引種杭白菊有效成分含量的分析比較

王 超，秦子芳，譚曉妍，胡 靜，寧慧娟，苗雨欣，張秀清

（1.無(wú)限極（中國(guó)）有限公司，廣東廣州 529156；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100083）

引種杭白菊有效成分含量的分析比較

王 超1，秦子芳2，譚曉妍2，胡 靜2，寧慧娟2，苗雨欣2，*張秀清2

（1.無(wú)限極（中國(guó)）有限公司，廣東廣州 529156；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100083）

以杭白菊中總糖、黃酮類物質(zhì)、綠原酸、木犀草苷4種有效成分含量為指標(biāo)，比較江蘇引種杭白菊與原產(chǎn)地浙江桐鄉(xiāng)杭白菊的品質(zhì)差異。采用苯酚硫酸法測(cè)定總糖含量，以紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定黃酮類物質(zhì)的含量，并通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定綠原酸和木犀草苷的含量。結(jié)果表明，桐鄉(xiāng)杭白菊引種江蘇后，4種有效成分的含量均有所增高；與江蘇本地杭白菊相比，除總糖含量外，黃酮類物質(zhì)、綠原酸、木犀草苷的含量較高。由此可知，杭白菊引種江蘇有益于杭白菊品質(zhì)的提高。

杭白菊；引種；總糖；黃酮；綠原酸；木犀草苷

Abstract：Taking the total sugar，flavonoid，chlorogenic acid，luteolin-7-O-glucoside in Chrysanthemum morifolium Ramat as index to compare the quality of species from original habitats Zhejiang Tongxiang.Total sugar content in Chrysanthemum morifolium Ramat is measured by phehol-vitril.The content of flavonoids is analyzed by UV-Vis spectrophotometry.Chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside is measured by high performance liquid chromatography（HPLC） .The results indicate that the content of four effective components increased after Chrysanthemum morifolium Ramat in Tongxiang introduced to Jiangsu.The content of flavonoids，chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside are higher in Chrysanthemum morifolium Ramat introduced Jiangsu than Jiangsu native，but the content of total sugar is lower.Therefore，The introduction of Chrysanthemum morifolium Ramat is beneficial to the quality improvement.

Key words：Chrysanthemum morifolium Ramat；introduction；total sugar；flavonoid；chlorogenic acid；luteolin-7-O-glucoside

0 引言

菊花是菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥頭狀花序，具有散風(fēng)清熱、平肝明目、清熱解毒的功效，可用于治療風(fēng)熱感冒、頭痛眩暈等癥狀[1]。杭白菊性辛、甘、苦、微寒，歸肺、肝經(jīng)，具有保肝的功效[2]。杭白菊茶作為一種功能性飲品，以其草本茶的獨(dú)特性，在許多地方都很受歡迎[3]。杭白菊中含有多糖、黃酮類、綠原酸、木犀草苷等多種有效成分[4]，從菊花中提取出的糖類物質(zhì)不僅可以提高免疫力[5]，并且能夠增加機(jī)體的抗氧化能力[6]；杭白菊黃酮類成分具有抗氧化、抗炎、降壓、抗病毒等作用[7]，同時(shí)能夠起到鎮(zhèn)靜的作用[8]；木犀草苷是黃酮類化合物中的一種，能夠起到抗癌[9]和保護(hù)心血管[10]等作用；綠原酸作為藥典中菊花品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中的一項(xiàng)檢測(cè)內(nèi)容，具有抗菌、抗腫瘤、降血壓、抗癌等多種藥理活性[11]。

試驗(yàn)研究的杭白菊樣品屬于小洋菊品種，小洋菊苗期植株直立，后期自然生長(zhǎng)呈半匍匐狀，小洋菊葉為綠色、較淡、葉片較小，葉面似有略微的皺折，葉裂多且淺[12]。據(jù)付炳華等人[13]的研究，浙江桐鄉(xiāng)杭白菊引種昆明后，在植株高度、生長(zhǎng)習(xí)性、開花等方面均表現(xiàn)出固有特性，而且黃酮含量有顯著增加。這表明杭白菊的引種有利于其中有效成分的積累，可以進(jìn)一步提高杭白菊的品質(zhì)，旨在研究桐鄉(xiāng)杭白菊引種江蘇后有效成分含量的變化情況。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

供試樣品①為種植于浙江省桐鄉(xiāng)市翔厚村種植基地的小洋菊；供試樣品②為種植于江蘇省宿遷市泗洪縣種植基地的小洋菊；供試樣品③為浙江桐鄉(xiāng)杭白菊品種引種江蘇省宿遷市泗洪縣基地種植2年的小洋菊。

Agilent 1200型系列高效液相色譜儀、TU-1901型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、TG 16-WS型臺(tái)式高速離心機(jī)、KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 總糖含量的測(cè)定

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精確稱取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品1.000 g，用蒸餾水溶解并定容至100 mL，配制成0.1 g/L的葡萄糖溶液；取出1 mL該溶液于100 mL容量瓶定容，配制成0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液；移取 0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，至20 mL具塞試管中，加蒸餾水至2 mL；向各試管中分別加入6%苯酚1 mL和濃硫酸5 mL；靜置10 min后，振蕩混勻；靜置20 min，使反應(yīng)液完全冷卻后，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于波長(zhǎng)490 nm處測(cè)吸光度；以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2） 總糖含量的測(cè)定。稱取0.5 g粉碎過(guò)60目篩的各樣品，精確到0.001 g，置于50 mL具塞離心管內(nèi)。用5 mL水浸潤(rùn)樣品，緩慢加入20 mL無(wú)水乙醇，同時(shí)使用渦旋振蕩器振搖，使之混合；將樣品置于超聲提取器中，在超聲功率150 W條件下提取30 min；提取結(jié)束后，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心20 min，棄去上清液，將不溶物用10 mL 80%的乙醇洗滌再次離心，用50 mL蒸餾水將不溶物轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，于沸水浴中提取2 h；冷卻至室溫，過(guò)濾后將上清液移至100 mL容量瓶中；洗滌殘?jiān)?～3次，用蒸餾水定容。

1.2.2 黃酮類物質(zhì)的測(cè)定

（1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.000 mg，溶解于甲醇中，容量瓶定容至10 mL，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL；用微量移液槍吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0，50，100，200，300，400 μL于10 mL的具塞試管中，加5%的NaNO20.3 mL搖勻；放置6 min后，加10%的Al（NO3）30.3 mL搖勻；放置6 min，再加4 mL 4%的NaOH搖勻；最后用甲醇定容，放置10 min后，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)吸光度得到黃酮類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）黃酮類物質(zhì)含量的測(cè)定。準(zhǔn)確稱取各樣品粉末0.250 g置于50 mL的離心管中，加入甲醇25 mL，超聲處理（150 W）80 min后，進(jìn)行離心（8 000 r/min，10 min）；將離心之后的液體進(jìn)行抽濾，取濾液用甲醇定容至50 mL，取上清液0.4 mL于10 mL的具塞試管中；參照1.2.2（1）中繪制標(biāo)曲的方法，測(cè)得樣品（每1個(gè)樣品做3個(gè)平行）中黃酮的含量。

1.2.3 綠原酸和木犀草苷含量的測(cè)定

（1） 色譜條件。色譜柱：Eclipse XDB-C18型（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1%磷酸溶液-乙腈進(jìn)行梯度洗脫，乙腈在流動(dòng)相中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0～11 min、10%～18%，11～30 min、18%～20%，30～40 min，20%；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)328 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。分別稱取綠原酸和木犀草苷的標(biāo)準(zhǔn)品5.000 mg，置于25 mL容量瓶中，用色譜級(jí)甲醇定容，混勻，即得到200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；用針管移取溶液經(jīng)0.45 μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾，之后上樣，進(jìn)行高效液相色譜分析；再用移液槍移取200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，用1 mL的甲醇稀釋至100 μg/mL；按照同樣的方法依次進(jìn)行稀釋，得到 50.0，25.0，10.0，5.0，2.5 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)7個(gè)梯度的樣品依次進(jìn)行色譜分析，最終得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）綠原酸和木犀草苷含量的測(cè)定。準(zhǔn)確稱取各樣品粉末0.250 g置于50 mL離心管中，加入甲醇25 mL，超聲處理（150 W） 80 min后，進(jìn)行離心（8 000 r/min，10 min）；將離心之后的液體進(jìn)行抽濾，取濾液用甲醇定容至50 mL；取定容后的溶液進(jìn)行色譜分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品中含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 江蘇引種杭白菊中總糖含量的測(cè)定

不同產(chǎn)地杭白菊中總糖類物質(zhì)含量的比較見(jiàn)圖1。

圖1 不同產(chǎn)地杭白菊中總糖類物質(zhì)含量的比較

由圖1可知，3個(gè)產(chǎn)地杭白菊中總糖含量由高到低依次為江蘇本地杭白菊、江蘇引種杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊，江蘇本地杭白菊與江蘇引種杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊中所測(cè)定的總糖含量間都存在顯著性差異（p＜0.05）。對(duì)于杭白菊的總糖含量來(lái)說(shuō)，3個(gè)不同產(chǎn)地之間的差別比較明顯。張紅瑞等人[14]研究了江蘇引種杭白菊在多糖含量方面存在的差異，表明了引種后的杭白菊多糖含量有顯著增加。因此，從總糖含量分析，杭白菊引種江蘇之后總糖的積累有顯著增加。

2.2 江蘇引種杭白菊中黃酮含量的測(cè)定

不同產(chǎn)地杭白菊中黃酮類物質(zhì)含量的比較見(jiàn)圖2。

圖2 不同產(chǎn)地杭白菊中黃酮類物質(zhì)含量的比較

由圖2可知，3個(gè)產(chǎn)地杭白菊中黃酮類物質(zhì)含量由高到低依次為江蘇引種杭白菊、江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊，江蘇引種杭白菊與江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭菊中所測(cè)定的黃酮類物質(zhì)含量間有顯著性差異（p＜0.05）。即對(duì)于杭白菊的黃酮類物質(zhì)含量來(lái)說(shuō)，3個(gè)不同產(chǎn)地之間的差別比較明顯。胡碧波等人[15]的研究結(jié)果表明，產(chǎn)地對(duì)杭白菊中黃酮類物質(zhì)的積累有很大影響。因此，從黃酮類物質(zhì)含量分析，杭白菊引種江蘇種植后黃酮類物質(zhì)的積累有顯著增加。

2.3 江蘇引種杭白菊中綠原酸含量的測(cè)定

不同產(chǎn)地杭白菊中綠原酸含量的比較見(jiàn)圖3。

圖3 不同產(chǎn)地杭白菊中綠原酸含量的比較

由圖3可知，3個(gè)產(chǎn)地杭白菊中綠原酸含量由高到低依次為江蘇引種杭白菊、江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊。江蘇引種杭白菊與江蘇本地杭白菊、桐鄉(xiāng)杭菊中所測(cè)定的總糖含量間有顯著性差異（p＜0.05）；然而，桐鄉(xiāng)杭白菊與江蘇本地杭白菊之間的綠原酸含量的差異不顯著（p＞0.05）。顧瑤華等人[16]的研究結(jié)果表明了幾個(gè)不同產(chǎn)地杭白菊中的綠原酸含量差別較大，說(shuō)明產(chǎn)地對(duì)其含量有一定影響。因此，從綠原酸的含量分析，杭白菊引種江蘇后綠原酸的積累有顯著增加。

2.4 江蘇引種杭白菊中木犀草苷含量的測(cè)定

不同產(chǎn)地杭白菊中木犀草苷含量的比較見(jiàn)圖4。

圖4 不同產(chǎn)地杭白菊中木犀草苷含量的比較

由圖4可知，3個(gè)產(chǎn)地杭白菊中木犀草苷含量由高到低依次為江蘇引種杭白菊、桐鄉(xiāng)杭白菊、江蘇本地杭白菊。江蘇引種杭白菊與桐鄉(xiāng)杭白菊中所測(cè)定的木犀草苷含量間無(wú)顯著性差異（p＞0.05），江蘇引種杭白菊與江蘇本地杭白菊之間的木犀草苷含量存在顯著性差異（p＜0.05），桐鄉(xiāng)杭白菊與江蘇本地杭白菊的木犀草苷含量存在顯著性差異（p＜0.05）。結(jié)果表明，引種江蘇種植有利于杭白菊中木犀草苷的積累。

3 結(jié)論

杭白菊作為我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材，種植地對(duì)藥材品質(zhì)的保證起著重要作用。植物在不同的生長(zhǎng)環(huán)境中，其有效成分含量不同，了解其在不同的生長(zhǎng)環(huán)境中，能夠?yàn)槠湟N起到指導(dǎo)作用。

分析了桐鄉(xiāng)杭白菊、江蘇引種杭白菊、江蘇本地杭白菊中的4種有效成分含量，結(jié)果表明桐鄉(xiāng)杭白菊引種江蘇后，總糖、黃酮類物質(zhì)、綠原酸和木犀草苷含量均有明顯提高；與江蘇本地杭白菊相比，黃酮類物質(zhì)、綠原酸和木犀草苷含量也有所增高。研究結(jié)果表明，引種江蘇種植有利于杭白菊中有效成分的積累，為杭白菊的生產(chǎn)提供了理論基礎(chǔ)。試驗(yàn)研究的對(duì)象僅為引種2年生的杭白菊樣品，引種杭白菊的植株形態(tài)與其中的有效成分含量是否會(huì)受到引種種植時(shí)間的影響，還需要進(jìn)一步的研究。

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Comparative Study on the Content of Effective Components of Chrysanthemum morifolium Ramat Introduced in Jiangsu

WANG Chao1，QIN Zifang2，TAN Xiaoyan2，HU Jing2，NING Huijuan2，MIAO Yuxin2，*ZHANG Xiuqing2
（1.Infinitus（China） Company Ltd，Guangzhou，Guangdong 529156，China；2.China Agricultural University，Beijing 100083，China）

TS20

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.09.035

1671-9646（2017） 09b-0029-03

2017-07-03

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（21576142）；中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（2017SP001）。

王 超（1991— ），男，碩士，研究方向?yàn)楣δ苄允称芳笆称飞锛夹g(shù)。

*通訊作者：張秀清（1976— ），女，博士，副教授，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。