NLRP3與急性心肌梗死患者預(yù)后的研究

董元寶+尹麗娟+王英華+李偉真+王小龍

【摘要】 目的 探討Nod樣受體蛋白3（NLRP3）對(duì)急性心肌梗死患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值， 為NLRP3的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法 155例因急性心肌梗死入院治療患者為研究對(duì)象， 收集臨床資料， 分離外周血單個(gè)核細(xì)胞， 以免疫印跡法（Western blotting）定量測定NLRP3水平， 測定B型鈉尿肽前體（NT-proBNP）及左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。根據(jù)1年隨訪結(jié)果， 將研究對(duì)象分為無不良心血管事件（MACE）組（115例）及MACE組（42例）， 觀察患者預(yù)后與NLRP3表達(dá)水平的關(guān)系。結(jié)果 兩組患者的年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、吸煙、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、阿司匹林使用率、氯吡格雷使用率、他汀使用率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與無MACE組相比， MACE組NLRP3在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高， NT-proBNP水平顯著升高；此外LVEF較低， 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑/血管緊張素受體拮抗劑（ACEI/ARB）及β受體阻斷劑使用率較低， 有高血壓病史患者比例較低， 而糖尿病病史患者比例較高， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。多因素Logistic回歸分析表明， NLRP3 [OR=8.752， 95%CI（2.052， 37.333）， P=0.003]、NT-proBNP [OR=1.020， 95%CI（1.000， 1.043）， P=0.032]、糖尿病史[OR=6.536， 95%CI（2.511， 17.013）， P<0.001]可作為冠心病不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。結(jié)論 NLRP3的表達(dá)水平與急性心肌梗死患者1年后的臨床結(jié)果相關(guān)， 能夠預(yù)測急性心肌梗死患者的預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】 Nod樣受體蛋白；急性心肌梗死；預(yù)后

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.04.002

【Abstract】 Objective To explore the predictive value of pyrin domain-containing 3 （NLRP3） on prognosis of patients with acute myocardial infarction， and to provide basis for clinical application of NLRP3. Methods A total of 155 hospitalized patients due to acute myocardial infarction as study subjects， and their clinical data were collected. Peripheral blood mononuclear cells were separated， and immunoblotting method （Western blotting） was used to quantitative determination of NLRP3 level， as well as detection of N-terminal pro-B type natriuretic peptide （NT-proBNP） and left ventricular ejection fraction （LVEF）. Study subjects were divided by 1 year follow-up outcomes into non major adverse cardiac events （MACE） group （115 cases） and MACE group （42 cases）. Correlation of prognosis and NLRP3 express level was observed. Results There were no statistically significant difference in age， gender， body mass index （BMI）， smoking， low density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， utilization rate of aspirin， clopidogrel and statin between two groups. Compared with non MACE group， MACE group had significantly increased expression of NLRP3 in peripheral blood mononuclear cells， as well as significant increase of NT-proBNP levels significantly， lower LVEF score， lower utilization rate of angiotensin converting enzyme inhibitor/angiotensin receptor antagonist （ACEI/ARB） and beta blockers， lower proportion of patients with hypertension history， and higher proportion of patients with diabetes history. Multiple factors Logistic regression analysis showed that NLRP3 [OR=8.752， 95%CI （2.052， 37.333）， P=0.003]， NT-proBNP [OR=1.020， 95%CI （1.000， 1.043）， P=0.032]， diabetes history [OR=6.536， 95%CI （2.511， 17.013）， P<0.001] could be used as an independent predictor of poor prognosis of coronary heart disease. Conclusion Expression level of NLRP3 is correlated to clinical outcome of patients with acute myocardial infarction in 1 year， and it can be able to predict the prognosis of patients with acute myocardial infarction.

【Key words】 Pyrin domain-containing 3； Acute myocardial infarction； Prognosis

目前， NLRP3在動(dòng)脈粥樣硬化疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用已經(jīng)被逐步揭示。膽固醇結(jié)晶可以通過激活巨噬細(xì)胞內(nèi)的NLRP3炎癥小體促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化疾病的發(fā)生發(fā)展[1， 2]。發(fā)現(xiàn)NLRP3在人外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度呈顯著正相關(guān)， 對(duì)冠心病有很強(qiáng)的預(yù)測意義。目前已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明抑制NLRP3炎癥小體的活性可減少心肌梗死面積及大鼠血清中肌鈣蛋白I的水平[3]。但NLRP3炎癥小體在急性心肌梗死過程及預(yù)后的作用， 尚無臨床研究。因此， 本研究通過回顧及隨訪近年來的急性心肌梗死病例資料探討NLRP3在人外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)水平與急性心肌梗死患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2012年1月～2015年6月在濰坊市坊子區(qū)人民醫(yī)院就診的急性心肌梗死患者155例， 其中男103例，

女52例。排除標(biāo)準(zhǔn)：首診心肌梗死并院內(nèi)死亡者， 合并有明確的感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷、風(fēng)濕病等引起NLRP3水平升高， 以及不方便隨訪的患者。所有順利出院的心肌梗死患者通過再入院記錄、門診復(fù)診或電話隨訪1年， 記錄主要MACE， 包括急性冠脈事件（ST段抬高型心肌梗死、非ST段抬高型心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛）、新發(fā)心力衰竭或原有心力衰竭加重、嚴(yán)重心律失常（心室顫動(dòng)、室性心動(dòng)過速）及死亡。以上事件由至2位參與本研究的醫(yī)師評(píng)定。根據(jù)隨訪結(jié)果將研究對(duì)象分為MACE組（42例）和無MACE組（113例）。

無MACE組， 男75例， 女38例， 年齡（65.45±11.25）歲；MACE組男28例， 女14例， 年齡（69.17±8.69）歲。本研究所有患者均簽署知情同意書。

1. 2 人外周血單核細(xì)胞的獲取 自患者肱靜脈抽取新鮮抗凝血6 ml加等量Hanks液混勻稀釋加入含有淋巴細(xì)胞分離液的離心管中， 離心10 min， 用Hanks液洗2次， 以含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞， 在37℃、5%CO2 孵箱中培養(yǎng)48 h后， 以RPMI1640培養(yǎng)基清洗， 取出非黏附細(xì)胞， 獲得貼壁的單核細(xì)胞。

1. 3 NLRP3的檢測 應(yīng)用免疫印跡法（Western blotting）定量分析NLRP3。收集樣本1.5ml無菌離心管中， 冰上操作， 配制細(xì)胞裂解液， 以Model450型酶聯(lián)免疫儀（美國BIO-RAD公司）測波長為492 nm的吸收值定量[4， 5]。

1. 4 檢測指標(biāo)及收集資料 所有人選患者于住院治療次日清晨空腹抽取肘部靜脈血4 ml， 離心后抽取上清液置于-80℃冰箱保存， 相關(guān)臨床指標(biāo)由本院臨床檢驗(yàn)科測定。詳細(xì)記錄患者一般臨床資料。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 非正態(tài)分布資料采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示， 兩組間比較采用t檢驗(yàn)或Mann-Whitney檢驗(yàn)， 統(tǒng)計(jì)BNP時(shí)采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)；有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異者再行多因素Logistic回歸分析NLRP表達(dá)水平與心肌梗死患者主要心血管不良事件的發(fā)生是否獨(dú)立相關(guān)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 MACE 1年隨訪期內(nèi)， 無一例患者失訪， 113例患者未發(fā)生MACE， 42例發(fā)生MACE。3例死亡， 3例新發(fā)心力衰竭， 18例原有心力衰竭加重；21例出現(xiàn)急性缺血事件， 其中2例為ST段抬高型心肌梗死， 17例為不穩(wěn)定型心絞痛， 4例為非ST段抬高型心肌梗死；1例發(fā)生室性心動(dòng)過速、室性顫動(dòng)后死亡， 2例再發(fā)心肌梗死后死亡。

2. 2 一般臨床資料 首先對(duì)兩組患者進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)， 結(jié)果示兩組患者的年齡、性別、BMI、吸煙、DLD-C、阿司匹林使用率、氯吡格雷使用率、他汀使用率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與無MACE組相比， MACE組LVEF較低， 而NT-proBNP則顯著升高；ACEI/ARB及β受體阻斷劑使用率較低；同時(shí)高血壓病史患者比例減低， 而糖尿病病史患者比例升高；NLRP3在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 3 Logistic回歸分析 經(jīng)過獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)低LVEF值， 高NT-proBNP值， ACEI/ARB及β受體阻斷劑使用率低， 糖尿病史和NLRP3高表達(dá)是冠心病患者M(jìn)ACE發(fā)生的危險(xiǎn)因素， 而高血壓病史則是減少M(fèi)ACE發(fā)生的保護(hù)因素。校正上述因素后進(jìn)行多因素Logistic回歸分析表明， NLRP3[OR=8.752， 95%CI （2.052， 37.333）， P=0.003]、NT-proBNP[OR=1.020， 95%CI （1.000， 1.043）， P=0.032]、糖尿病史[OR=6.536， 95%CI （2.511， 17.013）， P<0.001]與冠心病患者M(jìn)ACE發(fā)生呈正相關(guān)， 可作為冠心病不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。見表2。因此Logistic回歸方程為：Logistic（P）=0.032+6.536×糖尿病史+8.752×NLRP3+1.020×NT-proBNP。

3 討論

冠心病住院患者中以急性冠狀動(dòng)脈綜合征最常見， 其病死率、致殘率很高， 主要由不穩(wěn)定斑塊破裂繼發(fā)出血及血栓形成所致。早期發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定斑塊是預(yù)防和治療急性冠狀動(dòng)脈綜合征的根本所在[6-8]。在本研究中， 發(fā)現(xiàn)NLRP3在人外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)水平與冠心病發(fā)病以及冠狀動(dòng)脈狹窄程度呈顯著正相關(guān)， 對(duì)冠心病的發(fā)生發(fā)展具有很強(qiáng)的預(yù)測意義， 這在國內(nèi)外尚屬首次。

既往研究提示， NLRP3炎癥小體參與了動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)的發(fā)生。NLRP3炎癥小體的下游產(chǎn)物白細(xì)胞介素（IL）-1β和IL-18對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的促進(jìn)作用也得到了證明[9-11]。有研究表明， 對(duì)心肌梗死過程中炎癥反應(yīng)進(jìn)行干預(yù)可有效改善心肌梗死癥狀， 減少心肌梗死面積[12-14]。

然而， 至今尚無研究證明NLRP3炎癥小體在人急性心肌梗死患者中的作用， 及其表達(dá)程度對(duì)患者預(yù)后的影響[15]。在本研究中， 根據(jù)心肌梗死出院患者1年內(nèi)MACE的發(fā)生， 分為MACE組及無MACE組。結(jié)果表明低LVEF值， 高NT-proBNP值， ACEI/ARB及β受體阻斷劑使用率低， 糖尿病史和NLRP3高表達(dá)是冠心病患者M(jìn)ACE發(fā)生的危險(xiǎn)因素， 而高血壓病史則是減少M(fèi)ACE發(fā)生的保護(hù)因素。多因素Logistic回歸分析表明， NLRP3、NT-proBNP、糖尿病史可作為冠心病不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。本研究將為今后預(yù)防和治療冠狀動(dòng)脈病變提供有力的支持， 為預(yù)防和治療冠狀動(dòng)脈病變提供新的途徑。

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