血型鑒定中出現(xiàn)ABO血型正反定型不符的原因及措施

鐘勝英

[摘要] 目的 對血型鑒定中出現(xiàn)ABO血型正反定型不符的原因和處理措施進行探討。 方法 抽取2014年1月～2016年12月間，擬輸血患者中ABO血型正反定型不符者18例作為研究對象，對其進一步展開吸收放散試驗、抗體篩查、唾液血型物質(zhì)測定、亞型檢測，經(jīng)ABO疑難血型3步分析法對不符的原因進行分析及鑒定。 結(jié)果 本次18例ABO血型正反定型不符者中，有2例為人為因素造成，另外16例的原因包括有生理因素、自身抗體因素、血漿蛋白異常、不規(guī)則抗體以及血液疾病等因素，其中不規(guī)則抗體因素所占比例最高（P<0.05）。 結(jié)論 造成ABO血型正反定型不符的原因較多，在臨床血型鑒定中應引起重視，積極采取有針對性的確診試驗，展開鑒定分析，ABO血型鑒定時選擇正確輔助手段，進而提高血型鑒定準確性，以保證輸血的安全性、有效性。

[關(guān)鍵詞] 血型鑒定；ABO血型正反定型不符；輸血安全；疑難血型；影響因素

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）09-133-04

Reasons and measures of ABO typing discrepancy in blood grouping

ZHONG Shengying

Xingning People's Hospital，Xingning 514500

[Abstract] Objective To explore reasons and measures of ABO typing discrepancy in blood grouping. Methods 18 patient with ABO typing discrepancy who were planning to receive blood transfusion from January 2014 to December 2016 were selected as research objects and they were further given absorption-elution test，antibody screening，saliva blood-group substance and subtype blood grouping.Reasons for discrepancy were analyzed and detected by 3-step analytical method of suspicious ABO blood group. Results In 18 patient with ABO typing discrepancy，2 cases were caused by human factors and 16 cases were caused by physiological factors，autoantibodies factors，plasma protein abnormality，irregular antibodies，hematologic diseases and other factors.Of which，proportion of irregular antibodies factors is the highest（P<0.05）. Conclusion There were many reasons for ABO typing discrepancy which should be paid attention in clinical blood grouping and take targeted confirmatory tests and carry out identification and analysis.Proper supplementary means of ABO blood grouping can further improve accuracy of blood grouping to guarantee safety and effectiveness of blood transfusion.

[Key words] Blood grouping；ABO typing discrepancy；Safety of blood transfusion；Suspicious blood group；Influencing factors

在實際臨床工作中，ABO血型屬于輸血、器官移植過程中所應用到的一種非常重要的血型系統(tǒng)，確定受血者與供血者之間的ABO血型正確，是有效保證臨床輸血安全的一個非常重要的前提，也是基本原則。如果受血者或供血者二者中一方的ABO血型發(fā)生誤定，失誤的輸注了異型血，發(fā)生嚴重溶血性輸血反應的可能性就會達到增加，對該患者的生命安全構(gòu)成了嚴重的威脅[1]。在發(fā)現(xiàn)ABO的正反定型存在不符情況的時候，如何能夠迅速準確的找到原因，并及時正確的對血型進行鑒定的臨床意義重大，應引起人們的重視[2-3]。本次研究對血型鑒定中出現(xiàn)ABO血型正反定型不符的原因和處理措施進行探討，現(xiàn)將過程及結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究中資料來源于2014年1月～2016年12月間擬輸血患者中ABO血型正反定型不符者，共計選擇18例作為研究對象，年齡在3個月～80歲之間，平均（45.6±12.3）歲。

1.2 方法

抽取2014年1月～2016年12月間，擬輸血患者中ABO血型正反定型不符者18例作為研究對象，對其進一步展開吸收放散試驗、抗體篩查、唾液血型物質(zhì)測定、亞型檢測，經(jīng)ABO疑難血型3步分析法對不符的原因進行分析及鑒定。

鑒定方法：（1）儀器與試劑：直接抗人球蛋白試劑，抗A、抗B和抗AB血型定型試劑，人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒，抗H、抗A1和RhD（IgM）血型定型試劑，抗體篩檢紅細胞試劑盒等均購自上海血液生物醫(yī)藥公司；ABO血型微柱凝膠卡、抗人球蛋白檢測卡、卡式離心機均（強生醫(yī)療器材有限公司）、37℃專用孵育器；2002-2型血清學專用離心機（臺灣貝索公司）。（2）ABO疑難血型3步分析方法：①首先在操作開始前必須將所有可能存在的人為因素全部排除。重新對血樣標本進行采集，對血型進行重新的準確鑒定，進一步核對操作過程中所需要應用的試劑的有效期，反復熟悉操作規(guī)程和相關(guān)注意事項，對離心機轉(zhuǎn)速、時間、離心力等基本參數(shù)情況進行了解，判斷其他器材是否發(fā)生污染；②對患者的具體臨床資料進行再次的復習，對可能造成正反定型不符事件發(fā)生的原因進行具體的分析和歸納，按照患者年齡、性別、家系、診斷、治療等幾個方面進行系統(tǒng)的分類；③依據(jù)上述分類所得到的具體的結(jié)果，設計出具有較強針對性的試驗，并進行進一步的驗證，明確血型。初篩血型定性采取紙板法進行，經(jīng)抗-A、抗-B標準血清進行定型。在采血完成后，在實驗室采取微孔板法進行正反定型。針對出現(xiàn)正反定型不符情況，進一步展開吸收放散試驗、抗體篩查、唾液血型物質(zhì)測定、亞型檢測進行鑒定，確定血型。

1.3 統(tǒng)計學處理

采取SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 影響ABO血型正反定型不符原因統(tǒng)計

本次18例ABO血型正反定型不符者中，有2例（11.11%）為人為因素造成，另外16例的原因包括有不規(guī)則抗體8例（44.44%）、生理因素2例（11.11%）、自身抗體因素2例（11.11%）、血漿蛋白異常2例（11.11%）、血液疾病2例（11.11%）。不規(guī)則抗體因素構(gòu)成比最高（P<0.05），見表1。

2.2 不規(guī)則抗體檢出情況統(tǒng)計

在本次調(diào)查中，有8例均存在明顯輸血治療史，不規(guī)則抗體的篩查結(jié)果最終顯示為陽性，分別實施抗體特異性的鑒定，其中檢出抗E 2例，抗D 4例，抗C 2例。針對受血者而言，需要選擇不含有相應的抗原、較差配血試驗結(jié)果相合的血液對其進行進一步的輸注，在接受輸血治療之后，患者血紅蛋白水平均達到了臨床預期水平，輸血治療的安全性、有效性得到保證[4-5]。見表2。

3 討論

影響ABO血型正反定型不符原因：（1）生理因素：針對一些老年患者，由于其免疫力水平相對較為低下，血清中所含有的抗體效價水平也相對較低；而對于臨床上的一些新生兒而言，且機體內(nèi)的紅細胞抗原水平相對較弱，抗體并沒有真正意義上完全形成，屬于生理性因素的一種。在進血型鑒定的過程中，針對老年患者的樣本，抗原抗體的反應時間可以根據(jù)實際情況而適當?shù)难娱L，或使定型實驗的血清量水平繼續(xù)增加，也可以通過加入一定量的低離子溶液，使抗原抗體反應程度進一步加強，從而保證正反定型實驗結(jié)果的一致性。針對新生兒血樣標本，可以再繼續(xù)進行反定型實驗，或反定型實驗所得到的結(jié)果僅僅作為一個參考指標，而是進一步增加進行吸收放散實驗，對是否屬于亞型進行最終的確認，依據(jù)患者病情的實際需要，應該定期進行追蹤確認[6-7]。（2）自身抗體。自身免疫性溶血性貧血病例所采集的血液樣本，由于存在明確的自身抗體，在經(jīng)37℃的鹽水進行洗滌之后的紅細胞和自身紅細胞在4℃吸收條件下進行試驗，直到直接抗人球蛋白檢測結(jié)果顯示為陰性之后，再開始進行血型的鑒定檢測，最終能夠獲得一個正反定型相符的試驗結(jié)果。（3）血漿蛋白異常。本研究中出現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤患者有2例，血漿中的M蛋白含量水平呈現(xiàn)明顯的升高狀態(tài)，直接抗人球蛋白的試驗結(jié)果為陽性，造成反定型的時候紅細胞表現(xiàn)出串錢樣凝集狀態(tài)，在實施反定型試驗研究的過程中，加入適量的生理鹽水對凝集是否會發(fā)生消失進行觀察，或紅細胞在經(jīng)過徹底的洗滌處理之后，再配置為生理鹽水的混懸液，可對反定型血清進行一定的稀釋[8]。在了解診斷結(jié)果后，連續(xù)15日給藥，再次對樣本進行檢測，獲得正反定型相符的檢測結(jié)果[9]。（4）血液疾病。相關(guān)領(lǐng)域所進行的研究結(jié)果證實，急性粒細胞性白血病患者的血液樣本，大多數(shù)情況下會有弱抗原或抗原缺失等情況出現(xiàn)，對于一些患有急性粒細胞性白血病的患者而言，由于H轉(zhuǎn)移酶數(shù)量的缺乏或合成過程受到嚴重的抑制，會造成血型抗原程度明顯減弱，此外一些患有再生障礙性貧血疾病的患者體內(nèi)的成熟紅細胞數(shù)量會呈現(xiàn)明顯減少的態(tài)勢，紅細胞形態(tài)會發(fā)生較為明顯的改變，從而會造成血型抗原發(fā)生減弱。針對這一情況可采取以下解決措施：①對紅細胞進行洗滌處理，并適當延長反應的時間，如果是對紅細胞進行洗滌之后反應程度明顯加強，則應該充分考慮是否存在血型物質(zhì)抑制現(xiàn)象；②正定型紅細胞的濃度水平應該適當?shù)脑黾?；③吸收放散實驗，對亞型進行徹底的排除；④對輸血史進行了解，并充分了解患者病情診斷；⑤將樣本放置在4℃條件下，經(jīng)過一段時間之后，再次開展相關(guān)實驗，或更換不同批號標準血清樣本之后再展開進行的血型鑒定[10-12]。（5）人為因素。在本次研究中，有2例患者ABO血型正反定型不符是人為因素造成的，其中1例由于選擇離心力超過1000g，導致串錢狀凝集，在對離心力進行調(diào)整之后，獲得相符結(jié)果。另外1例因標本放置條件不合適，在室溫條件下放置時間過長，造成樣本溶血污染。

ABO疑難血型多表現(xiàn)出以下幾點：（1）正定型與反定型結(jié)果不符；（2）弱凝集，+/-判斷困難；（3）血型“改變”，兩次定型的結(jié)果不符；（4）與ABO“同型血”，交叉配血不匹配；（5）與ABO“同型血”交叉配血“相合”，在輸血過程中卻發(fā)生率輸血反應；（6）與ABO“同型血”交叉配血相合，在輸血過程中無反應，但是Hb升高值并未達到預期效果。

本次研究中發(fā)現(xiàn)，針對疑難血型標本，進一步展開不規(guī)則抗體篩查、吸收放散、唾液血型物質(zhì)凝集抑制試驗的意義重大，經(jīng)上述手段可以解決抗-M、抗-P1以及非特異性冷凝集等意外抗體產(chǎn)生ABO血型鑒定困難等諸多問題。遇到特殊情況，譬如說紅細胞被自身抗體致敏、ABO亞型、表型被疾病等因素干擾等血型在應用血清學方法的檢測結(jié)果出現(xiàn)困難時，開展分子生物學基因分型檢測，能夠?qū)ρ团袛嗵峁┛煽康膮⒖家罁?jù)，為一項不可或缺的輔助手段，目前已經(jīng)引起人們的重視。近期有學者指出，對ABO疑難血型進行鑒定的過程中，在傳統(tǒng)血清學鑒定技術(shù)基礎(chǔ)上，與ABO基因分型檢測技術(shù)相結(jié)合，可以實現(xiàn)快速、簡便、準確的對疑難ABO血型進行鑒定，并且不會受到自身抗體的干擾，不需要重復采取，不必要展開家系調(diào)查，可不考慮是否是分泌型，能夠順利解決疑難血型鑒定等問題，對傳統(tǒng)血清學鑒定技術(shù)的缺陷有彌補作用，值得關(guān)注[13-15]。本次研究中，采用ABO疑難血型3步分析方法展開了血型鑒定，初篩血型定性采取紙板法進行，經(jīng)抗-A、抗-B標準血清進行定型。在采血完成后，在實驗室采取微孔板法進行正反定型。針對出現(xiàn)正反定型不符情況，進一步展開吸收放散試驗、抗體篩查、唾液血型物質(zhì)測定、亞型檢測進行鑒定，確定血型。從而保證血型鑒定的準確性。

造成ABO血型鑒定結(jié)果不相符的相關(guān)影響因素主要包括以下幾個方面：（1）鑒定技術(shù)：對血清進行定性檢測的相關(guān)試劑已經(jīng)失效，或受到污染，或在血標本加入的操作過程中有交叉污染事件發(fā)生；技術(shù)人員在操作過程中，沒有按照相關(guān)規(guī)程的具體要求進行；沒有正確對血型鑒定結(jié)果進行解釋和記錄，將ABO定型試劑血清的“抗A或抗B”誤認為是A型或B型，并沒有認識到在試驗進行過程中，溶血現(xiàn)象同樣是陽性反應，進而造成結(jié)果判斷失誤。（2）血清或紅細胞因素：血型抗體明顯減弱，或相對缺乏，同樣會導致ABO血型正反定型出現(xiàn)不相符合的情況，譬如臨床上所遇到的一些老年人群，其血清抗體的效價水平相對較低，而新生兒血清中所含有的ABO抗體大多數(shù)都會顯示為陰性狀態(tài)，因此，在臨床上通常情況下不會對嬰兒展開ABO反定型實驗。對于一些患有白血病的患者而言，其大多數(shù)情況下會合并患有低病種球蛋白血癥，而患有淋巴瘤的患者還會合并存在低丙種球蛋白血癥，免疫抑制劑類藥物的應用，還有可能會導致低丙種球蛋白血癥等異?，F(xiàn)象的產(chǎn)生，一些免疫缺陷患者，血清中ABO抗體與紅細胞抗原不一致，因此會對血型鑒定結(jié)果產(chǎn)生影響[16-17]。

本次研究對血型鑒定中出現(xiàn)ABO血型正反定型不符的原因和相應處理措施進行探討，對18例擬輸血患者中ABO血型正反定型不符者的臨床資料展開了回顧性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本次18例ABO血型正反定型不符者中，有2例為人為因素造成，另外16例的原因包括有生理因素、自身抗體因素、血漿蛋白異常、不規(guī)則抗體以及血液疾病等因素。造成ABO血型正反定型不符的原因較多，在臨床血型鑒定中應引起重視，積極采取有針對性的確診試驗，展開鑒定分析，ABO血型鑒定時選擇正確輔助手段，進而提高血型鑒定準確性，以保證輸血的安全性、有效性。

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（收稿日期：2017-02-24）