雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的含量測(cè)定

林生文

（廣東省食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510180）

雙氯芬酸二乙胺[1]是雙氯芬酸非金屬離子鹽，適合局部用藥，是一種兩親性分子，和其他雙氯芬酸鹽相比，更容易透過(guò)疏水性的角質(zhì)層和親水性的表皮層。雙氯芬酸二乙胺目前的制劑品種主要為雙氯芬酸二乙胺乳膠劑和凝膠劑，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需要進(jìn)一步提高與統(tǒng)一。雙氯芬酸二乙胺乳膠劑為解熱鎮(zhèn)痛類非處方藥，對(duì)軟組織疼痛有良好療效[2]，可用于治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎[3]，具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用。局部應(yīng)用時(shí)，其有效成分可穿透皮膚到達(dá)炎癥區(qū)域，緩解急慢性炎癥反應(yīng)，對(duì)因外傷或風(fēng)濕病引起的炎癥，可使炎性腫脹減輕、疼痛緩解，可用于緩解肌肉、軟組織、關(guān)節(jié)的中度疼痛。雙氯芬酸二乙胺乳膠劑現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品試行標(biāo)準(zhǔn)[4]，以雙氯芬酸二乙胺為對(duì)照品，采用高效液相色譜法測(cè)定含量，但不同劑型方法不統(tǒng)一。本試驗(yàn)中新建了雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的測(cè)定方法，統(tǒng)一了不同制劑的測(cè)定方法，同時(shí)解決了對(duì)照品缺乏的問(wèn)題?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型液相色譜儀；Chemstation色譜工作站；梅特勒ME104E型電子天平。雙氯芬酸鈉對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100334-201003）；雙氯芬酸二乙胺對(duì)照品、雙氯芬酸二乙胺乳膠劑（批號(hào)為 X1146，X1326，X1854，規(guī)格為 20 g∶0.2 g，以C14H10Cl2NNaO2計(jì)，均由諾華制藥有限公司北京分公司提供)；甲醇、乙腈均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5]

色譜柱:CNW C18柱（150mm ×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相:甲醇 -4%冰醋酸水溶液（70∶30），流動(dòng)相使用前經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜抽濾并脫氣；流速:1.5mL /min；檢測(cè)波長(zhǎng)[4]:276 nm；柱溫:40 ℃ 。

2.2 溶液制備[6]

取雙氯芬酸鈉對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中含0.25 mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取本品 2.5 g（約相當(dāng)于雙氯芬酸鈉25 mg），精密稱定，置 100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲30 min使溶解，放冷，用甲醇稀釋刻度，搖勻，離心，取上清液，通過(guò)0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[7]:取雙氯芬酸二乙胺適量，用水制成每1 mL中約含1 mg的溶液，取適量，置石英吸收池中，在紫外光燈（254 nm）下照射15 min，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，在與雙氯芬酸二乙胺保留時(shí)間約0.8 min處出現(xiàn)一雜質(zhì)峰，雜質(zhì)峰和雙氯芬酸二乙胺峰的分離度應(yīng)不低于4.0，理論板數(shù)按雙氯芬酸二乙胺峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。見(jiàn)圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:取雙氯芬酸鈉對(duì)照品125 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。精密吸取上述溶液1，3，5，2，5 mL，置 50，50，50，10，10 mL 容量瓶中，配制成質(zhì)量濃度為51.600～1 290.0μg/mL 對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣 20μL，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（C）、峰面積為縱坐標(biāo)（A）進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程 A＝116.724 8C-72.462 6，r＝0.999 9（n＝5）。結(jié)果表明，雙氯芬酸鈉質(zhì)量濃度在 51.600～1 290.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值。結(jié)果的 RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一批供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.8%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，分別平行稱取6份，依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為1.2%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)[8]:取樣品（批號(hào)為 X1146），分別制備質(zhì)量濃度為標(biāo)示濃度80%，100%，120%的供試品溶液各3份，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液及對(duì)照品溶液，分別精密吸取20μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

由于雙氯芬酸二乙胺對(duì)照品難以購(gòu)買(mǎi)，而雙氯芬酸鈉對(duì)照品易獲得。本品的規(guī)格以雙氯芬酸鈉計(jì)，雙氯芬酸二乙胺乳膠劑按雙氯芬酸鈉為標(biāo)示量計(jì)算。本試驗(yàn)中采用雙氯芬酸鈉及雙氯芬酸二乙胺為對(duì)照品測(cè)定3批樣品，結(jié)果兩種方法測(cè)定的含量基本一致。因此認(rèn)為，本品可以采用較容易得到的雙氯芬酸鈉作為對(duì)照品，測(cè)定含量。

本試驗(yàn)中采用了4條色譜柱測(cè)定含量，分別為 CNW C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），Merck C18柱（125 mm ×4.6 mm，4 μm），Waters XBridge C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），安捷倫XDB-C18柱（150mm ×4.6mm，5 μm）。測(cè)定結(jié)果顯示，此 4條色譜柱均適用于雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的含量測(cè)定。

本試驗(yàn)中嘗試用甲醇和70%甲醇作為溶劑進(jìn)行樣品前處理，發(fā)現(xiàn)乳膠劑在甲醇溶液中溶解較好，輔料無(wú)干擾，溶液比較澄清，故選用甲醇作為溶劑。測(cè)定過(guò)程中考察了流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)冰醋酸濃度較高時(shí)峰形較好。雙氯芬酸二乙胺乳膠劑的測(cè)定采用水溶液破壞的方法，結(jié)果破壞試驗(yàn)方法重現(xiàn)性好、方法簡(jiǎn)單，解決了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)需要對(duì)照品的問(wèn)題。

參考文獻(xiàn):

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[8]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄29-附錄 31.