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    兩個大環(huán)柄菇屬野生菌的鑒定與生境觀測

    2017-10-19 03:02:26顧新偉趙玉蓮宋小亞吳邦仁
    食用菌 2017年5期
    關(guān)鍵詞:菌柄鱗片堿基

    顧新偉 趙玉蓮 劉 昆 宋小亞 吳邦仁

    (1麗水市農(nóng)作物站,浙江麗水323000;2麗水市蓮都區(qū)聯(lián)城農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)站,浙江麗水323000;3麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院,浙江麗水323000)

    通常認(rèn)為,大環(huán)柄菇屬多為可食用大型真菌,其中不乏具有獨(dú)特風(fēng)味和保健功能的珍貴食用菌[1,2]。大環(huán)柄菇屬真菌子實(shí)體大型,菌蓋常有粗大鱗片,菌柄具可活動的菌環(huán),大環(huán)柄菇屬共同的宏觀特征常使基層食用菌專業(yè)人員誤認(rèn)。根據(jù)相關(guān)報道,我國該屬物種共6個,其中,脫皮大環(huán)柄菇(Macrolepiota detersa)和裂皮大環(huán)柄菇(M.excoriata)是我國于2010年認(rèn)定的2個新種[1-3]。根據(jù)國內(nèi)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果,大環(huán)柄菇分離應(yīng)用研究多集中于高大環(huán)柄菇(M.procera)。浙江省域報道的大環(huán)柄菇屬種群仍停留于20世紀(jì)80年代的高大環(huán)柄菇與粗鱗大環(huán)柄菇(M.rachodes)2個種,而按照最新的真菌分類與系統(tǒng)學(xué)研究成果,粗鱗大環(huán)柄菇現(xiàn)歸青褶傘屬(Chlorophyllum rachodes),我國通常仍歸環(huán)柄菇屬(Lepiota rachodes)。因此,高大環(huán)柄菇為浙江唯一記錄的大環(huán)柄菇屬物種[4]。

    鑒于大環(huán)柄菇在不同生境中有較大的形態(tài)差異,各種間宏觀形態(tài)又具有一定相似性,筆者對采集到的2個大環(huán)柄菇屬子實(shí)體標(biāo)本,在進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定的同時開展rDNA-ITS分析。通過形態(tài)特征與核酸序列比對結(jié)果相互驗(yàn)證,確定兩個標(biāo)本并非浙江省原記錄的高大環(huán)柄菇。

    1 材料與方法

    1.1 生境觀測分別在浙江麗水市蓮都區(qū)聯(lián)城街道辦事處對面林地,采集標(biāo)本編號M1,在麗水市白云山森林公園右南坡林地,采集標(biāo)本編號M2,觀察兩個大環(huán)柄菇發(fā)生點(diǎn)土壤、肥力、地表植被等主要生境。調(diào)取兩個發(fā)生點(diǎn)附近氣象觀測站相關(guān)數(shù)據(jù),分析標(biāo)本發(fā)生條件因子,為分離馴化提供參考。

    1.2 子實(shí)體形態(tài)特征鑒定對采集的標(biāo)本重點(diǎn)觀察記錄菌蓋形態(tài)、大小、表面及邊緣特征,鱗片形態(tài)、顏色,菌肉質(zhì)地與顏色,菌褶顏色、形態(tài)以及與菌柄的關(guān)系,菌柄長度與直徑、表面特征及內(nèi)部結(jié)構(gòu)、質(zhì)地、基部形態(tài),菌環(huán)著生位置、形態(tài)、質(zhì)地和表面特征等宏觀特征。將觀察結(jié)果與最新發(fā)表的參考文獻(xiàn)進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢索比對[1-3]。

    1.3 rDNA-ITS分析將形態(tài)存在顯著差異的二個標(biāo)本的ITS擴(kuò)增產(chǎn)物由生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序,測得的序列與GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,通過BLASTn檢索具有最大相似性的物種。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 發(fā)生地主要生境兩個標(biāo)本均于9月27日發(fā)現(xiàn)(采集),附近氣象監(jiān)測站提供的數(shù)據(jù)顯示,兩個站點(diǎn)的采集前后一周降水及溫濕度數(shù)據(jù)非常接近。其中白云山莊站采集前一周為陰雨天氣,最大日降雨量23.5 mm,七天總降雨量67.6 mm。出菇前后溫濕度情況見圖1、2。

    圖1 出菇期最高、平均、最低溫度

    圖2 出菇期平均、最低相對濕度

    M1標(biāo)本采集于村莊附近古香樟樹下,野生子實(shí)體1個。距東北側(cè)4 m為村莊道路,距西南20 m為溪灘開墾的果園和菜地,120 m外是甌江小支流。香樟樹下無其它木本植物,郁閉度約75%,地上混生以禾本科為主的多種一年生雜草,雜草與子實(shí)體高度基本相當(dāng),地表有上年的枯草和香樟枯枝落葉構(gòu)成的有機(jī)質(zhì),較肥厚。土壤為沙壤土,土地濕潤。該種當(dāng)?shù)爻R?,采集?dāng)天還發(fā)現(xiàn)另外兩處,共3個,均呈單生狀,生境相似。

    M2標(biāo)本發(fā)生森林公園一護(hù)林點(diǎn)進(jìn)出路口旁,周邊馬尾松、泡桐和小葉櫟組成的混交林,高大茂密,郁閉度約65%。地上長一種一年生闊葉植物,高約1 m(后被護(hù)林員砍除),地表因經(jīng)常清掃,枯枝落葉較少,土壤為混雜砂石的粘土。子實(shí)體生長區(qū)域面積約3.5 m2,共生23個,呈散生至群生狀。

    2.2 主要形態(tài)特征M1發(fā)現(xiàn)時已呈完全開傘狀。菌蓋直徑11 cm,扁半球形,中間無凸起,邊緣有白色至污白色內(nèi)菌膜殘余,表面被由表皮皸裂成的片狀或塊狀鱗片;鱗片褐色至棕褐色,邊緣少,有脫落,近中間漸密,中間呈龜裂狀連成整片;裸露的表面菌肉會形成平伏的纖毛狀鱗片,呈淡黃白色至灰白色。菌肉白色,肉質(zhì),較厚。菌褶白色,寬,不等長,離生。菌柄長21 cm,直徑0.7~0.9(1.1)cm,上細(xì)下漸粗,淡棕紅色,表面具密集的粉粒狀棕褐色鱗片,纖維質(zhì),中間松軟,拔取時基部殘缺。菌環(huán)上位生,中間部分較厚,近肉質(zhì),灰褐色;邊緣部分膜質(zhì),薄,脆,向上呈杯狀,部分殘缺。

    M2發(fā)現(xiàn)時尚未開傘。菌蓋初時呈球形至橢圓形,直徑3~5.5 cm,幼嫩時表皮呈棕褐色,后逐步皸裂;開傘前中部及以下被由表皮皸裂成的大片棕褐色殼狀鱗片,有少量脫落,剛開傘時呈半球形,直徑5~9 cm,邊緣及底部鱗片脫落;開傘后平展,直徑13~19.5 cm,中間部位被龜裂狀菌皮,周圍具殼狀鱗片;皸裂后裸露的菌肉白色,表面呈纖毛狀。菌肉白色,肉質(zhì),較厚。菌褶白色,老后變淡棕色,寬,密,離生。菌柄初時長15~26 cm,至開傘時長19~31 cm,直徑1.8~2.5 cm,圓柱形(上下幾乎等粗),表面被棕色細(xì)鱗片;菌柄中段鱗片呈橫向波浪形有序排列,易擦除;基部膨大至近球形,直徑3~3.7 cm。菌環(huán)上位生,中間部分較厚,近肉質(zhì),上面白色,下面呈灰褐色與白色相間的環(huán)狀,向上呈杯狀;邊緣部分膜質(zhì),薄,白色,向下呈裙?fàn)?,易碎(圖3)。

    圖3 子實(shí)體形態(tài)

    2.3 rDNA-ITS分析結(jié)果子實(shí)體基因組DNA的ITS區(qū)域PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,經(jīng)測序及修正分析后,標(biāo)本M1得到一條688 bp的有效堿基序列,序列經(jīng)核酸序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,其與GenBank上傳的“GQ254066.1”標(biāo)本堿基吻合度99%,具99%相似性,同源性最高,該對照標(biāo)本種名(Macrolepiota sp.)尚未確認(rèn);標(biāo)本M2得到一條686 bp的有效堿基序列,序列經(jīng)核酸序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,其與GenBank上傳的“KJ524560.1”標(biāo)本堿基吻合度99%,相似性96%,同源性最高,該對照標(biāo)本確認(rèn)種名為Macrolepiota detersa(圖4)。

    圖4 標(biāo)本M1(左)與M2(右)子實(shí)體ITS區(qū)域堿基序列

    3 討論

    在浙江省M1被廣泛稱為高大環(huán)柄菇,但其形態(tài)與最新發(fā)布的描述有很大的差異[1],本次核酸序列比對也表明其與高大環(huán)柄菇的相似性僅92%,證明其同源性只能停留在屬的層面。核酸序列數(shù)據(jù)庫中,大環(huán)柄菇屬的許多上傳堿基序列沒有確認(rèn)到種,要確認(rèn)尚需結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒別[5]。根據(jù)宏觀形態(tài)觀測,該標(biāo)本最近似于具托大環(huán)柄菇(M.velosa)[1]。由于工作失誤,沒有取得該種形態(tài)鑒別關(guān)鍵部位——菌托,因而需重新采集完整標(biāo)本進(jìn)行最終確認(rèn)。

    大環(huán)柄菇子實(shí)體大型,菌蓋容易破損或與菌柄分離,影響到許多已馴化大環(huán)柄菇的商品性開發(fā)[6]。脫皮大環(huán)柄菇從菌柄基本伸長到菌蓋開傘有3~5 d時間,在這段時間采收,既能保證子實(shí)體單株產(chǎn)量的表達(dá),又使其質(zhì)量和商品性得到保障。同時,根據(jù)野生狀態(tài)生境分析,脫皮大環(huán)柄菇屬于高溫型菌株,在我國大部分地區(qū)可在春夏和夏秋季栽培,生產(chǎn)時段長。因此,該菌株可能具有較大的馴化栽培前景。

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