積累，抑制肝臟脂質(zhì)積累和脂蛋白的過量生產(chǎn)，從而降低動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)，然而降脂機(jī)制尚未完全明確[26]。Lin Yuguang等[27]研究發(fā)現(xiàn)，川陳皮素能夠抑制HepG2細(xì)胞脫輔基蛋白B（Apo B）的分泌，有效抑制膽固醇和TG的合成，并且對(duì)LDL-受體活性沒有影響。川陳皮素也可以調(diào)控3T3-L1脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)代謝[28]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川陳皮素能顯著降低SD大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，但對(duì)HDL-C水平影響較小。力平之能顯著降低血清TG水平，輕度降低TC和LDL-C水平，升高HDL-C水平，其中高劑量川陳皮素降低TC和LDL-C效果優(yōu)于力平之，降低TG效果與其相當(dāng)。本實(shí)驗(yàn)在不同時(shí)期（0、4、6 周）對(duì)各組大鼠采血，發(fā)現(xiàn)低、中、高劑量川陳皮素表現(xiàn)出明顯的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，其中降低TG作用顯效較快，于第4周末降低TG效果已經(jīng)顯著；但降低血清TC和LDL-C水平需要較長(zhǎng)時(shí)間，直至飼喂到第6周末才表現(xiàn)出顯著效果。

肝臟作為機(jī)體脂質(zhì)、糖類及蛋白質(zhì)代謝的中心器官，代謝性疾病往往與肝組織發(fā)生病變有密切關(guān)系。脂肪肝則是由于肥胖、高脂飲食、飲酒、糖尿病等各種原因?qū)е逻^多的脂肪沉積在肝細(xì)胞內(nèi)而形成。體外實(shí)驗(yàn)研究表明，川陳皮素能夠抑制白細(xì)胞介素1β誘導(dǎo)的肝細(xì)胞的一氧化氮合酶基因的表達(dá)，可能是與其抗炎活性有關(guān)，因此川陳皮素存在治療肝臟疾病的潛力[29]。本研究中，川陳皮素能夠有效降低SD大鼠的肝臟指數(shù)和肝功能指標(biāo)ALT、AST水平，同時(shí)對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性有改善作用，減少肝臟損傷，從而達(dá)到保護(hù)肝臟的作用。本研究也發(fā)現(xiàn)力平之組大鼠的肝臟指數(shù)、血清ALT和AST水平與高脂對(duì)照組無顯著性差異，肝病理檢查發(fā)現(xiàn)其未能改善肝細(xì)胞脂肪變性，與閻明[22]和呂瑞娟[30]等的研究結(jié)果一致。

綜上所述，川陳皮素能夠抑制高脂膳食誘導(dǎo)大鼠的體質(zhì)量和脂肪組織增長(zhǎng)；降低血清中TC、TG和LDL-C水平；降低血清ALT和AST水平，改善肝臟脂肪變性。結(jié)果證明川陳皮素具有預(yù)防肥胖、輔助降血脂和保護(hù)肝臟作用，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，但是其作用機(jī)理有待進(jìn)一步深入探討。

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Hypolipidemic and Anti-Obesity Effect of Nobiletin and Its Role in Prevention of Fatty Liver in High Fat Diet-Fed Rats

FENG Konglong1,2, ZHU Xiaoai1,2, CHEN Tong1,2, PENG Bo1,2, ZHANG Liqun3, DAI Weijie1,2, LIU Xin1,2,CAO Yong1,2,*, CHEN Yunjiao1,2,*
(1. College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;2. Guangdong Engineering Research Center of Natural Active Substance, Guangzhou 510642, China;3. College of Fundamental Medical Science, Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China)

Objective: The effect of nobiletin on the body weight, serum lipids and liver of rats exposed to a high-fat diet were investigated. Methods: Totally 56 male SD rats were randomly divided into seven groups: normal control group, highfat diet control group, positive control groups (orlistat and fenof i brate), and low-, middle- and high-dose nobiletin groups(high-fat diet + 0.02%、0.04%、0.08% nobiletin). The rats in the normal control group were fed normal diet, while the remaining groups were fed high-fat diet plus the corresponding drugs for six weeks. Then serum lipid parameters, body weight, body fat weight, organ weight to body weight ratios and liver histopathology were examined. Results: Nobiletin could inhibit body weight gain induced by high-fat diet in rats, reduce Lee’s index, food utilization rate and fat to body weight ratio, and decrease serum total cholesterol (TC), triglyceride (TG), and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C)levels with the fastest rate of decrease being observed for TG. Compared with the high-fat control group, liver index and serum glutamic oxalacetic transaminase (AST) and alanine transaminase (ALT) activities in the nobiletin treatment groups were decreased, and fatty degeneration of the liver was improved. Conclusion: Nobiletin can reduce serum lipids and prevent obesity and fatty liver.

nobiletin; high-fat diet; rats; obesity prevention; hypolipidemic; prevention of fatty liver

10.7506/spkx1002-6630-201801032

R151.1

A

1002-6630（2018）01-0213-08

2016-10-20

廣東省天然活性物工程技術(shù)研究中心項(xiàng)目（2016B090920093）；廣東省教育廳科研項(xiàng)目（2013gjhz0003）；廣東省自然科學(xué)基金博士啟動(dòng)項(xiàng)目（2015A030310118）

馮孔龍（1992—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail：fkonglong@163.com

*通信作者簡(jiǎn)介：曹庸（1966—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称坊瘜W(xué)與營(yíng)養(yǎng)。E-mail：caoyong2181@scau.edu.cn

陳運(yùn)嬌（1984—），女，講師，博士，研究方向?yàn)槭称坊瘜W(xué)與營(yíng)養(yǎng)。E-mail：yunjiaochen@scau.edu.cn

馮孔龍, 朱曉艾, 陳彤, 等. 川陳皮素對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)大鼠的降脂減肥及預(yù)防脂肪肝形成作用[J]. 食品科學(xué), 2018, 39(1):213-220.

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FENG Konglong, ZHU Xiaoai, CHEN Tong, et al. Hypolipidemic and anti-obesity effect of nobiletin and its role in prevention of fatty liver in high fat diet-fed rats[J]. Food Science, 2018, 39(1): 213-220. (in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-201801032. http://www.spkx.net.cn