高效液相色譜-質(zhì)譜法分析僵蠶蛋白酶解多肽*

李燦，侯林，于瑞雪，張玉娟

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南 250355； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南 250011； 3.山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，濟(jì)南 250355)

高效液相色譜-質(zhì)譜法分析僵蠶蛋白酶解多肽*

李燦1，2，侯林1，于瑞雪3，張玉娟2

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南 250355； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南 250011； 3.山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，濟(jì)南 250355)

分析僵蠶蛋白酶解多肽類成分的相對(duì)分子質(zhì)量和氨基酸組成。采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用正離子模式進(jìn)行分析，以Hola C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，2.7 μm)為分離色譜柱，以0.05%甲酸水溶液和0.05%甲酸-乙腈溶液為流動(dòng)相，根據(jù)質(zhì)譜一級(jí)、二級(jí)碎片離子信息，確定酶解多肽類相對(duì)分子質(zhì)量信息和氨基酸組成。僵蠶樣品經(jīng)酶解后得到相對(duì)分子質(zhì)量在500～1 000之間的多肽，經(jīng)LC-MS分析，多肽由低于10個(gè)的氨基酸組成。高效液相色譜-質(zhì)譜法分析平臺(tái)可用于分析多肽化合物的相對(duì)分子質(zhì)量和氨基酸組成，這有利于酶解多肽的生物活性分析。

僵蠶；酶解多肽；氨基酸；相對(duì)分子質(zhì)量

由多個(gè)氨基酸以肽鍵為橋梁相互連接而生成的化合物稱為肽。一般而言，由低于10個(gè)氨基酸組成的肽叫做寡肽或低聚肽，超過10個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽，50個(gè)以上氨基酸脫水生成的多肽為蛋白質(zhì)?，F(xiàn)代研究表明，作為藥用動(dòng)物的生物活性物質(zhì)，蛋白質(zhì)和多肽具有廣闊的應(yīng)用前景。近年來隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的不斷發(fā)展，研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)，蛋白多肽是區(qū)別于蛋白質(zhì)的一類具有特殊生理活性的物質(zhì)，具有特異性強(qiáng)、生理活性高和生物功能明確等優(yōu)勢(shì)，涉及到信號(hào)識(shí)別、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化等生理功能［1-2］。賴仞［3］認(rèn)為天然活性蛋白多肽既是解析生命現(xiàn)象必備的“分子探針與解密器”，也是發(fā)現(xiàn)與確立新藥靶點(diǎn)的有力工具以及新藥創(chuàng)制的優(yōu)質(zhì)先導(dǎo)分子。

僵蠶為蠶蛾科昆蟲蠶幼蟲期感染白僵菌而致死的干燥全蟲，含有蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、草酸銨、有機(jī)酸、香豆素、黃酮、多糖、揮發(fā)油、白僵菌素、核苷、酶類以及微量元素等成分［4-5］，具有抗驚厥、抗凝、抗腫瘤、抗氧化、鎮(zhèn)靜催眠、降血糖的作用［6-9］。作為僵蠶的主要活性物質(zhì)，蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸具有抗凝作用［10-11］。近年來廣大學(xué)者對(duì)其化學(xué)成分的研究已經(jīng)取得階段性成果［5-12］，但對(duì)僵蠶多肽組成的研究鮮見報(bào)道。反相高效液相色譜具有高分離度的特點(diǎn)，是分離純化蛋白多肽類藥物的有效方法之一，質(zhì)譜具有研究物質(zhì)組成和結(jié)構(gòu)方面以及測(cè)序的優(yōu)勢(shì)，因此筆者采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析僵蠶中酶解多肽的氨基酸組成［13-15］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜系統(tǒng)：UltiMate 3000型，配有SRD-3600型脫氣機(jī)、HPG-3400SD型四元泵、WPS-3000TSL型自動(dòng)進(jìn)樣器、ANAL YTICAL TCC-30000SD型柱溫箱，美國賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

高分辨率質(zhì)譜：Q Exactive型，美國賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

電子天平：01193-YP601N 型，上海精密科學(xué)儀器有限公司；

高速離心機(jī)：D-37520 Osterode型，美國Thermo Fisher公司；

數(shù)控超聲波清洗器：KQ-250DE型，昆山市超聲儀器有限公司；

僵蠶：蛾科昆蟲家蠶4～5齡的幼蟲感染體白僵菌而致死的干燥體；

甲醇、乙腈：色譜純；

實(shí)驗(yàn)用水為屈臣氏蒸餾水。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Halo C18柱(100 mm×2.1 mm，2.7 μm，美國Advanced Materials Technology公司)；流量：0.3 mL／min；進(jìn)樣體積：1 μL；柱溫：45℃；進(jìn)樣室溫度：4℃；流動(dòng)相：A為0.05%甲酸-水溶液，B為0.05%甲酸-乙腈溶液，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI)；采用正離子模式全掃描檢測(cè)；鞘氣流量：45 L／min；輔助氣流量：10 L／min；輔助氣耐熱溫度：30℃；噴霧電壓：3.0 kV；毛細(xì)管溫度：275℃；質(zhì)譜分辨率：70 000 FWHM(m／z200)；掃描范圍：m／z100～1 200；碰撞電壓：900 V。

1.3 供試品溶液的制備

精密秤取僵蠶5 g，胃蛋白酶160 μg酶解，加水45 mL(以乙酸調(diào)節(jié)pH為1.5)，于42℃水浴2 h，再于85℃水浴滅活15 min，將滅活后提取液以3 000 r／min離心15 min，取上清液抽濾，濾液用純水定容至50 mL，超濾后冷凍干燥，得到相對(duì)分子質(zhì)量為500～1 000的樣品。

精密稱取上述樣品2 mg，置于100 mL的容量瓶中，加20 mL超純水超聲(250 W，40 kHz)10 min，用一次性膠頭滴管定容至標(biāo)線，過0.22 μm濾膜于進(jìn)樣小瓶中，得待測(cè)樣品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品色譜圖和質(zhì)譜圖

按1.2儀器工作條件測(cè)定樣品溶液，得樣品溶液的總離子流色譜圖(見圖1)及質(zhì)譜圖(見圖2)。由圖1中可以看出，樣品中蛋白多肽類成分色譜峰主要分布在42～47 min。提取樣品酶解多肽區(qū)段m／z500～1 000質(zhì)譜圖，對(duì)總離子流圖中42.31 min(記為a分子)、44.62 min(記為b分子)、45.44 min(記為c分子)、46.27 min(記為d分子) 4個(gè)色譜峰進(jìn)行氨基酸序列解析。

圖1 樣品總離子流色譜圖

圖2 樣品總質(zhì)譜圖

2.2 氨基酸序列解析

樣品在42.31 min(a分子)酶解肽的一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖如圖3、圖4所示。

圖3 a分子一級(jí)質(zhì)譜圖

圖4 a分子二級(jí)質(zhì)譜圖

一級(jí)質(zhì)譜圖中m／z1 155為［M+H］+離子峰，電荷數(shù)為1，說明a相對(duì)分子質(zhì)量為1 154，氨基酸的平均相對(duì)分子質(zhì)量為128，根據(jù)氮律a分子應(yīng)含有偶數(shù)個(gè)氮原子，推斷a為八肽化合物。m／z1 155離子失去一分子蘇氨酸(119 Da)、一分子水(18 Da)和一分子羥基(17 Da)生成m／z1 001離子。m／z1 001離子失去一分子亮氨酸(131 Da)或異亮氨酸(131 Da)和一分子谷氨酸(147 Da)生成m／z741離子。m／z741離子生成m／z529離子有4種情況：(1)m／z741離子失去一分子甘氨酸(75 Da)和一分子組氨酸(147 Da)生成m／z529離子；(2)m／z741離子失去一分子脯氨酸(115 Da)和一分子天冬酰胺(115 Da)生成m／z529離子；(3)m／z741離子失去兩分子脯氨酸(115 Da)生成m／z529離子；(4)m／z741離子失去兩分子天冬酰胺(115 Da)生成m／z529離子。m／z529離子失去一分子亮氨酸(131 Da)或異亮氨酸(131 Da)和一分子色氨酸(204 Da)生成m／z212離子。最后生成m／z149離子為甲硫氨酸。

綜上所述，a分子肽鏈有以下幾種情況：(1)蘇氨酸-［亮氨酸／異亮氨酸-谷氨酸］-［甘氨酸-組氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-色氨酸］-甲硫氨酸；(2)蘇氨酸-［亮氨酸／異亮氨酸-谷氨酸］-［脯氨酸-天冬酰胺］-［亮氨酸／異亮氨酸-色氨酸］-甲硫氨酸；(3)蘇氨酸-［亮氨酸／異亮氨酸-谷氨酸］-脯氨酸-脯氨酸-［亮氨酸／異亮氨酸-色氨酸］-甲硫氨酸；(4)蘇氨酸-［亮氨酸／異亮氨酸-谷氨酸］-天冬酰胺-天冬酰胺-［亮氨酸／異亮氨酸-色氨酸］-甲硫氨酸。

樣品在44.62 min(b分子)處的一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖如圖5、圖6所示。一級(jí)質(zhì)譜圖中m／z1 012［M+H］+離子峰，電荷數(shù)為1，說明b相對(duì)分子質(zhì)量為1 011，氨基酸的平均相對(duì)分子質(zhì)量為128，根據(jù)氮律b分子應(yīng)含奇數(shù)個(gè)氮原子，推斷b為七肽化合物。m／z1 012失去一分子甘氨酸(75 Da)，一分子亮氨酸或異亮氨酸(131 Da)和一分子色氨酸(204 Da)生成m／z638離子。m／z638離子失去一分子甘氨酸(75 Da)、一分子脯氨酸(115 Da)或天冬酰胺(115 Da)生成m／z466離子。m／z466離子失去一分子脯氨酸(115 Da)或天冬酰胺(115 Da)和一分子賴氨酸(182 Da)生成m／z187的離子。

圖5 b分子一級(jí)質(zhì)譜圖

圖6 b分子二級(jí)質(zhì)譜圖

綜上所述，c分子肽鏈存為［甘氨酸-亮氨酸／異亮氨酸-色氨酸］-［甘氨酸-脯氨酸／天冬酰胺］-賴氨酸。

樣品在45.44 min(c分子)處的一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖如圖7、圖8所示。一級(jí)質(zhì)譜圖中m／z969［ M+H］+離子峰電荷數(shù)為1，說明c分子的相對(duì)分子質(zhì)量為968，氨基酸的平均相對(duì)分子質(zhì)量為128，根據(jù)氮律c分子應(yīng)含偶數(shù)個(gè)氮原子，推斷c為八肽化合物。m／z969離子生成m／z648離子有兩種情況：(1)m／z969離子失去一分子甘氨酸(75 Da)、一分子纈氨酸(117 Da)和一分子苯丙氨酸(165 Da)生成m／z648離子；(2)m／z969離子失去一分子甘氨酸(75 Da)、一分子天門冬氨酸(133 Da)和一分子甲硫氨酸(149 Da)生成m／z648離子。m／z648離子失去一分子亮氨酸(131 Da)或異亮氨酸(131 Da)和一分子天門冬氨酸(115 Da)或一分子脯氨酸(115 Da)生成m／z420離子。m／z420離子生成m／z168離子有4種情況：(1)m／z420離子失去一分子丙氨酸和一分子酪氨酸生成m／z168離子；(2)m／z420離子失去一分子甲硫氨酸和一分子半胱氨酸生成m／z168離子；(3)m／z420離子失去一分子脯氨酸或一分子天冬酰胺和一分子組氨酸生成m／z168離子；(4)m／z420離子失去一分子苯丙氨酸和一分子絲氨酸生成m／z168離子，最后生成的m／z147離子為谷氨酸(147 Da)。

圖7 c分子一級(jí)質(zhì)譜圖

圖8 c分子二級(jí)質(zhì)譜圖

綜上所述，c分子肽鏈存在以下幾種可能：(1)［甘氨酸-纈氨酸-苯丙氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［丙氨酸-酪氨酸］-谷氨酸；(2)［甘氨酸-纈氨酸-苯丙氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［甲硫氨酸-半胱氨酸］-谷氨酸；(3)［甘氨酸-纈氨酸-苯丙氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［天冬氨酸／脯氨酸-組氨酸］-谷氨酸；(4)［甘氨酸-纈氨酸-苯丙氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［苯丙氨酸-絲氨酸］-谷氨酸；(5)［甘氨酸-天門冬氨酸-甲硫氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［丙氨酸-酪氨酸］-谷氨酸；(6)［甘氨酸-天門冬氨酸-甲硫氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［甲硫氨酸-半胱氨酸］-谷氨酸；(7)［甘氨酸-天門冬氨酸-甲硫氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［天冬氨酸／脯氨酸-組氨酸］-谷氨酸；(8)［甘氨酸-天門冬氨酸-甲硫氨酸］-［亮氨酸／異亮氨酸-天冬氨酸／脯氨酸］-［苯丙氨酸-絲氨酸］-谷氨酸。

樣品在46.27 min(d分子)處的質(zhì)譜圖如圖9、圖10所示。一級(jí)質(zhì)譜圖中m／z1 180［ M+H］+離子峰，電荷數(shù)為1，說明d的相對(duì)分子質(zhì)量為1 179，氨基酸的平均相對(duì)分子質(zhì)量為128，根據(jù)氮律d分子應(yīng)含奇數(shù)個(gè)氮原子，推斷d為九肽化合物。m／z1 180失去一分子半胱氨酸(121 Da)生成m／z1 059離子。m／z1 059失去一分子組氨酸(155 Da)和一分子天門冬氨酸(133 Da)生成m／z789離子。m／z789離子失去一分子酪氨酸(181 Da)生成m／z608離子。m／z608離子失去一分子丙氨酸(89 Da)和一分子谷氨酸(147 Da)生成m／z390離子。m／z390離子生成m／z129離子有三種情況：(1)m／z390離子失去兩分子甘氨酸(75 Da)和一分子谷氨酸(147 Da)生成m／z129離子；(2)m／z390離子失去一分子甘氨酸、一分子丙氨酸和一分子天門冬氨酸生成m／z129離子；(3)m／z390離子失去一分子甘氨酸(75 Da)、一分子纈氨酸(117 Da)和一分子絲氨酸(105 Da)生成m／z129離子。

圖9 d分子一級(jí)質(zhì)譜圖

圖10 d分子二級(jí)質(zhì)譜圖

綜上所述，d分子肽鏈存在以下幾種情況：(1)半胱氨酸-［組氨酸-天門冬氨酸］-酪氨酸-［丙氨酸-谷氨酸］-［甘氨酸-甘氨酸-谷氨酸］；(2)半胱氨酸-［組氨酸-天門冬氨酸］-酪氨酸-［丙氨酸-谷氨酸］-［甘氨酸-丙氨酸-天門冬氨酸］；(3)半胱氨酸-［組氨酸-天門冬氨酸］-酪氨酸-［丙氨酸-谷氨酸］-［甘氨酸-纈氨酸-絲氨酸］。

3 結(jié)語

對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在500～1 000的多肽樣品進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜分析，根據(jù)多肽樣品的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖，可對(duì)多肽樣品的部分氨基酸序列進(jìn)行排列而不能得到準(zhǔn)確的氨基酸序列。筆者推測(cè)這與串聯(lián)質(zhì)譜的碰撞電壓選擇有關(guān)，碰撞電壓的確定與碎片離子的數(shù)量密切相關(guān)，在本實(shí)驗(yàn)中碎片離子信息不完整，這對(duì)多肽樣品氨基酸序列的確定帶來困難。通過譜圖解析發(fā)現(xiàn)，有部分無法鑒別的碎片離子峰，筆者推測(cè)這與多肽樣品受體內(nèi)體外環(huán)境因素的影響，氨基酸殘基出現(xiàn)氧化、還原、水解、脫酰胺等作用從而穩(wěn)定性降低有關(guān)。因此對(duì)僵蠶樣品氨基酸序列的確定還需要進(jìn)一步的研究。

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全國環(huán)境空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)網(wǎng)建成

“十二五”以來，我國初步形成了滿足大氣環(huán)境常規(guī)監(jiān)測(cè)需求的技術(shù)體系，發(fā)展了PM2.5、臭氧和揮發(fā)性有機(jī)物VOCs等在線監(jiān)測(cè)技術(shù)。目前我國已經(jīng)設(shè)置國家、省、市、縣4個(gè)層級(jí)的5 000余個(gè)監(jiān)測(cè)站點(diǎn)，環(huán)境空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)網(wǎng)已經(jīng)建成。

專家介紹，為了保障監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)真實(shí)有效，監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)在每個(gè)國控站點(diǎn)產(chǎn)生后，原始數(shù)據(jù)第一時(shí)間分別直傳城市站、省級(jí)站以及中國環(huán)境監(jiān)測(cè)總站平臺(tái)，3個(gè)層面同時(shí)獲得站點(diǎn)的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。1 436個(gè)國控監(jiān)測(cè)站都建立了遠(yuǎn)程質(zhì)控系統(tǒng)，具備變化留痕、異常報(bào)警等功能。

中國環(huán)境監(jiān)測(cè)總站大氣室主任宮正宇介紹說，目前從全國6個(gè)層面來說，我國已建成一個(gè)龐大又復(fù)雜的環(huán)境空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)，包括城市的以及區(qū)域空氣的、背景空氣的、酸雨的、沙塵暴，還有溫室氣體的監(jiān)測(cè)。

(1)70余個(gè)超級(jí)站助力“精準(zhǔn)治霾”。在龐大又復(fù)雜的監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)中，組分網(wǎng)不僅可以測(cè)量PM2.5濃度，還能測(cè)算污染物中到底有哪些成分，有助于重污染成因的分析，為“精準(zhǔn)治霾”提供數(shù)據(jù)支持。目前已經(jīng)建成超級(jí)站點(diǎn)70多個(gè)。

為了加強(qiáng)京津冀及周邊區(qū)域重污染天氣的應(yīng)對(duì)，開展大氣污染成因分析和應(yīng)急措施效果的評(píng)估，目前建立的組分網(wǎng)覆蓋了北京、天津、石家莊、鄭州、濟(jì)南等20個(gè)城市。中國環(huán)境監(jiān)測(cè)總站分析室副主任呂怡兵表示，對(duì)于監(jiān)測(cè)點(diǎn)位的布設(shè)，它主要考慮各個(gè)城市典型區(qū)域環(huán)境質(zhì)量的狀況，特別是關(guān)注污染傳輸通道，因?yàn)樗赡芙忉寘^(qū)域污染來源，作為聯(lián)防聯(lián)治，聯(lián)防聯(lián)控的技術(shù)依據(jù)。

(2)衛(wèi)星遙感與地面環(huán)境數(shù)據(jù)相互印證。目前，衛(wèi)星環(huán)境遙感監(jiān)測(cè)已在國內(nèi)多領(lǐng)域應(yīng)用，衛(wèi)星實(shí)時(shí)傳輸?shù)沫h(huán)境數(shù)據(jù)無法修改，可與地面站數(shù)據(jù)相互印證。環(huán)保部利用國產(chǎn)環(huán)境一號(hào)衛(wèi)星、高分系列衛(wèi)星等數(shù)據(jù)，結(jié)合國外的遙感數(shù)據(jù)，實(shí)時(shí)獲得PM2.5、PM10、二氧化硫、二氧化氮、灰霾、沙塵暴、秸稈焚燒等指標(biāo)的監(jiān)測(cè)結(jié)果。我國已經(jīng)建立顆粒物遙感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)，分為衛(wèi)星遙感和地基遙感兩部分?，F(xiàn)在京津冀區(qū)域污染監(jiān)測(cè)一體化，衛(wèi)星看到的是區(qū)域、水平分布，雷達(dá)看到的是污染物垂直分布，形成了區(qū)域三維立體監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)。此外，無人機(jī)監(jiān)測(cè)的手段，也可對(duì)大氣污染源、違規(guī)排放等進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

(儀器信息網(wǎng))

無錫建成食品安全快檢中心

不久前，無錫市食品安全快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中心建成并投入試運(yùn)行。實(shí)驗(yàn)中心占地250 m2，分為理化實(shí)驗(yàn)室、無菌實(shí)驗(yàn)室、接樣室和檔案室。實(shí)驗(yàn)室整體布局合理，突出開放性，具備良好的透視效果，配備中央空調(diào)和新風(fēng)系統(tǒng)，具有良好的防風(fēng)、防塵、控溫設(shè)施。實(shí)驗(yàn)室配備有拉曼光譜儀、酶標(biāo)儀、細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)儀、十六合一快檢儀等實(shí)驗(yàn)儀器，以及其它輔助儀器。建成的實(shí)驗(yàn)中心可對(duì)乳制品、肉制品、豆制品、糧油制品、茶葉、果蔬、蜂蜜、糖果、冷凍食品、飲料類產(chǎn)品、酒類產(chǎn)品、調(diào)味品等主要食品品種開展快速檢測(cè);具備食品主要營養(yǎng)指標(biāo)、食品添加劑、污染物及微生物等指標(biāo)的驗(yàn)證能力;可滿足食品質(zhì)量安全快速篩查的要求。

實(shí)驗(yàn)中心正式投入運(yùn)行后，將在發(fā)現(xiàn)、解決食品安全風(fēng)險(xiǎn)隱患以及大型活動(dòng)安全保障、食品安全應(yīng)急事件處置等方面，發(fā)揮重要作用。為食品安全監(jiān)管提供有效支撐，進(jìn)一步保護(hù)廣大市民“舌尖上的安全”。

(儀器信息網(wǎng))

Analysis of Enzymolysis Polypeptide from Bombyx Batryticatus by LC-MS

Li Can1，2, Hou Lin1, Yu Ruixue3, Zhang Yujuan2
(1．College of Pharmacology of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China; 2. The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250011, China; 3．Experiment Center of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)

The relative molecular mass and amino acid composition enzymolysis polypeptide from Bombyx Batryticatus was analyzed. The relative molecular mass information and amino acids of enzymolysis polypeptide were identified by high performance liquid chromatography-mass spectrometry in positive mode using Hola C18(100 mm×2.1 mm, 2.7 μm) column. The mobile phase was 0.05% formic acid water solution and 0.05% formic acid-acetonitrile solution. The relative molecular mass of enzymolysis polypeptide was 500-1 000 Da, the number of amino acid of enzymolysis polypeptide was less than 10. The LC-MS analysis platform can be used to analyze the relative molecular mass and amino acid of peptide by enzymolysis, which is in favor of the analysis of biological activity about enzymatic polypeptide.

Bombyx Batryticatus; enzymolysis polypeptide; amino acid; relative molecular mass

O657.7

:A

:1008-6145(2017)02-0011-05

10.3969／j.issn.1008-6145.2017.02.003

*山東中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013-060)

聯(lián)系人：李燦；E-mail： licanhk@163.com

2016-01-04