山東省部分地區(qū)屠宰場(chǎng)豬旋毛蟲病檢測(cè)

蓋文燕，王君瑋，王 娟，黃秀梅，曲志娜，洪 軍

（中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

山東省部分地區(qū)屠宰場(chǎng)豬旋毛蟲病檢測(cè)

蓋文燕，王君瑋，王 娟，黃秀梅，曲志娜，洪 軍

（中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

為了解山東省屠宰場(chǎng)豬群的旋毛蟲感染情況，對(duì)2015—2017年從全省9個(gè)市豬屠宰場(chǎng)采集的758頭份血清，采用ELISA方法進(jìn)行旋毛蟲抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)近3年的旋毛蟲抗體陽(yáng)性率分別為1.42%、1.54%、1.74%，平均陽(yáng)性率為1.58%。對(duì)12份ELISA檢測(cè)陽(yáng)性豬的膈肌肉樣進(jìn)行旋毛蟲壓片鏡檢和消化法檢測(cè)，均未發(fā)現(xiàn)旋毛蟲蟲體。ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果表明，山東省部分地區(qū)屠宰豬群存在不同程度的旋毛蟲感染，且在個(gè)別地區(qū)呈持續(xù)感染狀態(tài)。

旋毛蟲；ELISA；血清學(xué)；壓片鏡檢法；消化法

旋毛蟲?。═richinellosis）是由旋毛蟲引起的一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病。人類感染旋毛蟲主要是通過(guò)生食或半生食含有幼蟲囊包的豬肉及豬肉制品所致。旋毛蟲病不僅是一個(gè)非常重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，給人類健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅，而且對(duì)畜牧養(yǎng)殖業(yè)、肉食品加工業(yè)，以及外貿(mào)出口造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，已成為影響我國(guó)食品安全和人類健康的重要因素之一。在屠宰檢疫中，旋毛蟲是首檢寄生蟲，為肉類和肉制品的必檢項(xiàng)目[1]。壓片鏡檢法和免疫膠體金檢測(cè)法相結(jié)合是旋毛蟲屠宰檢疫的主要方式，但現(xiàn)場(chǎng)檢出率較低。為了解山東省屠宰場(chǎng)豬旋毛蟲感染情況，對(duì)2015—2017年從全省9個(gè)市豬屠宰場(chǎng)采集的血清和膈肌肉樣進(jìn)行旋毛蟲病檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1豬血清和膈肌 從山東省9個(gè)市（濟(jì)南、臨沂、日照、煙臺(tái)、濰坊、棗莊、德州、淄博和青島）28個(gè)豬屠宰場(chǎng)，隨機(jī)采取外觀健康豬血清758份，對(duì)應(yīng)豬兩側(cè)膈肌肉樣758份。每頭豬采集血清1 mL，存儲(chǔ)備用；膈肌樣品100 g/份，注明生豬來(lái)源。所有血清樣品和膈肌樣品編號(hào)一致。

1.1.2試劑 旋毛蟲抗體ELISA快速診斷檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)273501）：德國(guó)Qiagen公司提供，主要檢測(cè)豬及野豬的血清和血漿抗體；消化液：胃蛋白酶（3 000 UI）10 g、鹽酸（質(zhì)量體積比1.19 g/mL）10 mL、蒸餾水1 000 mL，40 ℃攪拌溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 方法

1.2.1ELISA方法 嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明書操作，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果用光學(xué)密度（OD450）測(cè)量。結(jié)果判斷：在酶標(biāo)儀OD450波長(zhǎng)讀結(jié)果；陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果的OD450≥0.7，陰性對(duì)照結(jié)果的OD450≤0.2，結(jié)果成立；S/P≥0.3判定為陽(yáng)性，S/P≤0.3判定為陰性。

1.2.2壓片鏡檢法 取膈肌肉樣，撕去外膜，用大拇指和中指握住肉樣兩端，以食指頂住，使肌纖維繃緊，用小剪刀順肌纖維方向，隨機(jī)取米粒大肉樣（見到針尖大小白點(diǎn)時(shí)必須剪下），每份肉樣剪24粒；將剪下的肉粒均勻放在清潔玻片上，排成2排，每排12粒；蓋上玻片，輕輕壓平、壓均勻，置顯微鏡下觀察（如果是冰凍的肉樣，可用5%的美蘭染色1 min后檢查）。

1.2.3消化法 將ELISA檢測(cè)陽(yáng)性相對(duì)應(yīng)的膈肌肉樣，應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室配置的消化液，嚴(yán)格按照國(guó)標(biāo)《豬旋毛蟲病診斷技術(shù)》（GB/T18642—2002）規(guī)定方法操作。

2 結(jié)果

共檢測(cè)山東省9個(gè)市28個(gè)豬屠宰場(chǎng)的血清758份，發(fā)現(xiàn)2015—2017年旋毛蟲抗體陽(yáng)性率分別 為 1.42%（3/211）、1.54%（4/260）、1.74%（5/287），平均陽(yáng)性率為1.58%（12/758）；同時(shí)對(duì)12份ELISA檢測(cè)陽(yáng)性血清對(duì)應(yīng)的膈肌樣品，直接進(jìn)行壓片鏡檢和消化法檢測(cè)，均未檢出旋毛蟲體（表1）。

3 討論

動(dòng)物旋毛蟲病的檢測(cè)方法包括肌肉壓片鏡檢法、消化法和血清學(xué)法。本研究應(yīng)用3種檢測(cè)方法對(duì)同一編號(hào)樣品進(jìn)行檢測(cè)。從3種方法檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，ELISA法檢出率最高，3年的平均檢出率達(dá)到1.58%；壓片鏡檢和消化法均未檢出蟲體。3種方法檢測(cè)結(jié)果差異較大。究其原因可能與3種檢測(cè)方法的敏感性、檢測(cè)人員的操作熟練程度，以及旋毛蟲的發(fā)育史、感染特點(diǎn)和感染輕度有關(guān)。壓片鏡檢法是許多國(guó)家肉類中旋毛蟲的檢疫方法。該法敏感性較低，每克肌肉含有6條或6條以下幼蟲時(shí)的漏檢率達(dá)52%[2]，因此目前不是旋毛蟲檢疫的首選方法。消化法為國(guó)際旋毛蟲委員會(huì)推薦使用的方法[3]，其檢出率為每克肌肉中有1個(gè)幼蟲。但李峰等[4]對(duì)每克含有1個(gè)幼蟲的豬肉，用消化法進(jìn)行檢測(cè)的幼蟲檢出率僅為10%，說(shuō)明該法極易漏檢。血清學(xué)方法主要為ELISA法。該法可以檢測(cè)出每克肌肉小于1個(gè)蟲體的感染強(qiáng)度，敏感性高且耗時(shí)短，但對(duì)旋毛蟲早期感染檢測(cè)的假陽(yáng)性率偏高，同時(shí)血清學(xué)方法只能用于檢測(cè)血清樣品，無(wú)法檢測(cè)屠宰后肉品。從上述3種方法的特點(diǎn)來(lái)看，鏡檢法只適用于中度或重度感染的豬，在感染早期及輕度感染時(shí)不適合使用；在沒有酶標(biāo)儀、試劑盒的情況下，對(duì)屠宰后肉品的檢疫，可以選用消化法。ELISA法雖然其特異性有待于研究，但有靈敏性高和檢出率高的特點(diǎn)，可用于血清學(xué)診斷和血清流行病學(xué)調(diào)查，同時(shí)也可用于感染豬的生前診斷。本研究選用3種檢測(cè)方法，對(duì)山東省部分地區(qū)屠宰場(chǎng)進(jìn)行豬旋毛蟲病檢測(cè)，可以做到早確診、早治療、早康復(fù)，從而避免感染旋毛蟲豬肉的上市，讓人民群眾吃上放心肉。

表1 山東省部分地區(qū)豬屠宰場(chǎng)旋毛蟲抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，2015—2017年山東省9個(gè)市屠宰場(chǎng)豬群存在不同程度的豬旋毛蟲感染，旋毛蟲抗體平均陽(yáng)性率為1.58%，且在個(gè)別地區(qū)呈持續(xù)感染狀態(tài)。各地區(qū)應(yīng)高度重視并積極開展豬旋毛蟲病防治工作，認(rèn)真做好屠宰場(chǎng)的豬旋毛蟲檢驗(yàn)。

本次調(diào)查的山東省部分地區(qū)屠宰場(chǎng)豬旋毛蟲的平均感染率與楊永斌等[5]報(bào)道的青海省部分商品豬旋毛蟲感染陽(yáng)性率為1.78%的結(jié)果相近，但明顯低于韋春葵等[6]2008年對(duì)廣西市崇左市調(diào)查的豬屠宰場(chǎng)旋毛蟲感染陽(yáng)性率（25.9%），高于彭達(dá)平等[7]2014年對(duì)東莞市屠宰場(chǎng)調(diào)查的旋毛蟲感染陽(yáng)性率（0.44%）。這可能與不同地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生條件、人員衛(wèi)生習(xí)慣等因素有關(guān)。本次調(diào)查覆蓋了山東省9個(gè)市（濟(jì)南、臨沂、日照、煙臺(tái)、濰坊、棗莊、德州、淄博和青島）28個(gè)豬屠宰場(chǎng)。受采樣條件限制，只在青島市和臨沂市兩個(gè)地區(qū)連續(xù)3年采集到樣品，在其他地區(qū)都是分散采集到的。但是，連續(xù)3年的檢測(cè)結(jié)果仍能反映出山東省部分地區(qū)屠宰場(chǎng)豬群的旋毛蟲感染狀況。

[1] 崔晶，王中全. 肉類及肉類食品中旋毛蟲檢疫的現(xiàn)狀與對(duì)策[J]. 肉品衛(wèi)生，2005（12）：20-23.

[2] BECK R，MIHALJEVIC Z，MARINCULIC A.Comparison of trichinelloscopy with a digestion method for the detection of Trichinella larvae in muscle tissue from naturally infected pigs with low level infections [J].Veterinary parasitology，2005，132（1/2）：97-100.

[3] GAMBLE H R，BESSONOV A S，CUPERLOVIC K，et al. International commission on Trichinellosis：recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption [J]. Veterinary parasitology，2000，93（3/4）：393-408.

[4] 李峰，王莉，王中全，等. 人工消化法對(duì)豬肉中旋毛蟲檢疫敏感性的研究[J]. 熱帶病與寄生蟲學(xué)，2008，6（3）：133-135.

[5] 楊永斌，張秀娟，葉成紅，等. 青海省部分地區(qū)商品豬旋毛蟲感染的血清學(xué)調(diào)查[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（9）：135-136.

[6] 韋春葵，黃國(guó)敏. 崇左市屠宰豬旋毛蟲感染情況調(diào)查報(bào)告[J]. 畜牧獸醫(yī)科技信息，2008（9）：53-54.

[7] 彭達(dá)平，盧小明，謝柱彬，等. 東莞市屠宰場(chǎng)旋毛蟲血清學(xué)調(diào)查[J]. 畜牧獸醫(yī)科技信息，2016（6）：31-32.

Swine Trichinosis Detection in Slaughterhouses in Some Areas of Shandong Province

Gai Wenyan，Wang Junwei，Wang Juan，Huang Xiumei，Qu Zhina，Hong Jun

（China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shandong 266032，China）

In order to recognize the infection status of swine Trichinosis in slaughterhouses in Shandong Province，758 serums were collected from swine slaughterhouses of 9 cities from 2015 to 2017，and detection of Trichinella antibody was carried out by ELISA. The results showed that the antibody positive rates from 2015 to 2017 were 1.42%，1.54% and 1.74%，respectively，with an average position rate of 1.58%. And 12 phrenic muscle samples，of which the ELISA test was positive，were tested by tabletting microscopy and artificial digestion methods，and no Trichinella spiralis was found. The results of ELISA antibody test showed that there were different degrees of Trichinella infection in slaughtered swine in some area of Shandong Province，and there was persistent infection status in individual regions.

Trichinella spiralis；ELISA；serology；tabletting microscopy；artificial digestion method

國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估專項(xiàng)（GJFP201700703）

王君瑋

S851.3

A

1005-944X（2018）01-0011-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.003

朱迪國(guó)）