落新婦組培快繁技術(shù)研究

詹佳++鮑躍群++唐飛++鄔梟楠

摘要 以落新婦種子作為外植體進(jìn)行組培快繁，結(jié)果表明：以嫩葉形成愈傷組織誘導(dǎo)芽的方式，實(shí)現(xiàn)叢生芽的再生。適宜誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+ 2，4-D 0.1 mg/L，最適增殖的培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，形成的植株轉(zhuǎn)接到1/2MS+NAA 0.5 mg/L，生根率達(dá)90%以上。

關(guān)鍵詞 落新婦；組織培養(yǎng)；快繁技術(shù)

中圖分類號 S567.23 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）16-0063-02

Abstract Taking Astilbe chinensis seeds as explants in tissue culture and rapid propagation，the results showed that the leaves formed callus induction of bud and adventitious bud regeneration.MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L were the most suitable medium for inducing differentiation，the most suitable medium for MS+BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，the plant was transferred to 1/2MS+NAA0.5mg/L，and the rooting rate reached more than 90%.

Key words Astilbe chinensis；tissue culture；rapid propagation

落新婦（Astilbe chinensis），又名紅升麻、虎麻、金貓兒、金毛等，為落新婦科落新婦屬多年生宿根草本植物[1]，具有較好的藥用價值，還可栽培觀賞、點(diǎn)綴盆景。由于其發(fā)芽率低，發(fā)芽緩慢，出芽不整齊，加上自然資源越來越少，難以滿足需求[2]。該文研究落新婦組培快繁技術(shù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

采用引種馴化成功的落新婦種子作外植體，再以此培育的無菌落新婦植物的葉片進(jìn)行組培試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒。將落新婦種子處理后，在培養(yǎng)的培養(yǎng)中，10 d后觀察不同培養(yǎng)基中種子的污染情況。把無病蟲害的落新婦種子在20 ℃左右溫水浸泡30 min，浸泡洗潔精30 min（同時流水處理）[1]，在操作臺紫外燈處理30 min，無菌條件下用75%酒精溶液浸泡10 s，無菌水沖洗1～2 s，再用0.1%升汞溶液消毒5.5 min，取出用無菌水沖洗2～3次，用消毒濾紙吸干后切塊，均勻撒種于培養(yǎng)基上，污染率最低。

1.2.2 外植體培養(yǎng)。把種子放在培養(yǎng)基上25 d后，將長成的小苗進(jìn)行轉(zhuǎn)接、擴(kuò)繁。

1.2.3 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。以MS作為初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，然后在培養(yǎng)基中加入蔗糖30 g/L和瓊脂7.2 g/L。培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照強(qiáng)度3000 lx，光照時間12 h/d，pH值均為5.8。

1.2.4 初代培養(yǎng)。以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）、2，4-D（0.1、0.2 mg/L）進(jìn)行組合，每種培養(yǎng)基接種30個外植體。

1.2.5 增殖培養(yǎng)。在增殖培養(yǎng)基上接種誘導(dǎo)出來的芽，附加不同濃度的6-BA（0.3、0.5、0.7、1.0 mg/L），2，4-D 0.1 mg/L，每種培養(yǎng)基分別接種30瓶，觀察記錄增殖效果。

1.2.6 生根培養(yǎng)。在1/2MS培養(yǎng)基上分別添加不同濃度的NAA（0.1、0.5 mg/L）與2，4-D（0.1、0.5 mg/L）進(jìn)行誘導(dǎo)生根，并在生根過程中進(jìn)行比較，觀察試管苗生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒方式對外植體的影響

在落新婦種子處理后10 d后觀察不同培養(yǎng)基中種子的污染情況。從表1可以看出，把無病蟲害的落新婦種子在20 ℃左右溫水浸泡30 min，浸泡洗潔精30 min（同時流水處理），在操作臺紫外燈處理30 min，用75%酒精溶液浸泡10 s，0.1%升汞溶液處理5.5 s的處理污染率最低，僅為14.28%[3]。

2.2 不同激素配比對芽誘導(dǎo)的影響

在落新婦葉片芽誘導(dǎo)過程中，葉片均可在15 d左右形成愈傷組織從而誘導(dǎo)出芽。從表2可以看出，A3培養(yǎng)基（MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L）芽誘導(dǎo)率明顯高于其他，且芽生長健壯、葉色綠。

2.3 芽的增殖

從表3可以看出，當(dāng)6-BA分別為0.3～1.0 mg/L時，添加0.1 mg/L的2，4-D，芽均能增殖，增殖倍數(shù)在4.5倍以上。從芽苗的增殖倍數(shù)、苗的長勢等綜合因素考慮，最終試驗(yàn)得出最適增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L（圖1）。

2.4 生根培養(yǎng)

將1～3 cm高的落新婦試管苗接種于添加0.1、0.5 mg/L的NAA或0.1、0.5 mg/L的2，4-D的1/2 MS培養(yǎng)基中，15 d開始生根，25 d進(jìn)行觀察。從表4可以看出，0.5 mg/L的NAA較低濃度（0.1 mg/L）的效果好，能縮短試管苗生根時間，根粗壯。而0.1、0.5 mg/L的2，4-D生長的根系一般（圖2）。

2.5 試管苗移栽

為了提高移栽成活率，應(yīng)將試管苗放在自然光下煉苗 2～3 d，洗凈小苗的根部，移栽在腐殖土的苗床上，注意遮蔭保溫，成活率一般可達(dá)到80%以上。

3 結(jié)論與討論

落新婦以嫩葉形成愈傷組織誘導(dǎo)芽的方式，實(shí)現(xiàn)叢生芽的再生。適宜誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1mg/L，最適增殖的培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，形成的植株轉(zhuǎn)接到1/2MS+NAA 0.5 mg/L，生根率達(dá)90%以上[9-15]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 龐長民，王慶，劉安成，等.不同處理對落新婦種子室內(nèi)萌發(fā)的影響[J].西南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2009，31（2）：70-73.

[2] 曾春鳳，郭艷敏，劉澤勇，等.宿根花卉新秀——落新婦的栽培及應(yīng)用[J].河北林業(yè)科技，2006（4）：54.

[3] 胡凱，張立軍，白雪梅，等.植物組織培養(yǎng)污染原因分析及外植體的消毒[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（3）：680-681.

[4] 陳娟，潘開文，畢世榮，等.生姜莖尖組織培養(yǎng)和污染率控制的研究[J].長江蔬菜，2007（1）：38-40.

[5] 譚文澄.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2001.

[6] 周俊輝，李宏彬，楊耀強(qiáng)，等.植物組織培養(yǎng)中污染的鑒定與防止初步研究[J].微生物學(xué)雜志，2002，22（2）：53-55.

[7] 焦立為，黃克梅，焦立群.植物組織培養(yǎng)前用臭氧對外植體進(jìn)行消毒滅菌的效果初探[J].植物生理學(xué)通訊，2005，38（5）：466.

[8] 俞繼英，王春，陳任文展，等.紅葉石楠的組培快繁技術(shù)[J].林業(yè)科技開發(fā)，2005，19（2）：45-46.

[9] 劉香玲，王玉珍，羅景蘭.水稻成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)和分化因素的研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（5）：7-9.

[10] 譚文澄.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2001.

[11] 任敬民，陳躍進(jìn)，郭麗明.臺灣青棗組織培養(yǎng)的消毒方法[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004（1）：65-68.

[12] 鄭永強(qiáng)，劉艷梅，徐坤.生姜組織培養(yǎng)污染率控制研究[J].生物技術(shù)，2003，13（6）：38-39.

[13] 周俊輝，周后高，劉花全.植物細(xì)胞培養(yǎng)中內(nèi)生菌污染問題[J].廣西植物，2003，23（1）：41-47.

[14] 石大興，王米力，石軼松，等.巨桉芽器官離體培養(yǎng)與快繁體系建立的研究[J].林業(yè)科學(xué)，2003，39（1）： 69-74.

[15] 邱運(yùn)亮.翅莢木試管苗快速繁殖技術(shù)的研究[J].林業(yè)科技開發(fā)，2002，16（6）：14-16.