解淀粉芽胞桿菌TF28產(chǎn)抗菌脂肽培養(yǎng)基優(yōu)化

劉宇帥, 孟利強(qiáng), 陳靜宇, 姜 威, 曹 旭,胡基華, 李 晶, 張淑梅*

(1.黑龍江省科學(xué)院 微生物研究所，黑龍江 哈爾濱 150010； 2.黑龍江省科學(xué)院 高技術(shù)研究院，黑龍江 哈爾濱 150020)

解淀粉芽胞桿菌TF28產(chǎn)抗菌脂肽培養(yǎng)基優(yōu)化

劉宇帥1,2, 孟利強(qiáng)1,2, 陳靜宇1, 姜 威1,2, 曹 旭1,2,胡基華1, 李 晶1,2, 張淑梅1,2*

(1.黑龍江省科學(xué)院 微生物研究所，黑龍江 哈爾濱 150010； 2.黑龍江省科學(xué)院 高技術(shù)研究院，黑龍江 哈爾濱 150020)

采用響應(yīng)面方法對解淀粉芽胞桿菌TF28產(chǎn)抗菌脂肽培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，以提高其產(chǎn)量。利用Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選出影響抗菌脂肽產(chǎn)量的3個(gè)主要因素：葡萄糖、硫酸鎂和磷酸氫二鈉。通過最陡爬坡試驗(yàn)逼近最大響應(yīng)值區(qū)域，利用響應(yīng)面分析方法確定顯著組份的最佳水平。結(jié)果表明，優(yōu)化后的培養(yǎng)基組份為葡萄糖42.37 g/L，酵母膏2 g/L，牛肉膏2 g/L，硫酸銨2 g/L，硫酸鎂2.11 g/L，氯化鈣0.1 g/L，硫酸錳0.1 g/L，磷酸二氫鉀1.5 g/L，磷酸氫二鈉 3 g/L，經(jīng)3次平行試驗(yàn)驗(yàn)證，抗菌脂肽產(chǎn)量為1.75 g/L，比優(yōu)化前提高了5.25倍。該研究優(yōu)化了解淀粉芽胞桿菌TF28提高抗菌脂肽產(chǎn)量的培養(yǎng)基，為抗菌脂肽的生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

解淀粉芽胞桿菌；抗菌脂肽；培養(yǎng)基優(yōu)化

農(nóng)業(yè)雙減計(jì)劃的實(shí)施為新型生物農(nóng)藥的研發(fā)注入了新的活力。解淀粉芽胞桿菌Bacillusamyloliquefaciens在自然界中分布廣泛，能夠產(chǎn)生抗逆胞子和脂肽類、肽類和蛋白類等多種抗菌物質(zhì)，是一類具有較高開發(fā)價(jià)值的農(nóng)用微生物[1-3]。Surfactin、Iturin和Fengycin是解淀粉芽胞桿菌產(chǎn)生的主要環(huán)狀脂肽類抗菌物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)多樣，具有廣譜抑菌活性和穩(wěn)定性，參與生防菌根際定殖、拮抗病原菌和誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性等多種生防過程，在植物病害防控方面具有應(yīng)用前景[4-6]。抗菌脂肽的生物合成受多種因素影響，其中培養(yǎng)基組份是影響抗菌脂肽產(chǎn)量的主要因素[7]。研究表明，碳氮源是合成抗菌脂肽必備營養(yǎng)成分，不同菌株所需碳氮源的種類不同[8]。解淀粉芽胞桿菌Q-426能夠利用葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油和山梨醇等多種碳源，胰蛋白胨、L-組氨酸和賴氨酸3種氮源產(chǎn)生抗菌脂肽，葡萄糖和胰蛋白胨是優(yōu)選碳氮源[7]；解淀粉芽胞桿菌ES-2能夠利用葡萄糖、蔗糖、乳糖和果糖4種碳源，牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、硝酸鈉、L-谷氨酸等多種氮源產(chǎn)生抗菌脂肽，葡萄糖和L-谷氨酸是優(yōu)選碳氮源[9]。除碳氮源外，某些金屬離子影響抗菌脂肽的產(chǎn)量，Wei等[10-11]報(bào)道適量的Fe2+和Mn2+能顯著提高芽胞桿菌抗菌脂肽產(chǎn)量。解淀粉芽胞桿菌產(chǎn)生的抗菌脂肽種類和產(chǎn)量因菌株而異，有些菌株能夠產(chǎn)生多種抗菌脂肽，而且每種含有多個(gè)同系物，這些脂肽協(xié)同作用使菌株呈現(xiàn)抗菌活性[12-13]。BacillusamyloliquefaciensTF28是一株分離自大豆根部的內(nèi)生細(xì)菌，具有廣譜抑菌活性，前期研究發(fā)現(xiàn)該菌株能夠分泌抑制植物病原真菌的抗菌脂肽[14]，但是產(chǎn)量較低，難以應(yīng)用。本研究采用響應(yīng)面方法從碳氮源和無機(jī)鹽方面對菌株TF28產(chǎn)抗菌脂肽培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，為提高菌株抑菌活性及抗菌脂肽的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 生防細(xì)菌解淀粉芽胞桿菌BacillusamyloliquefaciensTF28和病原真菌黃瓜枯萎病菌 (Fusariumoxysporum)均為本實(shí)驗(yàn)室分離保存。

1.1.2 培養(yǎng)基(g/L) LB培養(yǎng)基：酵母膏5，蛋白胨10，NaCl 10，初始pH 7.2;NYD培養(yǎng)基：牛肉膏8，酵母膏5，葡萄糖5，初始pH 7.2;基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基A：葡萄糖20，牛肉膏2，酵母膏2，硫酸錳0.1，氯化鈣0.1，硫酸銨2，硫酸鎂0.2，磷酸二氫鉀1，磷酸氫二鈉1，初始pH 7.2～7.5;PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200，葡萄糖20，瓊脂粉150。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)方法 低溫保藏的TF28菌株依次用LB平板和試管活化后，接種于裝有50 mL NYD的250 mL三角瓶中，30 ℃、170 r/min 培養(yǎng)18 h，制備種子液，按2%接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，30 ℃、170 r/min 培養(yǎng)48 h，于提取脂肽類抗菌物質(zhì)。黃瓜枯萎病菌用PDA培養(yǎng)基于26 ℃培養(yǎng)7 d，無菌水洗脫孢子制備孢子懸浮液，濃度為106cfu/mL。

1.2.2 抗菌脂肽提取 培養(yǎng)48 h的發(fā)酵液4 ℃、10 000 r/min離心15 min，去除菌體，加濃鹽酸于上清液中至pH 2.0，4 ℃靜置過夜后，4 ℃、10 000 r/min離心15 min，收集沉淀，自然干燥后稱重，用甲醇溶解備用[15]。

1.2.3 抑菌活性測定 以黃瓜枯萎病菌為指示菌，采用抑菌圈方法測定抗菌脂肽抑菌活性。取100 μL胞子懸液涂布PDA平板，放入滅菌鋼圈，將抗菌脂肽滴入鋼圈中，26 ℃溫箱培養(yǎng)3 d，測定抑菌圈大小，以甲醇做對照。

1.2.4 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基篩選 將種子液按2%接種量分別接種于50 mL的LB、NYD 和A培養(yǎng)液中，30 ℃、170 r/min 培養(yǎng)48 h，收集發(fā)酵液，按上述方法制備抗菌脂肽，稱重后測定抑菌活性。

1.2.5 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定基礎(chǔ)培養(yǎng)基組份為葡萄糖20 g/L，牛肉膏2 g/L，酵母膏2 g/L，硫酸錳0.1 g/L，氯化鈣0.1 g/L，硫酸銨2 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，磷酸二氫鉀1 g/L，磷酸氫二鈉1 g/L。采用Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)從影響抗菌脂肽產(chǎn)生的9個(gè)培養(yǎng)基組份中篩選顯著組份。選擇實(shí)驗(yàn)次數(shù)N=12的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察9個(gè)因素，每個(gè)因素取2水平，高水平因子是低水平因子的1.5倍，增加2個(gè)空項(xiàng)用以估計(jì)誤差(表1)。

1.2.6 爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì) 依據(jù)Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)爬坡試驗(yàn)，以顯著因素的效應(yīng)值確定爬坡路徑和步長，正效應(yīng)因素取高值，負(fù)效應(yīng)因素取低值，改變顯著因素在培養(yǎng)基中的質(zhì)量濃度使其成適當(dāng)?shù)奶荻龋_定抗菌脂肽產(chǎn)量的變化趨勢，從而快速逼近最佳響應(yīng)值區(qū)域。

表1 Plackett-Burman設(shè)計(jì)因子與水平

1.2.7 響應(yīng)面分析 利用Box-Behnken 的中心組合設(shè)計(jì)原理，根據(jù)爬坡試驗(yàn)得到的顯著因素響應(yīng)區(qū)域中心點(diǎn)，設(shè)計(jì)3因子3水平共17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的響應(yīng)面分析試驗(yàn)。

1.2.8 數(shù)據(jù)分析 每個(gè)處理3次重復(fù)，取平均值。利用 Minitab16 軟件進(jìn)行Plackett-Burman 試驗(yàn)分析，利用Design-Expert 8.0完成Box-Behnken響應(yīng)面分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基篩選

3種培養(yǎng)基中抗菌脂肽的產(chǎn)量和抑菌活性見表2。抑菌活性與抗菌脂肽干重成正相關(guān)，LB培養(yǎng)基中抗菌脂肽產(chǎn)量最少，NYD次之，A最高。結(jié)果表明，培養(yǎng)基中添加葡萄糖和無機(jī)鹽能夠提高抗菌脂肽產(chǎn)量，因此選A培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化研究。

表2 不同培養(yǎng)基對菌株TF28分泌抗菌脂肽的影響

2.2 Plackett-Burman 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

對每個(gè)處理得到的抗菌脂肽稱重后進(jìn)行抑菌活性測定，結(jié)果表明抑菌活性與抗菌脂肽干重成正相關(guān)，因此，以抗菌脂肽干重為響應(yīng)值。

Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果表明6號實(shí)驗(yàn)抗菌脂肽產(chǎn)量最高為1.09 g/L(表3)。各因素水平與效應(yīng)分析結(jié)果表明，葡萄糖、酵母膏、硫酸錳和磷酸氫二鈉4個(gè)組份對抗菌脂肽產(chǎn)量呈正效應(yīng)，硫酸銨、牛肉膏、氯化鈣、硫酸鎂和磷酸二氫鉀5個(gè)組份呈負(fù)效應(yīng)(表4)。培養(yǎng)基組份對抗菌脂肽產(chǎn)量的影響顯著性為：葡萄糖>磷酸氫二鈉>硫酸鎂>酵母膏>磷酸二氫鉀>硫酸銨>硫酸錳>氯化鈣>牛肉膏，葡萄糖、磷酸氫二鈉和硫酸鎂的影響較為顯著，葡萄糖和磷酸氫二鈉有顯著正效應(yīng)，硫酸鎂有顯著負(fù)效應(yīng)，提高葡萄糖和磷酸氫二鈉含量，降低硫酸鎂含量有助于提高抗菌脂肽產(chǎn)量。效應(yīng)關(guān)系回歸模擬方程：Y=0.344+0.176 6A-0.026 6B+0.073 4C-0.006 6E-0.023 4F+0.026 8G-0.156 6J-0.056 6K+0.173 4L，R2=0.910 8，表明回歸有效。

表3 Plackett-Burman 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4 Plackett-Burman 設(shè)計(jì)因素水平及效應(yīng)評價(jià)

2.3 爬坡試驗(yàn)

以Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果中抗菌脂肽產(chǎn)量最大的試驗(yàn)組為基礎(chǔ)，固定6個(gè)非顯著組份濃度，正效應(yīng)取高值，負(fù)效應(yīng)取低值，3個(gè)顯著組份設(shè)5個(gè)濃度進(jìn)行爬坡試驗(yàn)，葡萄糖和磷酸氫二鈉向高濃度爬，硫酸鎂向低濃度爬。結(jié)果表明第2組試驗(yàn)抗菌脂肽產(chǎn)量最大，為1.79 g/L(表5)。因此選擇葡萄糖、硫酸鎂和磷酸氫二鈉的濃度分別為40、 0.2和3 g/L為中心點(diǎn)進(jìn)行Box-Behnken 設(shè)計(jì)。

表5 爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

2.4 響應(yīng)面分析

3個(gè)顯著組份自變量水平見表6，Box-Behnken設(shè)計(jì)與結(jié)果及方差分析見表7和表8。該模型的線性和平方對抗菌脂肽的影響顯著，而交互作用不顯著，顯著因素影響程度：葡萄糖>硫酸鎂>磷酸氫二鈉。擬合回歸方程: Y=1.712+0.133 75A-0.057 5B-0.003 75C+0.122 5AB-0.065AC-0.037 5BC-0.311A2-0.378 5B2-0.411C2。模型回歸p值為0.000 3，失擬項(xiàng)P值0.160 4，R2=0.964 7, 說明模型具有很好的顯著性。從方程推斷出模型的最佳值為葡萄糖42.37 g/L，硫酸鎂2.11 g/L,磷酸氫二鈉3 g/L,理論上抗菌脂肽的產(chǎn)量達(dá)1.73 g/L。

依據(jù)擬合回歸方程，通過Design-Expert 8.0 軟件分析獲得相應(yīng)的響應(yīng)面分析圖和等高線圖(圖1)，其中一個(gè)因素固定在最優(yōu)值，抗菌脂肽產(chǎn)量隨著其他2個(gè)因素水平的增加呈現(xiàn)先增加后降低趨勢，曲面定點(diǎn)即為抗菌脂肽最大值點(diǎn)。

表6 Box-Behnken 設(shè)計(jì)因素與水平

表7 Box-Behnken 設(shè)計(jì)與結(jié)果

續(xù)表7

表8 回歸模型方差分析

注：A：葡萄糖；B：硫酸鎂；C：磷酸氫二鈉

圖1 顯著組份交互作用的響應(yīng)面和等高線圖Fig.1 Response surface plot and contour plot of three main components interactionA: 響應(yīng)面；B：等高線圖A: Response surface plot; B: Contour plot

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果，3個(gè)顯著組分取最優(yōu)值，其他組分依據(jù)PB試驗(yàn)結(jié)果正效應(yīng)組分取高值，負(fù)效應(yīng)組分取低值，進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，3個(gè)重復(fù)，抗菌脂肽產(chǎn)量分別為1.68、1.76和1.83 g/L，平均值為(1.75±0.05) g/L，比基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基抗菌脂肽產(chǎn)量提高6.25倍，實(shí)際值接近預(yù)測值1.73 g/L，說明模型有效。優(yōu)化后解淀粉芽胞桿菌TF28產(chǎn)抗菌脂肽培養(yǎng)基配方為葡萄糖42.37 g/L，硫酸鎂2.11 g/L,磷酸氫二鈉3 g/L, 牛肉膏2 g/L，酵母膏2 g/L，硫酸錳0.1 g/L，氯化鈣0.1 g/L，硫酸銨2 g/L，磷酸二氫鉀1.5 g/L。

3 討 論

抗菌脂肽由非核糖體途徑合成，受較大基因簇和多酶復(fù)合體調(diào)控[16]。同一菌株產(chǎn)生的抗菌脂肽的種類是一定的，但在不同培養(yǎng)條件下其種類和產(chǎn)量是不同的。培養(yǎng)基組份與抗菌脂肽的合成密切相關(guān)，對抗菌脂肽的產(chǎn)量有較大影響，但是否對種類有影響因菌株而異。李興玉等[8]報(bào)道培養(yǎng)基組分對BacillussubtilisXF-1菌株的抗菌脂肽的產(chǎn)量有影響，對種類沒有影響；孫力軍等[9]和趙朋超等[7]報(bào)道培養(yǎng)基組份對解淀粉芽胞桿菌ES-2和 Q-426的抗菌脂肽種類和產(chǎn)量均有影響，這可能是由于有些菌株的某種抗菌脂肽合成基因處于沉默狀態(tài)，需要特定培養(yǎng)基組份誘導(dǎo)才能表達(dá)。

碳氮源和無機(jī)鹽是微生物生長所必備的營養(yǎng)因子，也是培養(yǎng)基優(yōu)化的主要考察因素。碳氮源是合成抗菌脂肽必須營養(yǎng)成分，對抗菌脂肽產(chǎn)量影響較大。有研究表明糖類物質(zhì)利于抗菌脂肽的積累[17]，葡萄糖、蔗糖和淀粉是芽胞桿菌產(chǎn)抗菌脂肽的常用碳源，葡萄糖是多數(shù)菌株的優(yōu)選碳源。氮源對抗菌脂肽產(chǎn)量的影響因菌株而異，趙朋超等[7]在優(yōu)化解淀粉芽胞桿菌Q-426培養(yǎng)基研究中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用無機(jī)氮尿素不能產(chǎn)生抗菌脂肽，應(yīng)用有機(jī)氮蛋白胨和L-氨基酸能夠產(chǎn)生抗菌脂肽；盧彩鴿等[18]對解淀粉芽胞桿菌MH71培養(yǎng)基優(yōu)化研究中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用復(fù)合有機(jī)氮牛肉膏和蛋白胨促進(jìn)抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生；楊代凱等[19]發(fā)現(xiàn)解淀粉芽胞桿菌ZM9利用豆粕作氮源，抗菌脂肽iturinA的產(chǎn)量最高，利用銨態(tài)無機(jī)氮作氮源不產(chǎn)生抗菌脂肽iturinA；孫力軍等[9]發(fā)現(xiàn)單獨(dú)用有機(jī)氮、無機(jī)氮和氨基酸或有機(jī)和無機(jī)復(fù)合氮源對解淀粉芽胞桿菌 ES-2來說都能產(chǎn)生抗菌脂肽，單獨(dú)用L-谷氨酸時(shí)抗菌脂肽產(chǎn)量最高；朱玲燕等[20]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌BS-37利用硝酸銨做氮源，surfactin產(chǎn)量最高；葉云峰等[21]、孫亮等[22]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌B47和HAB-1利用酵母粉和酵母膏作氮源，抗菌物質(zhì)產(chǎn)量最高。金屬離子和無機(jī)鹽對抗菌脂肽的產(chǎn)生也有一定影響，鐵、鎂、錳離子能促進(jìn)抗菌脂肽的產(chǎn)生[23-25]。

本研究綜合考慮碳氮源和無機(jī)鹽對菌株TF28產(chǎn)抗菌脂肽的影響，設(shè)計(jì)了沒有糖類物質(zhì)的LB、有糖類和有機(jī)氮的NYD及營養(yǎng)全面的A培養(yǎng)基(含糖類、有機(jī)無機(jī)氮源和無機(jī)鹽)可以快速篩選出基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基，結(jié)果表明葡萄糖能夠促進(jìn)菌株TF28抗菌脂肽的產(chǎn)生，營養(yǎng)全面的A培養(yǎng)基抗菌脂肽產(chǎn)量最高，說明碳氮源和無機(jī)鹽協(xié)同作用能夠顯著提高菌株TF28抗菌脂肽的產(chǎn)量。以A培養(yǎng)基為基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行響應(yīng)面分析，結(jié)果表明葡萄糖、金屬鎂離子和無機(jī)鹽磷酸氫二鈉是影響菌株TF28抗菌脂肽產(chǎn)量的3個(gè)顯著因素，較高濃度的葡萄糖和無機(jī)鹽及較低濃度的鎂離子能夠顯著提高抗菌脂肽產(chǎn)量。優(yōu)化后的最適葡萄糖用量為42.37 g/L，高于文獻(xiàn)報(bào)道的其他芽胞桿菌(菌株MH71的葡萄糖用量為14 g/L，菌株XF-1的葡萄糖用量為20 g/L，HF-01的葡萄糖用量為30 g/L)。優(yōu)化后的最適硫酸鎂用量2.11 g/L，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。磷酸氫二鈉影響抗菌脂肽產(chǎn)量為本菌株特有。

抗菌脂肽是菌株的次級代謝產(chǎn)物，通常情況下產(chǎn)量較低，經(jīng)過培養(yǎng)基優(yōu)化后能夠提高其產(chǎn)量，產(chǎn)量提高幅度存在菌株差異性。本研究應(yīng)用響應(yīng)面方法確定了菌株TF28產(chǎn)抗菌脂肽最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組份為葡萄糖42.37 g/L，酵母膏2 g/L，牛肉膏2 g/L，硫酸銨2 g/L，硫酸鎂2.11 g/L，氯化鈣0.1 g/L，硫酸錳0.1 g/L，磷酸二氫鉀1.5 g/L，磷酸氫二鈉 3 g/L，抗菌脂肽產(chǎn)量為1.75 g/L，比優(yōu)化前提高了5.25倍，但與文獻(xiàn)報(bào)道的其他菌株相比產(chǎn)量偏低。方傳記等[26]報(bào)道解淀粉芽胞桿菌ES-2-4經(jīng)過培養(yǎng)基優(yōu)化后抗菌脂肽產(chǎn)量達(dá)6.76 g/L。楊代凱等[19]報(bào)道解淀粉芽胞桿菌ZM9培養(yǎng)基優(yōu)化后iturinA產(chǎn)量達(dá)3.37 g/L。因此后續(xù)研究擬從培養(yǎng)條件及基因改造方面進(jìn)一步優(yōu)化菌株TF28以提高抗菌脂肽產(chǎn)量，為抗菌脂肽的商品化提供菌株資源。

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Optimization of Medium for the Production of Antifungal Lipopeptides byBacillusamyloliquefaciensTF28

LIU Yu-shuai1, 2, MENG Li-qiang1,2, CHEN Jing-yu1, JIANG Wei1, 2, CAO Xu1, 2,HU Ji-hua1, LI Jing1, 2, ZHANG Shu-mei1,2

(1.Inst.ofMicrobiol.,HeilongjiangAcad.ofSci.,Harbin150010; 2.Inst.ofAdvancedTech.,HeilongjiangAcad.ofSci.,Harbin150020)

In order to improve the production of antifungal lipopeptides (AL) byBacillusamyloliquefaciensTF28, the response surface method was adopted. Three major factors influencing the production of AL, glucose, MgSO4, and Na2HPO4were screened adopting Plackett-Burman experiment design. The optimal level of the significant components were confirmed through steepest ascent experiment to approach the most responsing value area, and the response surface analysis method. The results showed that the medium components of the optimized medium were glucose 42.37 g/L, yeast extract 2 g/L, beef extract 2 g/L, (NH4)2SO42 g/L, MgSO42.11 g/L, CaCl20.1 g/L, MnSO40.1 g/L, KH2PO41.5 g/L，Na2HPO43 g/L. It was proved by three parallel experiments that the yield of AL was 1.75 g/L under optimal condition, increased by 5.25 times higher than that of medium before optimized. This study had optimized the medium for the increment of the production of AL byB.amyloliquefaciens, and laid the foundation for the AL production.

Bacillusamyloliquefaciens; antifungal lipopeptides (AL); medium optimization

中國科學(xué)院微生物研究所微生物資源前期開發(fā)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(SKLMR-20150604)；黑龍江省省院科技合作

劉宇帥 女，助理研究員，碩士。研究方向?yàn)橹参锊『ι锓乐巍-mail:ttkqbzj@163.com

* 通訊作者。女，研究員，博士。研究方向?yàn)橹参锊『ι锓乐?。E-mail:1401135157@qq.com

2016-08-23；

2016-09-13

Q939.9

A

1005-7021(2017)03-0052-07

10.3969/j.issn.1005-7021.2017.03.010

項(xiàng)目(YS16C15)