狹葉錦雞兒根化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究

蘇比努爾買烏蘭　潘蘭　賈新岳　張濤　賈曉光　鄒忠梅

[摘要]采用硅膠柱色譜、sephadex LH20凝膠柱色譜、制備HPLC等多種色譜技術(shù)，從狹葉錦雞兒（Caragana stenophylla）根80%乙醇提取物的二氯甲烷部位中分離得到14個單體化合物，依據(jù)理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)分別鑒定為：2（4hydroxy3methoxylphenyl）3methoxylbenzofuran6ol （1）、mucodianin C （2）、羥基二甲氧苯基苯并呋喃醇 （isopterofuran，3）、芒柄花素 （formononetin，4）、阿夫羅摩辛 （afromosin，5）、毛蕊異黃酮 （calycosin，6）、刺槐素 （acacetin，7）、3O甲基山柰酚 （3Omethylkaempferol，8）、甘草素 （liquiritigenin，9）、異甘草素 （isoliquiritigenin，10）、variabilin （11）、白藜蘆醇 （resveratrol，12）、浙貝素 （zhebeiresinol，13）、2，3dicarboxy6，7dihydroxy1（3′，4′dihydroxy）phenyl1，2 dihydronaphthalen （14）。其中化合物1是新化合物（苯并呋喃衍生物類化合物），命名為mucodianin S，化合物2，3，11，13，14為首次從錦雞兒屬中分離得到，化合物4～10為首次從狹葉錦雞兒中分離得到。采用MTT比色法對部分單體化合物進(jìn)行體外抗腫瘤活性測試，實驗結(jié)果表明化合物2對人類腫瘤細(xì)胞系HepG2，HeLa具有顯著的生長抑制活性，其IC50分別為（1618±095），（375±008） μmol·L-1。

[關(guān)鍵詞]狹葉錦雞兒； 化學(xué)成分； 結(jié)構(gòu)鑒定； 抗腫瘤活性

[Abstract]Fourteen compounds were isolated from the 80% ethanol extract of Caragana stenophylla root， by using a combination of various chromatographic approaches， including silica gel sephadex LH20 column chromatography， and preparative HPLC On the basis of their physical and chemical properties and spectroscopic data， their structures were elucidated as 2（4hydroxy3methoxy lphenyl）3methoxyl benzofuran6ol （1）， mucodianin C （2）， isopterofuran （3）， formononetin （4）， afromosin （5）， calycosin （6）， acacetin （7）， 3Omethylkaempferol （8）， liquiritigenin （9）， isoliquiritigenin （10）， variabilin （11）， resveratrol （12）， zhebeiresinol （13）， and 2， 3dicarboxy6， 7dihydroxy1（3′， 4′dihydroxy）phenyl1， 2dihydronaphthalen （14） Compound 1 is a new benzofuran derivative， named as mucodianin S； compounds 2， 3， 11， 13， 14 were isolated from the genus Caragana for the first time， and compounds 410 were firstly isolated from Caragana stenophylla. MTT assay was used to determine their cytotoxicity of the isolated compounds against human tumor cell lines， and 2 showed cytotoxicity against human hepato cellular cancer （HepG2） and human cervical （HeLa） lines， with IC50 values of （1618±095）， （375±008） μmol·L-1， respectively

[Key words]Caragana stenophylla； chemical constituents； structure identification； antitumor activity

錦雞兒屬Caragana Fabr植物屬于豆科，該屬植物全世界大約有100多種，中國有66種，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗骨質(zhì)疏松、防治心血管類疾病等藥理活性[12]。狹葉錦雞兒C stenophylla Pojark是豆科錦雞兒屬灌木，分布于我國內(nèi)蒙古高原的荒漠和草原地區(qū)、新疆、東北、河北、山西、陜西、寧夏、甘肅西北部?！端幱弥参镛o典》記載狹葉錦雞兒的根、花等部位均可以入藥，具有祛風(fēng)、平肝、止咳的功效[34]。目前從狹葉錦雞兒石油醚及乙酸乙酯萃取物中分離到二苯乙烯類、黃酮類、萜類、有機(jī)酸及酯類化合物，并發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯萃取物具有一定的乙酰膽堿酯酶抑制活性[5]。本研究從狹葉錦雞兒根80%乙醇提取物的二氯甲烷萃取物中分離鑒定了14個單體化合物（圖1），其中化合物1為新化合物。

1材料

核磁共振儀（Bruker AvanceDRX500型，德國）；高分辨率質(zhì)譜儀（Waters SYNAPT HDMS型，美國）；高效液相色譜儀（Waters 2535型，美國）；高效液相色譜柱（YMCPack ODSA型，10 mm×250 mm，5 μm，日本）；柱色譜硅膠（100～200目，青島海洋化工廠）；GF254薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）；Sephadex LH20（40～70 μm，Pharmacia Biotech AB，瑞典）；所試劑為分析純和色譜純；

二氧化碳培養(yǎng)箱（日本三洋公司）；XDS 1B倒置顯微鏡（日本Nikon公司）；低溫離心機(jī)（德國Eppendorf）；全自動酶標(biāo)儀（BIORAD，美國）；MTT（美國 Sigma公司）；1640培養(yǎng)基（美國Gibico公司）；胎牛血清；DMSO；胰蛋白酶。人宮頸癌細(xì)胞HeLa，人肝癌細(xì)胞HepG2，人肺癌細(xì)胞A549均購自協(xié)和細(xì)胞資源中心。

狹葉錦雞兒根于2014年6月采自新疆奇臺縣半截溝（經(jīng)度E43°39′3042″，緯度N89°44′1573″），經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所賈曉光研究員鑒定為C stenophylla的根，憑證標(biāo)本存放于新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所標(biāo)本室。

2提取分離

狹葉錦雞兒根134 kg，干燥、粉碎后用80%乙醇浸泡24 h，加熱回流提取3次，每次2 h，合并提取液并減壓濃縮，用水混懸后，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，萃取液減壓濃縮后得二氯甲烷萃取物163 g，乙酸乙酯萃取物92 g，正丁醇萃取物335 g。

二氯甲烷萃取物（160 g）經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），用石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)（100∶0，100∶1，50∶1，25∶1，10∶1，8∶1，6∶1，4∶1，2∶1，1∶1，1∶3，乙酸乙酯）洗脫，經(jīng)TLC檢識，合并后得7個流分（FrⅠ～Ⅶ）。FrⅣ（137 g） 經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），用石油醚丙酮系統(tǒng)（10∶1～丙酮）洗脫得5個流分（FrⅣAE） 和化合物4（49 mg）。FrⅣD經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），用二氯甲烷甲醇系統(tǒng)（100∶0，500∶1，400∶1，300∶1，200∶1，100∶1，80∶1，60∶1，40∶1，10∶1，甲醇）洗脫得4個流分（Fr ⅣD1D4）；FrⅣD2經(jīng)Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫得化合物2（38 mg）；FrⅣD3經(jīng)Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫和制備HPLC得化合物1（26 mg） 和3（5 mg）；FrⅣD4經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），用二氯甲烷甲醇系統(tǒng)（100∶0～甲醇）洗脫，進(jìn)一步經(jīng)Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫得化合物7（55 mg）。FrⅣC （38 g） 經(jīng)Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫得化合物11（4 mg）。FrⅤ（76 g） 經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），用二氯甲烷甲醇系統(tǒng)（100∶0甲醇）洗脫得6個流分（FrⅤAF） 和化合物5（352 mg）。FrⅤC經(jīng)Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫和制備HPLC得化合物10（24 mg）。FrⅤD經(jīng)制備HPLC得化合物8（3 mg） ，化合物9（25 mg） 和化合物12（7 mg）。FrⅤE經(jīng)Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫和制備HPLC得化合物14（13 mg）。FrVI（19 g） 經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），用二氯甲烷甲醇（100∶0～甲醇）洗脫5個流分（FrVIAE）；Fr VIB經(jīng)硅膠柱色譜，Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫得化合物13（3 mg）；FrVID經(jīng)硅膠柱色譜，Sephadex LH20柱色譜（二氯甲烷甲醇1∶1）洗脫得化合物6（3 mg）。

3結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1淺紫色粉末，易溶于甲醇。HRESIMS顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z 309072 4 [M+Na]+（計算值309073 9），結(jié)合1H，13CNMR譜數(shù)據(jù)確定化合物分子式為C16H14O5，不飽和度為10。

本研究對狹葉錦雞兒根中分離到的部分化合物進(jìn)行體外抗腫瘤活性測試。其中化合物2對人類腫瘤細(xì)胞系HepG2，HeLa具有顯著的生長抑制活性，其IC50分別為（1618±095），（375±008） μmol·L-1。

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[責(zé)任編輯丁廣治]