佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的制備及體外透皮研究

楊曉艷，易 蕾（武漢科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院藥劑科，武漢 430064）

佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的制備及體外透皮研究

楊曉艷＊，易 蕾#（武漢科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院藥劑科，武漢 430064）

目的：制備佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳，并進(jìn)行質(zhì)量評價和體外透皮研究。方法：以溶解度和偽三元相圖中的微乳面積為指標(biāo)，篩選佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的油相種類和混合乳化劑比例；以粒徑、Zeta電位、外觀形態(tài)和穩(wěn)定性考察微乳的質(zhì)量，采用高效液相色譜法測定微乳中佐米曲普坦和雙氯芬酸的含量，使用透皮擴(kuò)散試驗儀，將2 g微乳涂抹于離體鼠皮角質(zhì)層，檢測24 h內(nèi)的累積透皮率。結(jié)果：微乳處方為油相（辛酸/癸酸甘油三酯）10%、混合乳化劑[聚山梨酯80-芐澤97（1∶1）]25%、1，2-丙二醇8.3%，佐米曲普坦25mg、雙氯芬酸1.25 g，水加至100m L。所制微乳的平均粒徑為（28.2±2.5）nm，Zeta電位為（－3.25±0.33）mV，外觀圓整，室溫下放置1個月未見分層或絮凝；佐米曲普坦和雙氯芬酸的含量分別為0.248、12.46mg/m L（n＝3）；24 h累積透皮率分別為80%、75%。結(jié)論：制得佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳，其體外透皮性較好。

佐米曲普坦；雙氯芬酸；微乳；偽三元相圖；制備；透皮吸收

#通信作者：副主任藥師。研究方向：藥物制劑與合理用藥。E-mail：547576126@qq.com

ABSTRACTOBJECTIVE：To prepare zolmitriptan-diclofenac microemulsion，and conduct quality evaluation and in vitro transdermal study.METHODS：Using solubility and m icroemulsion area in pseudo-ternary phase diagram as indexes，the types of oil phase and mixed emulsifier ratio of zolmitriptan-diclofenac microemulsion were screened；them icroemulsion quality was inspected using particle size，Zeta potential，appearance and stability.HPLC was used to measure the contents of zolm itriptan and diclofenac. Transdermal diffusion test instrumentwas used，2 gm icroemulsion was smeared in cuticle of extracouporeal rats’skin，and cumulative transdermal rate in 24 h was determ ined.RESULTS：Themicroemulsion formulation was as follow as 10%oil phase（octanoic acid triglyceride），25%m ixture emulgator[polysorbate 80-brij 97（1∶1）]，8.3%propylene glycol and 25 mg zolm itriptan，1.25 mg diclofenac，and water adding to 100m L.The average particle size of prepared microemulsion was（28.2±2.5）nm，Zeta potential was（－3.25±0.33）mV，the appearance was rounding；them icroemulsion showed no stratification or flocculation at room temperature after placed for 1month.Contents of zolmitriptan and diclofenac were 0.248mg/m L，12.46mg/m L（n＝3）；24 h cumulative transdermal rateswere 80%，75%.CONCLUSIONS：Zolm itriptan-diclofenac m icroemulsion is prepared，and its in vitro transdermal ability is good.

偏頭痛是常見的臨床問題，全球患病率達(dá)14.7%，目前多給予曲坦類、非甾體抗炎藥（NSAID）等進(jìn)行對癥治療。曲坦類藥物是選擇性5-羥色胺（5-HT）受體激動藥，常以口服及注射劑型用于臨床，起效迅速，但是維持時間較短、患者復(fù)發(fā)率高。佐米曲普坦是目前治療偏頭痛最有效的曲坦類藥物之一，在偏頭痛治療過程中，其藥效學(xué)和安全性方面都表現(xiàn)出令人滿意的效果；雙氯芬酸為常用的消炎鎮(zhèn)痛藥，是NSAID類代表藥物，其起效慢，但維持時間長。如果將兩者組成復(fù)方制劑（如Treximet片）則可以取長補(bǔ)短，避免曲坦類的不良反應(yīng)[1]。但口服劑型存在吸收慢且不規(guī)則、維持時間短、會引起惡心癥狀等使患者難以堅持服用的缺點(diǎn)；而鼻噴劑對鼻腔有刺激作用，并有口苦感，使用不當(dāng)時藥物吸收效果也不理想。微乳作為藥物載體，具有低黏度、吸收迅速、靶向釋藥的特點(diǎn)，并可提高藥物的生物利用度，降低毒副作用[2]。為此，筆者研制了佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳，并對微乳進(jìn)行大鼠離體皮膚的透皮試驗，以促進(jìn)曲坦類與NSAID的新型經(jīng)皮給藥制劑的開發(fā)。

1 材料

1.1 儀器

LC-10Atvp型高效液相色譜儀，包括SPD-10Avp紫外檢測器、Class-vp色譜工作站（日本島津公司）；透皮擴(kuò)散試驗儀及擴(kuò)散池（上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司）；3000HS型激光粒度分析儀（英國馬爾文儀器有限公限）；H2765型透射電子顯微鏡（日本日立公司）；TDL80型高速離心機(jī)（上海市離心機(jī)廠研究所，離心半徑：15 cm）；TG-328光學(xué)讀數(shù)分析天平（湘儀天平儀器廠，感量：0.1mg）。

1.2 藥品與試劑

佐米曲普坦原料藥（成都天臺制藥廠，批號：20120527，純度：99.3%）；雙氯芬酸原料藥（湖北興銀河化工有限公司，批號：20140411，純度：99.1%）；佐米曲普坦對照品（上海華拓醫(yī)藥科技有限公司，批號：20100530，純度：＞99.5%）；雙氯芬酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100334-200507，純度：99.3%）；佐米曲普坦鼻噴劑（商品名：司蘭平，山東京衛(wèi)制藥有限公司，批號：20141010，規(guī)格：2.5mg/噴）；1%雙氯芬酸乳膠劑（商品名：扶他林，北京諾華制藥有限公司，批號：20131105，規(guī)格：0.2 g/20 g）；丙二醇單辛酸酯（Capryol90）、辛酸/癸酸甘油三酯（Labrafac）（法國Gattefosse公司，批號：58748-27、58653-35）；芐澤97（南京威爾化工有限公司，批號：20130604，藥用級）；聚山梨酯80（天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司，批號：20120510，注射級）；大豆油（宜興市化學(xué)試劑廠，批號：20111211，藥用級）；1，2-丙二醇、正丁醇、95%乙醇、油酸均為藥用級；甲醇為色譜純，水為蒸餾水。

1.3 動物

SD大鼠，♂，體質(zhì)量（210±5）g，均由湖北省實驗動物研究中心提供，動物使用合格證號為SCXK（鄂）2010-0007。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶解度的測定

取佐米曲普坦、雙氯芬酸原料藥分別置于具塞離心管中，分別加入8種介質(zhì)，即水相（蒸餾水）、油相（Capryol90、Labrafac、大豆油）、表面活性劑（聚山梨酯80和芐澤97）、助表面活性劑（1，2-丙二醇和乙醇）2m L，渦旋混合30m in，在50℃水浴中平衡1 h，室溫下放置72 h，3 000 r/m in（離心半徑：15 cm）離心10m in。取上清液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，用甲醇稀釋適宜倍數(shù)后，采用高效液相色譜法分別于225 nm和276 nm波長處測定佐米曲普坦、雙氯芬酸的含量，計算溶解度，結(jié)果見表1。

由表1可知，佐米曲普坦和雙氯芬酸在水中溶解度均很??；油相中以在Labrafac中溶解度最大；在2種表面活性劑中溶解度相近；在助表面活性劑中以在1，2-丙二醇中溶解度較大。因此，選擇Labrafac為油相、聚山梨酯80-芐澤97（1∶1）為混合乳化劑、1，2-丙二醇為助表面活性劑。

2.2 處方的篩選

精密稱取不同處方量（0、25%、50%、75%、100%）的油相（Labrafac），與不同處方量（0、25%、50%、75%、100%）的混合乳化劑[聚山梨酯80-芐澤97（1∶1）]和助表面活性劑（1，2-丙二醇）[混合乳化劑-助表面活性劑比例（Km）分別為1∶1、2∶1、3∶1]混合制備成混合溶液，在攪拌狀態(tài)下逐漸滴加水。以外觀“澄清透明”為指標(biāo)，記錄臨界加入量，繪制偽三元相圖，以微乳區(qū)（陰影區(qū)）面積最大為指標(biāo)篩選處方，結(jié)果見圖1。

表1 佐米曲普坦和雙氯芬酸在不同介質(zhì)中的溶解度（±s，n＝3，μg/m L）Tab 1 Solubility of zolm itriptan and diclofenac in differentmedia（±s，n＝3，μg/m L）

表1 佐米曲普坦和雙氯芬酸在不同介質(zhì)中的溶解度（±s，n＝3，μg/m L）Tab 1 Solubility of zolm itriptan and diclofenac in differentmedia（±s，n＝3，μg/m L）

介質(zhì)蒸餾水（水相）Capryol90（油相）Labrafac（油相）大豆油（油相）聚山梨酯80（表面活性劑）芐澤97（表面活性劑）1，2-丙二醇（助表面活性劑）乙醇（助表面活性劑）佐米曲普坦1.5±0.1 5.2±0.3 12.6±0.4 3.3±0.3 21.5±0.9 19.3±0.8 19.5±0.6 12.6±0.5雙氯芬酸15.1±0.8 435.5±3.6 720.2±5.1 203.7±2.4 624.8±5.7 596.4±4.5 503.3±4.2 442.1±3.6

圖1 不同配比微乳的偽三元相圖Fig 1 Pseudo-ternary phase diagram of m icroemu lsion w ith different ratios

由圖1可知，當(dāng)Km為3∶1，即油相（Labrafac）為10%、混合乳化劑為25%、助表面活性劑為8.3%、水為56.7%時所形成的微乳面積最大，以此確定佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的處方組成。

2.3 佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的制備

根據(jù)“2.2”項下結(jié)果確定佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的處方為油相（Labrafac）10%、混合乳化劑[聚山梨酯80-芐澤97（1∶1）]25%、助表面活性劑（1，2-丙二醇）8.3%、佐米曲普坦25mg、雙氯芬酸1.25 g，水加至100 m L。在室溫下按微乳處方（除水外）將各組分充分混合均勻，加入佐米曲普坦和雙氯芬酸原料藥，100W超聲5～10m in溶解，在不斷攪拌下緩慢加入適量水至形成透明的微乳液。

2.4 微乳的表征

[3-4]對微乳進(jìn)行表征。

2.4.1 粒徑及Zeta電位測定 取佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳適量，用激光粒度分析儀測定微乳粒徑及Zeta電位。結(jié)果顯示，佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳的平均粒徑為（28.2±2.5）nm、Zeta電位為（－3.25±0.33）mV，表明該微乳粒徑較小、分布均勻，且微乳帶負(fù)電荷利于微乳的穩(wěn)定和保存。

2.4.2 外觀形態(tài)觀察 將載有支持膜的銅網(wǎng)置于蠟板上，在膜上分別滴加佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳和不含佐米曲普坦和雙氯芬酸的空白微乳，各1滴，自然晾干30m in，再滴加2%磷鎢酸1滴，自然晾干10min，用濾紙吸去多余液體，置于透射電子顯微鏡下觀察。結(jié)果顯示，該微乳外觀圓整，粒徑分布均勻。透射電鏡圖見圖2。

圖2 透射電鏡圖Fig 2 Transm ission electronm icrograph

2.4.3 穩(wěn)定性考察 取佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳1.0 m L，置于1.5m L離心管中，12 000 r/min（離心半徑：15 cm）離心20min，結(jié)果該微乳離心后澄清透明、未見分層；將佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳室溫下放置1個月，結(jié)果該微乳未見分層或絮凝等現(xiàn)象，表明該微乳穩(wěn)定性良好（n＝6）。

2.5 微乳的含量測定

采用高效液相色譜法測定佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳中佐米曲普坦和雙氯芬酸的含量[5-6]。

2.5.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取佐米曲普坦對照品10.0mg和雙氯芬酸對照品25.0mg，用甲醇溶解后稀釋至100m L，制成佐米曲普坦0.1mg/m L、雙氯芬酸0.5mg/m L的混合對照品溶液。

2.5.2 色譜條件 色譜柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.05%三乙胺水溶液（磷酸調(diào)pH 2.7）-乙腈（90∶10，V/V）；流速：1.0 m L/m in；檢測波長：276 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL。混合對照品和供試品溶液的色譜圖見圖3。

圖3 高效液相色譜圖Fig 3 HPLC chromatogram

2.5.3 方法學(xué)考察 按方法學(xué)要求進(jìn)行考察。以質(zhì)量濃度（c）對峰面積（A）進(jìn)行回歸，得佐米曲普坦和雙氯芬酸的回歸方程分別為：A＝268.35c－44.31（r＝0.999 5）、A＝121.42c+13.57（r＝0.999 1），二者線性范圍分別為1.0～100.0、1.0～50.0μg/m L；回收率分別為99.53%、98.46%，RSD分別為1.98%、2.05%（n＝3）；精密度試驗的RSD分別為1.26%、1.52%（n＝6）；24 h內(nèi)穩(wěn)定性試驗的RSD分別為1.75%、2.13%（n＝3）。

2.5.4 樣品的含量測定 取佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳3份，每份1.0m L，置于10m L量瓶中，加甲醇5.0m L破乳，甲醇定容至刻度，超聲5m in，過0.45μm微孔濾膜后，按“2.5.2”項下色譜條件進(jìn)樣測定佐米曲普坦和雙氯芬酸的含量。結(jié)果顯示，3份微乳中佐米曲普坦的質(zhì)量濃度分別為0.244、0.255、0.246 mg/m L，均值為0.248 mg/m L（RSD＝4.91%，n＝3），標(biāo)示百分含量為99.2%；雙氯芬酸的質(zhì)量濃度分別為12.25、12.75、12.38mg/m L，均值為12.46mg/m L（RSD＝2.37%，n＝3），標(biāo)示百分含量為99.68%。

2.6 微乳的體外透皮性能考察

采用透皮擴(kuò)散試驗儀法[7]，將離體鼠皮固定，角質(zhì)層面向供給池，真皮層面向接收池，透過面積為2.5 cm2。分別將佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳2 g、1%雙氯芬酸乳膠劑2 g和佐米曲普坦鼻噴劑2m L涂抹于鼠皮角質(zhì)，在供給池和接收池中加入含10%乙醇的生理鹽水18m L，水浴恒溫（35±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為300 r/min。分別于0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24 h時取接收液0.5m L，同時補(bǔ)加等量等溫介質(zhì)。接收液于10 000 r/m in（離心半徑：15 cm）離心10min，測定其中佐米曲普坦和/或雙氯芬酸的含量，計算累積透皮率，繪制體外透皮曲線。3種樣品中2種成分的體外透皮曲線見圖4。

圖4 3種樣品中2種成分的體外透皮曲線Fig 4 Transdermal curve in vitro of two components in three samp les

由圖4可看出，佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳中佐米曲普坦、雙氯芬酸的24 h累積透皮率分別為80%、75%。佐米曲普坦從微乳中釋藥較快，與佐米曲普坦鼻噴劑類似；而微乳中雙氯芬酸釋藥慢且平緩，與1%雙氯芬酸乳膠劑類似。

3 討論

佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳中聚山梨酯80和芐澤97屬于非離子型表面活性劑，可以促進(jìn)大多數(shù)藥物的透皮吸收，且用于皮膚給藥被認(rèn)為是比較安全的，其刺激性小于離子型表面活性劑；1，2-丙二醇也是常用的助表面活性劑[8]。

制備微乳的第一步是確定處方，微乳體系各成分確定后，可通過偽三元相圖找出微乳相形成區(qū)域，確定微乳成分的用量，然后將各成分按比例混合即可制得微乳。此過程中，各成分的加入順序不會影響微乳的形成[9]。本試驗通過水滴定法繪制微乳偽三元相圖，改變微乳中各成分的比例，觀察Km值的變化對微乳區(qū)域大小的影響，選擇形成微乳區(qū)域比較大的點(diǎn)設(shè)計處方。

佐米曲普坦鼻噴劑（司蘭平）在臨床應(yīng)用中是通過鼻黏膜滲透吸收，1%雙氯芬酸乳膠劑（扶他林）是通過皮膚表面滲透吸收，與本試驗微乳吸收途徑相類似[10]，所以在透皮試驗中筆者選用二者作為對照進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示，自制佐米曲普坦-雙氯芬酸微乳中2種成分的累積透皮率與市售產(chǎn)品均無明顯差異。

參考文獻(xiàn)

[1] 張莉，欒勇，孫成春.曲坦類藥物治療偏頭痛的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2012，28（6）：551-557.

[2] 蔡霞，呂竹芬，陳燕忠.鹽酸氟西汀微乳的制備及其離體大鼠透皮作用研究[J].中國藥房，2010，21（33）：3121-3123.

[3] 張愛武，張友智.卡維地洛鼻用微乳凝膠的制備及性質(zhì)考察[J].中國藥房，2016，27（28）：3992-3995.

[4] 范永春，戴薇，李步陽.蟾蜍毒素微乳的制備及體外透皮吸收考察[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：49-53.

[5] 胡榮，黃華，杜洋，等.佐米曲普坦在不同pH條件下的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，35（8）：1235-1237.

[6] Chao L，Liang F.Drug in adhesive patch of zolm itriptan：formulation and in vitro/in vivo correlation[J].Pharm Sci Tech，2015，16（6）：1245-1253.

[7] 易蕾，趙瑛.碘化鉀微乳的制備及其體外透皮吸收作用考察[J].中國藥房，2015，26（13）：1830-1833.

[8] 康榮榮，楊蘇芳，韓萌，等.微乳在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中的應(yīng)用[J].中南藥學(xué)，2014，12（3）：253-258.

[9] 徐小燕，邱碧菡，潘林梅.微乳透皮給藥載體的制備及透皮影響因素研究進(jìn)展[J].中國藥房，2011，22（37）：3528-3530.

[10] 王勤，李華文，彭新生.蛇床子素微乳的制備及其透皮能力的研究[J].中國藥房，2010，21（27）：2529-2531.

（編輯：鄒麗娟）

Preparation and in vitro Transdermal Study of Zolm itriptan-Diclofenac M icroemulsion

YANG Xiaoyan，YI Lei（Dept.of Pharmacy，A ffiliated Tianyou Hospital of Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430064，China）

Zolm itriptan；Diclofenac；M icroemulsion；Pseudo-ternary phase diagram；Preparation；Transdermal absorption

R943；R965

A

1001-0408（2017）13-1841-04

2016-08-16

2016-12-15）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.13.32

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)與藥物制劑。E-mail：321973499@qq.com